黃政舉， 何 峰， 溫海深， 李吉方， 司玉鳳， 趙君麗， 任源遠(yuǎn)， 邢 德， 徐捷凱(中國(guó)海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院， 山東 青島 266003)

?

半滑舌鰨IGF1基因編碼區(qū)的多態(tài)性與生長(zhǎng)性狀及表達(dá)的相關(guān)性分析?

黃政舉， 何 峰??， 溫海深， 李吉方， 司玉鳳， 趙君麗， 任源遠(yuǎn)， 邢 德， 徐捷凱
(中國(guó)海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院， 山東 青島 266003)

胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF1)在魚類生長(zhǎng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)過程中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。本研究檢測(cè)了半滑舌鰨(Cynoglossussemilaevis)IGF1基因外顯子的單核苷酸多態(tài)性(SNPs)，分析其基因型與生長(zhǎng)性狀、血液生化指標(biāo)的關(guān)系及基因表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果顯示，IGF1基因外顯子5的884bp處一個(gè)位點(diǎn)發(fā)生突變，此突變處堿基C變?yōu)锳，即C884A，此突變發(fā)生于終止密碼子之后，并且發(fā)生在WD40結(jié)構(gòu)域，可能會(huì)對(duì)基因的轉(zhuǎn)錄、表達(dá)和生長(zhǎng)性狀產(chǎn)生影響。此位點(diǎn)與體重(P<0.05)、去內(nèi)臟重(P<0.05)呈顯著相關(guān)性，AA基因型的體重和去內(nèi)臟重顯著高于AB基因型(P<0.05)，AA基因型的尿素含量顯著大于AB基因型(P<0.05)，AA基因型的mRNA表達(dá)量也顯著高于AB基因型(P<0.05)。研究表明，IGF1基因編碼區(qū)的多態(tài)性對(duì)半滑舌鰨的生長(zhǎng)性狀、血液生化指標(biāo)和基因表達(dá)有顯著影響，IGF1基因可以作為選擇育種的一種分子標(biāo)記，從遺傳學(xué)的角度輔助半滑舌鰨優(yōu)良品種的分子選育。

IGF1基因； 半滑舌鰨； 單核苷酸多態(tài)性； 血液生化； 生長(zhǎng)性狀； 基因表達(dá)

半滑舌鰨(Cynoglossussemilaevis)主要分布在中國(guó)的渤海和黃海，是一種暖溫性近海大型底層魚類，其味道鮮美、經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高，近年來已成為中國(guó)重要的養(yǎng)殖品種之一[1]。半滑舌鰨的雄性個(gè)體比雌性個(gè)體小的多，因此人們需要優(yōu)選雄性個(gè)體，以加速雄性個(gè)體的品質(zhì)改良[2]。單核苷酸多態(tài)性被廣泛應(yīng)用于相關(guān)的候選基因的研究，是第三代重要的遺傳標(biāo)記技術(shù)[3]。

生長(zhǎng)激素-胰島素樣生長(zhǎng)因子(GH-IGF)系統(tǒng)在調(diào)控脊椎動(dòng)物生長(zhǎng)的過程中扮演著重要的角色。生長(zhǎng)激素軸(Somatotropicaxis)是由下丘腦-垂體-生長(zhǎng)激素-靶器官上有關(guān)激素及其受體所組成的神經(jīng)內(nèi)分泌軸[4]。垂體產(chǎn)生的生長(zhǎng)激素(GH)首先與生長(zhǎng)激素結(jié)合蛋白(GHBP)結(jié)合，經(jīng)血液運(yùn)至肝細(xì)胞，然后與肝細(xì)胞上的受體相結(jié)合，刺激IGF1的產(chǎn)生[4]。然后IGF1與IGF1結(jié)合蛋白結(jié)合，經(jīng)血液運(yùn)送至各組織器官，與各組織器官上的IGF1受體相結(jié)合，促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)與分化[4]。在魚類，IGF主要受GH在生長(zhǎng)促進(jìn)方面的影響并且受生長(zhǎng)的自分泌、旁分泌和內(nèi)分泌方面的調(diào)控[5-6]。GH能夠促進(jìn)各種組織中IGF1和IGF2的合成。一些研究顯示，肝中注射GH可以提高虹鱒(Oncorhynchusmykiss)、斑點(diǎn)叉尾鮰(Ictaluruspunctateus)和黑鯽(Carassiuscarassius)的肝中IGF1和IGF2的合成[7-9]。IGF1和IGF2分別與受體結(jié)合，通過PI3K/AKT/TOR和MAPK/ERK 2條信號(hào)通路來促進(jìn)骨骼肌的生長(zhǎng)[10]。

IGF1在生長(zhǎng)和發(fā)育的過程中起著重要的作用。IGF1基因的單核苷酸多肽性可以影響動(dòng)物的代謝、生長(zhǎng)、壽命和疾病等相關(guān)性狀[11-12]?；虻亩鄳B(tài)性在哺乳動(dòng)物(尤其是家畜、家禽)中研究的較多，如印度肉雞IGF1基因啟動(dòng)子的多態(tài)性對(duì)于其基因表達(dá)和生長(zhǎng)有顯著影響[13]。一年生菜牛的IGF1基因的多態(tài)性與體重有顯著關(guān)系[12]。而魚類IGF1基因的報(bào)道還比較少，文獻(xiàn)[14]研究了黑鱸(Micropterussalmoides)IGF1基因5′端區(qū)域的多態(tài)性與生長(zhǎng)性狀有顯著相關(guān)性[14]。Ma等人克隆了半滑舌鰨IGF1基因并研究了其mRNA的表達(dá)[15]。IGF1的主要功能是調(diào)節(jié)生長(zhǎng)和發(fā)育，其mRNA表達(dá)量高意味著生長(zhǎng)能力強(qiáng)。如日本花鱸(Lateolabraxjaponicus)IGF1基因mRNA的表達(dá)與生長(zhǎng)性狀有著重要的關(guān)系[16]。銀鮭(Oncorhynchuskisutch) 肝中IGF1基因mRNA的表達(dá)水平也與生長(zhǎng)性狀顯著相關(guān)[17]。這些結(jié)果表明，IGF1基因mRNA的表達(dá)水平可能是生長(zhǎng)的一個(gè)指標(biāo)，同時(shí)也說明IGF1基因可以作為動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育的候選基因。在魚類生長(zhǎng)指標(biāo)中，血液指標(biāo)是魚類生長(zhǎng)的一個(gè)很重要的反映特征，血液反映了魚類的生理生化狀態(tài)，也可以評(píng)價(jià)其健康狀況、營(yíng)養(yǎng)水平以及環(huán)境中水質(zhì)的情況等。性別、種類、年齡、選用的飼料和疾病等都可以影響魚類血液的生理生化指標(biāo)[18]。基因型的改變對(duì)魚類血液生理生化指標(biāo)也可能產(chǎn)生影響。因此，研究魚類血液生化指標(biāo)對(duì)于研究魚類的生長(zhǎng)也很重要。

半滑舌鰨IGF1基因(GenBank Accession No. FJ608667.1)是由5個(gè)外顯子組成的，包含937個(gè)核苷酸，編碼197個(gè)氨基酸。目前，還沒有半滑舌鰨IGF1基因多態(tài)性的報(bào)道，本研究的目的是尋找半滑舌鰨IGF1基因多態(tài)性，研究其對(duì)半滑舌鰨的生長(zhǎng)性狀、血液生化、基因表達(dá)的影響，以篩選出大量的雄性優(yōu)良品種，來改善遺傳資源。

1 材料與方法

1.1 材料

半滑舌鰨來自于青島嘉洋高新水產(chǎn)育苗養(yǎng)殖基地。隨機(jī)選取親本來源相同的72尾同齡的二齡雄魚，這些雄魚具有類似的尺寸，平均體長(zhǎng)32.00cm和平均體重225.00g。將其飼養(yǎng)在自然海水中(溫度(20±0.5) ℃；O2≥4ng/mL；光周期(H∶L=14∶10))，喂食商業(yè)飼料。

在實(shí)驗(yàn)室暫養(yǎng)1d，不進(jìn)行投喂。對(duì)魚進(jìn)行麻醉，靜脈取血。解剖各組織器官于分子管中，放于-80 ℃，便于隨取隨用，同時(shí)稱量魚的肝重、性腺重和去內(nèi)臟重。計(jì)算肝重指數(shù)、性腺指數(shù)：

肝重指數(shù)HSI=[肝重/(體重-去內(nèi)臟重)]×100，

性腺重指數(shù)GSI=[性腺重/(體重-去內(nèi)臟重)]×100。

1.2 方法

1.2.1 DNA提取和PCR擴(kuò)增 用酚-氯仿法提取肌肉組織中的基因組DNA，用瓊脂糖凝膠電泳法檢測(cè)DNA完整性，并用超微核酸蛋白測(cè)定儀(BD-1000)測(cè)量DNA的濃度。根據(jù)Genebank中IGF1基因的cDNA的序列，用primer premier 5軟件設(shè)計(jì)了5個(gè)引物(見表1)。PCR總反應(yīng)體系共25 μL，包括模板DNA 1 μL，dNTP 0.2 mmol/L，10×PCR buffer 2.5 μL，引物各0.20 mmol/L和Easy Taq DNA酶0.5 U。反應(yīng)程序?yàn)殡p鏈DNA，94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性45 s，退火45 s，72 ℃延伸45 s，40個(gè)循環(huán)；72 ℃ 10 min。擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物用瓊脂糖凝膠進(jìn)行檢測(cè)。

表1 半滑舌鰨IGF1基因外顯子的擴(kuò)增引物

1.2.2 PCR-SSCP檢測(cè) 6 μL PCR產(chǎn)物與10.8 μL變性buffer(98%去離子甲酰胺,0.01 mol/L EDTA, 0.025%亞甲基藍(lán),0.025%溴酚藍(lán)，0.2%甘油)混合，在PCR儀中98 ℃ 10 min，然后立即放于冰箱-20 ℃靜置10 min以上。變性的PCR產(chǎn)物進(jìn)行10%的聚丙烯酰胺凝膠電泳，在冰箱4 ℃下電泳7～10h。然后電泳結(jié)果進(jìn)行銀染，進(jìn)行DNA分型。剩余的PCR產(chǎn)物用DNA膠回收試劑盒(TIANGEN，China)進(jìn)行純化,藍(lán)白斑篩選后進(jìn)行不同基因型的測(cè)序。

1.2.3 激素和血液生理生化指標(biāo)測(cè)定 用125I放射免疫測(cè)定法檢測(cè)血液中的四碘甲狀腺原氨酸(T3)和三碘甲狀腺原氨酸(T4)水平[19]。另外，作者用自動(dòng)化分析儀檢測(cè)了一些血液生化指標(biāo)像總蛋白、血清白蛋白、血尿酸、尿素、總膽固醇、甘油三酸酯、葡萄糖、鈣和磷(邁瑞公司BS-180,中國(guó))。

1.2.4 RNA提取和反轉(zhuǎn)錄(RT-PCR) 用RNA提取試劑盒從50 mg肝組織中提取總RNA含量(TakaRa,日本)，用分光光度計(jì)檢測(cè)RNA濃度。A260/A280在1.8～2.0之間。1 μL RNA由反轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄成cDNA(Bio-Rad)。使用反轉(zhuǎn)錄引物(上游引物：5′-AGTCCTTCGCTGCTGTT-3′，下游引物：5′-CCCTGTTGGTTGGCTTA-3′)進(jìn)行基因148個(gè)核苷酸的擴(kuò)增。反轉(zhuǎn)錄體系為20 μL，包括2 μL cDNA模板，每個(gè)樣本0.4 μL反轉(zhuǎn)錄引物，10 μL SYBR熒光染料，0.4 μL ROX參照染料，0.6 μL RNA滅菌水。反應(yīng)條件為95 ℃30 s，40個(gè)循環(huán)95 ℃5 s變性，60 ℃34 s退火，72 ℃30 s延伸。每個(gè)樣重復(fù)3次，使用18s作為參照基因(引物：上游:5′-GAATTGACGGAAGGGCACCACCAG-3′;下游:5′-ACTAAGAACGGCCATGCACCACCAC-3′)[20]。相關(guān)表達(dá)由2-ΔΔCt方法計(jì)算獲得，計(jì)算結(jié)果與18s核糖體RNA進(jìn)行對(duì)比。

1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 利用Stat View軟件9.0版，通過單因素方差分析(one-way ANOVA)其突變位點(diǎn)和相關(guān)[21]。利用鄧肯多重比較分析不同基因型均值的差異性。

2 結(jié)果

2.1 PCR擴(kuò)增

提取72尾半滑舌鰨基因組DNA為模板，利用設(shè)計(jì)的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。各引物均得到了特異性條帶，其中只有引物5在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)到多態(tài)性，所以本文只對(duì)引物5進(jìn)行詳細(xì)介紹，其他不再贅述。引物5的PCR擴(kuò)增結(jié)果如圖1所示。擴(kuò)增產(chǎn)物單一，且無非特異性擴(kuò)增，可以進(jìn)行下一步的SSCP分析。

圖1 外顯子5引物的PCR擴(kuò)增結(jié)果

2.2 PCR-SSCP檢測(cè)

采用PCR-SSCP法檢測(cè)IGF1基因的單核苷酸多態(tài)性。從SSCP膠圖中發(fā)現(xiàn)引物5的擴(kuò)增片段都存在3種基因型，根據(jù)后續(xù)的測(cè)序結(jié)果將3種基因型分別定義為AA、AB和BB型，其SSCP分析結(jié)果及3種基因型的定義如圖2所示?；蛐皖l率和等位基因頻率見表2，AA、AB和BB的基因型頻率分別為22.22%、61.11%和16.67%。A和B的等位基因頻率分別為52.78%和47.22%。

圖2 IGF1基因的基因分型

位點(diǎn)Locus基因頻率Genotypesfrequencies/%AAAB等位基因頻率Allelefrequencies/%BBABSNP22．2261．1116．6752．7847．22

2.3 各基因型序列

通過銀染檢測(cè)到外顯子5具有多態(tài)性，經(jīng)進(jìn)一步測(cè)序檢測(cè)到突變位點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)有1個(gè)SNP突變，即C884A。AA、AB和BB 3種基因型的序列如圖3所示。

圖3 IGF1基因的AA、AB和BB基因型的序列測(cè)定

2.4 突變位點(diǎn)基因結(jié)構(gòu)位置

通過(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/lexington/lexington.cgi?cachecdqs=QM3-data_cache-25 8478F792FA36ED-5284342CEECE1)預(yù)測(cè)IGF1基因的結(jié)構(gòu)(見圖4)，在850～1075bp之間有一個(gè)結(jié)構(gòu)域WD40。

2.5 基因型與性狀的相關(guān)分析

作者做了72條魚和11個(gè)生長(zhǎng)性狀之間關(guān)系的分析，了解到基因型與體重(P<0.05)和去內(nèi)臟重(P<0.05)顯著相關(guān)(見表3)。AA基因型的體重和去內(nèi)臟重顯著高于AB基因型(P<0.05)(見圖5)。

圖4 WD40結(jié)構(gòu)位置的預(yù)測(cè)

性狀TraitsIGF1三碘甲狀腺原氨酸T3①/ng·mL-1四碘甲狀腺原氨T4②/μg·dL-1體長(zhǎng)/cmLength體重/gWeight體高/cmHeightFvaluePvalueFvaluePvalueFvaluePvalueFvaluePvalueFvaluePvalueFvaluePvalue1．2570．3000．8260．4480．9080．4141．3960．2643．5290．043?2．0340．149性狀Traits去內(nèi)臟重③/g頭長(zhǎng)/cmLiverweight眼徑/cmGonadweight肝臟指數(shù)HSI性腺指數(shù)GSIFvaluePvalueFvaluePvalueFvaluePvalueFvaluePvalueFvaluePvalue3．7110．037?0．3240．7261．0290．3702．3280．1150．5000．612

注：*：P<0.05.①Triiodothyrontne；②Tetraiodothyronine；③Weight without viscera

(誤差線上的不同字母表示差異顯著(P<0.05)。Different letters above the error bars means significant difference atP<0.05.)

圖5 不同基因型生長(zhǎng)性狀的多重比較

Fig.5 Multiply comparison of growth trait among different genotypes

2.6 血液生化與生長(zhǎng)性狀的相關(guān)分析

通過分析顯示AA基因型的尿素(UREA)值顯著高于AB基因型(P<0.05)，其結(jié)果列于表4。

2.7 基因型與表達(dá)的相關(guān)分析

肝中IGF1基因外顯子5各基因型的表達(dá)量進(jìn)行比較分析，結(jié)果顯示AA基因型的表達(dá)量顯著高于AB基因型(P<0.05)(見圖6)。

3 討論

生長(zhǎng)激素(GH)/胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF1)軸是人類體細(xì)胞生長(zhǎng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，并且其基因在研究生長(zhǎng)個(gè)體的突變上是重要的候選基因[22]。IGF是一類多肽，它調(diào)節(jié)著脊椎動(dòng)物生長(zhǎng)和細(xì)胞代謝的各個(gè)階段[14]。特別是IGF1，它在脊椎動(dòng)物代謝活動(dòng)，生長(zhǎng)和發(fā)育中扮演著重要的角色。在魚類，IGF1在生長(zhǎng)的調(diào)控方面也起到了重要的作用[23]。

對(duì)于生長(zhǎng)軸基因，文獻(xiàn)[21]已經(jīng)報(bào)道了半滑舌鰨GH基因和生長(zhǎng)激素受體基因(GHR)的多態(tài)性對(duì)于生長(zhǎng)性狀的顯著影響，而對(duì)于IGF1基因研究的還比較少。黑鱸IGF1基因5′端區(qū)域的多態(tài)性與生長(zhǎng)性狀有著密切的關(guān)系[14]。印度山羊在不同年齡階段IGF1基因的單核苷酸多態(tài)性對(duì)生長(zhǎng)性狀有著重要作用[24]。類似的，在本文的研究中，發(fā)現(xiàn)半滑舌鰨IGF1基因外顯子5上發(fā)生突變，即C884A，與體重和去內(nèi)臟重有著顯著的關(guān)系(P<0.05)。因?yàn)檫z傳多態(tài)性可能對(duì)編碼蛋白質(zhì)區(qū)域以外的部分造成影響，非編碼序列的RNAs也可能對(duì)基因表達(dá)產(chǎn)生影響[25]。類跨膜通道蛋白1(TMC1)基因外顯子3的非編碼序列的突變被證明與伊朗耳聾家族有關(guān)[26]。與本研究相類似，突變位點(diǎn)位于終止密碼子之后，但是仍對(duì)生長(zhǎng)性狀，血液生化和基因表達(dá)產(chǎn)生顯著影響。特別是該位點(diǎn)位于WD40區(qū)，這種典型的結(jié)構(gòu)：從N端開始，有11～24個(gè)生長(zhǎng)激素二肽的殘基，從C端開始有40個(gè)色氨酸-天冬氨酸的殘基所以叫WD40[27]。在GH和WD之間有一個(gè)保守的核心，持久穩(wěn)定地發(fā)揮著促進(jìn)作用，像螺旋槳一般，蛋白質(zhì)通過這個(gè)平臺(tái)可以穩(wěn)固或可逆地結(jié)合在一起。這個(gè)像螺旋槳一樣的核心實(shí)際上是由幾葉“槳片”組成的，每葉“槳片”又是由四股反向平行的Β折疊片組成的；作者猜測(cè)這些物質(zhì)或多或少通過重復(fù)(這種復(fù)制拷貝是可以觀察到的)二聚化的形式來形成更大的結(jié)構(gòu)；每一個(gè)WD40重復(fù)序列形成了一葉“槳片”中的三股，和下一葉中的一股；C端的WD40重復(fù)序列完成了第一個(gè)WD40重復(fù)結(jié)構(gòu)的“槳片”結(jié)構(gòu)，這樣一個(gè)閉合環(huán)狀的結(jié)構(gòu)就是“螺旋槳”的一部分?！奥菪龢表敳亢偷撞勘砻娴臍埢鶎⒈挥糜谡{(diào)節(jié)與其它蛋白或配體的相互作用[27]。884 bp處C→A的突變正好位于WD結(jié)構(gòu)域，其在生物體中主要參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，轉(zhuǎn)錄調(diào)控以及RNA剪切等基因調(diào)控作用。真核細(xì)胞中WD40結(jié)構(gòu)域在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中，參與前體mRNA的加工以及細(xì)胞骨架的集合裝配等多種多樣的功能，因此其位點(diǎn)的突變必然對(duì)基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)產(chǎn)生作用[28]。

表4 不同基因型生理生化指數(shù)的相關(guān)性

Note： *：P<0.05

(誤差線上的不同字母表示差異顯著(P<0.05)。Different letters above the error bars means significant difference atP<0.05.)

圖6 不同基因型的相對(duì)表達(dá)量

Fig.6 Relative expression of different genotypes

在早期的研究中，肝在總蛋白、血清白蛋白、血尿酸、尿素、總膽固醇、甘油三酸酯、葡萄糖、鈣和磷的基礎(chǔ)代謝上起著關(guān)鍵的作用，肝的損傷可能會(huì)改變血液生化指標(biāo)，并且肝的損傷會(huì)影響一系列結(jié)構(gòu)和生化組成上的改變[29]，這與本文的研究相一致。肝中提取IGF1基因序列發(fā)生突變對(duì)于血液生化有著顯著的影響，所以，AA基因型的尿素含量顯著高于AB基因型(P<0.05)。這可能是因?yàn)楦沃蠭GF1基因型的改變影響著其DNA的結(jié)構(gòu)，對(duì)代謝(尿素)產(chǎn)生影響。

Nolten等報(bào)道在心臟、鰓、肌肉、腸和肝中都發(fā)現(xiàn)了IGF1肽，但實(shí)時(shí)定量PCR分析顯示，肝比其它的組織有更高的IGF1基因表達(dá)量[30]。另外，IGF1基因的表達(dá)量的降低是胎兒生長(zhǎng)受限的關(guān)鍵因素[31]。對(duì)于兔子來說，其高生長(zhǎng)的個(gè)體會(huì)有更高的IGF1基因的表達(dá)量[32]。這些研究都表明，IGF1基因的表達(dá)與生長(zhǎng)是正相關(guān)關(guān)系。Carnevali等研究了黑鱸、斑點(diǎn)叉尾鮰、和羅非魚(Tilapia)的IGF1基因，結(jié)果都表明，IGF1基因有著更高的mRNA的表達(dá)量的基因型有著更高的生長(zhǎng)表現(xiàn)型[33-35]。這與本文的研究一致，AA基因型的體重和去內(nèi)臟重顯著高于AB基因型(P<0.05)，這和AA基因型的基因表達(dá)量也顯著高于AB基因型(P<0.05)是一致的。這些研究都更加確認(rèn)了肝IGF1在半滑舌鰨生長(zhǎng)的過程中起了關(guān)鍵的作用。盡管外顯子5上的突變發(fā)生在終止子之后，但其仍然對(duì)基因表達(dá)有著很大的調(diào)控作用，所以在表現(xiàn)型上才有很大的差別?？梢赃x擇AA基因型進(jìn)行培育，擴(kuò)大養(yǎng)殖，從而培育出更加優(yōu)良的性狀。

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責(zé)任編輯 朱寶象

The Polymorphism in the Coding Region ofIGF1 Related to mRNA Expression Pattern and Growth Traits of Half-Smooth Tongue Sole (Cynoglossussemilaevis)

HUANG Zheng-Ju, HE Feng, WEN Hai-Shen, LI Ji-Fang, SI Yu-Feng, ZHAO Jun-Li, REN Yuan-Yuan, XING De, XU Jie-Kai
(College of Fishery, Ocean University of China, Qingdao 266003, China)

Insulin-like growth factor 1 (IGF1) is involved in the growth endocrine regulation of many fish species. The purpose of this study was to detect the single nucleotide polymorphism (SNP) in the coding region ofIGF1 and analyze the relationships among genotypes, growth traits, serum levels of physiological and biochemical indexes and gene expression in half smooth tongue sole (Cynoglossussemi-laevis). A mutation at 884 bp position was detected in exon 5 ofIGF1, which was named C884A. This mutation occurred after termination codon in the structure of WD40 domain, thus influenced the transcription, growth characteristics among others. This mutation has significant correlations with body weight (P<0.05) and viscera weight (P<0.05). AA genotype was significantly higher than AB genotype in weight (P<0.05) and viscera weight (P<0.05). The UERA content of AA genotype was significantly higher than the AB genotype (P<0.05). At the same time, the expression of AA genotype was also significantly higher than AB genotype (P<0.05). These results indicated that the polymorphism ofIGF1 in encoding region was significantly associated with the growth traits, blood physiological and biochemical indexes and gene expression in half smooth tongue. The mutation can be used as a molecular marker for selection breeding. Our findings may assist molecular breeding of good varieties from a genetic perspective and improve the production in half smooth tongue sole.

IGF1 gene； half-smooth tongue sole； SNPS； biochemical index； growth trait； gene expression

國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2012AA10A403)；國(guó)家大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(201310423043)資助

2014-06-17；

2014-09-25

黃政舉(1987-)，女，碩士生，研究方向：魚類生理與繁育。

?? 通訊作者： E-mail:hefengouc@ouc.edu.cn

S917.4

A

1672-5174(2015)08-019-07

10.16441/j.cnki.hdxb.20140194