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        3例單增李斯特菌感染的病原學(xué)、臨床及流行病學(xué)特征分析

        2015-03-17 01:47:01張正東鄧建平葉長蕓
        中國人獸共患病學(xué)報 2015年7期
        關(guān)鍵詞:單增李斯特血清型

        王 紅,王 艷,張正東,陳 曦,鄧建平,肖 波,劉 祥,王 斌,文 海,范 暉,葉長蕓,李 群

        3例單增李斯特菌感染的病原學(xué)、臨床及流行病學(xué)特征分析

        王 紅1,王 艷2,張正東1,陳 曦1,鄧建平1,肖 波1,劉 祥1,王 斌1,文 海1,范 暉1,葉長蕓2,李 群1

        目的 分析四川省自貢市2014年3例單增李斯特菌感染的臨床特征及其病原學(xué)特征。方法 搜集臨床病例信息;采用血清分型,脈沖場凝膠電泳技術(shù)和多位點序列分型方法對單增李斯特菌進行分子分型。結(jié)果 3例患者均為免疫力低下人群,有發(fā)熱和敗血癥癥狀;3株單增李斯特菌中2株為1/2a血清型、ST8型,1株為1/2b血清型、ST778型,3株P(guān)FGE帶型均不同。結(jié)論 免疫力低下人群易受單增李斯特菌侵襲性感染。通過與國內(nèi)外食品及病人單增李斯特菌相關(guān)流行學(xué)資料比較,提示國外流行克隆群以及國內(nèi)某些流行型菌株可引起國內(nèi)李斯特菌病散發(fā),甚至成為將來暴發(fā)的隱患。

        單增李斯特菌;臨床特征;流行病學(xué)特征

        單增李斯特菌(Listeriamonocytogenes)是一種不生芽孢、無莢膜的革蘭氏染色陽性短桿菌,廣泛存在于多種自然環(huán)境中,繼而污染各種肉類,海產(chǎn)品,即食食品以及動物飼料等,伺機引起人類和動物嚴(yán)重的感染。單增李斯特菌的感染表現(xiàn)主要分為兩大類,第一類屬于侵襲性感染,是指在無菌部位分離出單增李斯特菌。易感人群是老幼及免疫力低下人群,表現(xiàn)為腦膜炎、腦膜腦炎和敗血癥,具有較高的死亡率。圍生期婦女感染單增李斯特菌表現(xiàn)為流產(chǎn)、早產(chǎn)、甚至死產(chǎn),若累及胎兒,則胎兒表現(xiàn)為新生兒敗血癥和新生兒腦膜炎。第二類屬于非侵襲性感染,當(dāng)免疫力正常的成年人誤食入被大量該菌污染的食品后,會出現(xiàn)發(fā)熱性胃腸炎癥狀,這種類型的感染多為自限性,故易被忽視。

        李斯特菌病在國外的報道很多,歐美多個發(fā)達國家曾于上世紀(jì)末頻繁發(fā)生由單增李斯特菌引起暴發(fā)事件[1],至今仍有零星暴發(fā)[2]。我國目前沒有單增李斯特菌暴發(fā)的相關(guān)報道,但存在由該菌引起的散發(fā)病例報告[3]。我國已于上世紀(jì)90年代建立了針對食品中單增李斯特菌的監(jiān)測,本市曾于2005-2007對部分食品展開單增李斯特菌污染情況調(diào)查[4]。然而目前關(guān)于國內(nèi)人群中單增李斯特菌的感染狀況尚不清楚,雖然有少數(shù)病例報告,但缺乏病原學(xué)特征信息。本研究自當(dāng)?shù)匾凰C合性醫(yī)院和一所婦幼保健院收集得到3例從血液或腦脊液中分離出單增李斯特菌的病例,對其進行簡要報道,同時對分離到的單增李斯特菌進行血清學(xué)鑒定,運用脈沖場凝膠電泳(Pulsed-field Gel Electrophoresis, PFGE)技術(shù)和多位點序列分型(Multi-locus Sequence Typing, MLST)方法對菌株進行分子分型,以了解臨床分離的單增李斯特菌病原學(xué)特征。

        1 材料與方法

        1.1 標(biāo)本 2014年自貢市第一人民院2份,血培養(yǎng)標(biāo)本和血培養(yǎng)標(biāo)本/腦脊液標(biāo)本各1份;自貢市婦幼保健院1份血培養(yǎng)標(biāo)本。

        1.2 單增李斯特菌分離 血液標(biāo)本為醫(yī)院臨床血培養(yǎng)報警陽性且革蘭氏染色為革蘭氏陽性桿菌的標(biāo)本,純培養(yǎng)后可采用梅里埃API李斯特菌生化鑒定系統(tǒng)進行鑒定,實驗所采用的單增李斯特菌標(biāo)準(zhǔn)菌株CMCC54001購自中國藥品生物制品檢定所。

        1.3 血清型分型、PFGE及MLST分型方法 對所有分離得到的單增李斯特菌,采用日本DenkaSeiken公司的血清抗體,按照產(chǎn)品說明書進行血清型鑒定操作。按照巴斯德單增李斯特菌多位點序列分型數(shù)據(jù)庫操作流程http://www.pasteur.fr/recherche/genopole/PF8/mlst/Lmono.html,針對單增李斯特菌7對管家基因(abcZ,blgA,cat,dapE,dat,ldh,lhkA)部分片段進行PCR 擴增并測序,得到菌株的序列型。根據(jù)美國CDC PulseNet的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程對單增李斯特菌進行脈沖場電泳分型分析,以AscⅠ對菌株進行酶切,菌株的PFGE圖像用BioNumerics(Version5.0)軟件進行聚類分析。

        2 結(jié) 果

        2.1 病例概況 病例1是一位89歲高齡的女性糖尿病患者,發(fā)熱至39 ℃,并伴有輕微頭痛,有輕微嘔吐現(xiàn)象,血象和C反應(yīng)蛋白升高,血培養(yǎng)查見單增李斯特菌。病例2是一位48歲女性患者,因多發(fā)性骨髓瘤接受馬法蘭及大劑量激素治療,導(dǎo)致患者免疫力低下。反復(fù)發(fā)熱2 d,發(fā)熱至39.8 ℃,有昏迷現(xiàn)象?;颊哐髾z測結(jié)果顯示白細(xì)胞數(shù)低、中性粒細(xì)胞減少、血小板數(shù)低。顱內(nèi)感染嚴(yán)重,腦水腫征象明顯。血培養(yǎng)和腦脊液培養(yǎng)結(jié)果均為李斯特菌陽性?;颊咦罱K因腦疝形成,呼吸心跳驟停死亡。病例3是一位早產(chǎn)新生兒(34周出生),其母親有子宮內(nèi)膜炎。出生后23 h因發(fā)熱1 h入院,體溫最高升至37.9 ℃,伴明顯氣粗,鼻扇。血象檢測結(jié)果提示感染嚴(yán)重,被診斷為新生兒敗血癥?;純貉囵B(yǎng)李斯特菌陽性。

        2.2 單增李斯特菌血清型、PFGE和MLST分型分析 前兩例患者的單增李斯特菌血清型為1/2a型,MLST都是ST8型,第3例患者分離到的單增李斯特菌血清型為1/2b型,MLST型為ST778型。3株單增李斯特菌有3種不同PFGE帶型(如圖1所示)。

        圖1 3株病人分離單增李斯特菌PFGE聚類圖

        Fig.1 PFGE cluster for 3 strains ofListeriamonocytogenesfrom patients

        3 討 論

        單增李斯特菌作為一種重要的食源性疾病病原菌,尤其對于免疫力低下和圍生期婦女造成嚴(yán)重危害,死亡率高達20%~50%[5]。本研究中3例患者均屬于免疫力低下人群,患者1為高齡且伴有嚴(yán)重的消耗性疾病,患者2因多發(fā)性骨髓瘤長期接受免疫抑制劑治療,患者3為剛出生不久的早產(chǎn)兒,這3種類型正是免疫力低下人群的典型代表。臨床癥狀方面,雖然有著各自不同的其他病癥表現(xiàn),但均發(fā)生了不同程度的發(fā)熱和敗血癥癥狀。由于李斯特菌病沒有特異性的臨床表現(xiàn),這也是該菌易被臨床忽略的原因之一,一旦抗感染取得療效,就不再去追究何種病原菌導(dǎo)致,這可能是我國散發(fā)性李斯特菌少見報道的原因之一。通過本研究三例病例的報道,也再次提示應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格注意免疫力低下人群的飲食,避免食入被單增李斯特菌污染的食品,以免造成嚴(yán)重后果。

        我國各地食品監(jiān)測結(jié)果表明存在不同程度的單增李斯特菌污染食品現(xiàn)象,尤其是肉類制品,越來越多由該菌引起的病例報告被報道[3],說明無論是食品污染還是臨床感染都逐漸被國內(nèi)衛(wèi)生和研究部門認(rèn)識和重視。目前國內(nèi)相關(guān)研究人員已對食品中單增李斯特菌的分子流行病學(xué)特征開展了一些研究,方維煥等人[6]對中國東部食品和環(huán)境中的單增李斯特菌進行了基因分型,葉長蕓等人[7]對中國12個省(直轄市)食品來源的單增李斯特菌進行了血清分型和基因分型。然而由于臨床菌株收集困難,針對病人來源的單增李斯特菌相關(guān)研究罕見,可能的原因為目前國內(nèi)并未建立有關(guān)該菌感染人群的監(jiān)測系統(tǒng),以及臨床上認(rèn)識不足。本研究中病例數(shù)極為有限,且沒有當(dāng)?shù)赝谑称穪碓淳甑南嚓P(guān)信息,無法對菌株的來源進行追溯,但所得的菌株信息可以作為該菌在本地流行的背景信息,為持續(xù)性監(jiān)測打下基礎(chǔ)。

        本研究的三例病例單增李斯特菌均分離自人體的無菌部位,屬于侵襲性感染,病例之間沒有流行病學(xué)相關(guān)性,雖然病例一和病例二具有相同的ST型,但PFGE帶型截然不同,從分子水平也進一步證實三者之間不具有流行病學(xué)相關(guān)性,且同時期未見集體中毒事件的報道,故三例病例屬于散發(fā)病例。Sylvain等人[8]分析了來自5大洲300株單增李斯特菌的基因型,對其主要克隆群的全球分布情況進行了描述,分析顯示家系Ⅰ中CC3是一種流行克隆群,在世界各地都廣泛存在。本研究中的第三例病例菌株為ST778,屬于CC3。這提示在國外流行的菌株型別,同樣也造成國內(nèi)散發(fā)感染。ST8型是國內(nèi)食品源菌株第二大流行菌株型[7],由于暴露的可能性較大,造成感染的幾率也隨之增大。PFGE分型對于散發(fā)病例分離菌株的意義沒有暴發(fā)溯源明顯,但其分型結(jié)果可作為數(shù)據(jù)積累,為將來可能的暴發(fā)溯源提供數(shù)據(jù)支持。

        本研究對本市2014年的三例散發(fā)李斯特菌病臨床表現(xiàn)進行了描述,同時著眼于從這三位臨床病人分離到的單增李斯特菌病原學(xué)特征,利用血清分型,PFGE,MLST分型對菌株進行分型分析,并與國內(nèi)外相關(guān)數(shù)據(jù)進行了比較。菌株數(shù)量極為有限,但打破了國內(nèi)臨床感染菌株病原信息的空白。同時也提示臨床相關(guān)機構(gòu)認(rèn)識并重視李斯特菌病這一食源性疾病,盡快建立國內(nèi)病人源性單增李斯特菌感染的監(jiān)測體系。

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        [2]Lomonaco S, Verghese B, Gerner-Smidt P, et al. Novel epidemic clones ofListeriamonocytogenes, United States, 2011[J]. Emerg Infect Dis, 2013, 19(1): 147-150. DOI:10.3201/eid1901.121167

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        [4]Wang H, Zhang ZD, Chen HM, et.al. Investigation on pollution status ofListeriamonocytogenesin food and drug sensitivity in Zigong[J]. Mod Prevent Med, 2008, 5(23): 4679-4680,4683 (in Chinese) 王紅, 張正東, 陳燕梅, 等. 自貢市食品中單核細(xì)胞增生李斯特菌污染狀況的調(diào)查及藥敏結(jié)果分析[J]. 現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2008, 5(23): 4679-4680,4683.

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        [7]Wang Y, Zhao A, Zhu R, et al. Genetic diversity and molecular typing ofListeriamonocytogenesin China[J]. BMC Microbiol, 2012, 12: 119. DOI:10.1186/1471-2180-12-119

        [8]Chenal-Francisque V, Lopez J, Cantinelli T, et al. Worldwide distribution of major clones ofListeriamonocytogenes[J]. Emerg Infect Dis, 2011, 17: 1110-1112. DOI:10.3201/eid/1706.101778

        Clinical and epidemiological characteristics of three cases ofListeriamonocytogenesinfection

        WANG Hong1,WANG Yan2,ZHANG Zheng-dong1,CHEN Xi1,DENG Jian-ping1,XIAO Bo1,LIU Xiang1,WANG Bin1,WEN Hai1,FAN Hui1,YE Chang-yun2,LI Qun1

        (1.ZigongCenterforDiseaseControlandPrevention,Zigong643000,China;2.StateKeyLaboratoryforInfectiousDiseasePreventionandControl,NationalInstituteforCommunicableDiseaseControlandPrevention,ChineseCenterforDiseaseControlandPrevention,Beijing102206,China)

        We aimed to investigate the currentListeriamonocytogenes(L.monocytogenes) infection and the molecular characteristics ofL.monocytogenesfrom clinical cases in Zigong, Sichuan Province, China. Detailed clinical information of the patients was collected. ThreeL.monocytogenesisolated from the patients were characterized by serotyping, pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) and multi-locus sequence typing (MLST). Results showed thatL.monocytogenescaused fever and sepsis in all of the three patients, who had decreased immune system function. Two of the three isolations were serotype 1/2a and ST8, and the rest one was serotype 1/2b and ST778. The pulsotypes of the isolations were different from each other. Compared with the epidemiological data ofL.monocytogenesboth in China and abroad, the epidemic clones in other countries and the clones with high prevalence in China caused sporadic listeriosis in China, even might cause outbreaks. It is suggested that the surveillance ofL.monocytogenesin clinic and food products should be built up and enhanced, respectively.

        Listeriamonocytogenes; clinical characteristics; epidemiological characteristics

        s: Li Qun, Email: lqzgcdc@163.com;Ye Chang-yun, Email: yechangyun@icdc.cn

        國家重大傳染病防治科技重大專項(No. 2011ZX10004-001,No. 2013ZX10004-101),傳染病預(yù)防控制國家重點實驗室開放課題(No.2012SKLID304)聯(lián)合資助(王紅和王艷同等貢獻)

        李群,Email: lqzgcdc@163.com 葉長蕓,Email: yechangyun@icdc.cn

        1.四川省自貢市疾病預(yù)防控制中心,自貢 643000 2.中國疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所,傳染病預(yù)防控制國家重點實驗室,北京 102206

        10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2015.07.018

        R378

        A

        1002-2694(2015)07-0678-03

        2015-03-03;

        2015-06-08

        Supported by the National Major Science and Technology Project of Prevention and Control in Significant Infectious Disease (Nos. 2011ZX10004-001 & 2013ZX10004-101) and the open project from State Key Laboratory for Infectious Disease Prevention and Control (No. 2012SKLID304)

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