江雁瓊，賀端明，伍慧妍

(廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第五醫(yī)院，廣州 510700)

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·論 著·

慢性阻塞性肺疾病急性加重期HBP與CD64的表達(dá)及意義

江雁瓊，賀端明，伍慧妍

(廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第五醫(yī)院，廣州 510700)

目的 探討慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者中性粒細(xì)胞CD64與肝素結(jié)合蛋白(HBP)的表達(dá)及意義。方法 收集2013年7月至2014年11月該院慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者200例作為研究對象，其中COPD穩(wěn)定期100例，AECOPD 100例。使用流式細(xì)胞術(shù)及免疫熒光法測定CD64，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測定HBP，同時(shí)檢測血清降鈣素原(PCT)、超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)及白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)，評價(jià)HBP與CD64對AECOPD的診斷價(jià)值。AECOPD患者同時(shí)送檢痰液進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，送檢鼻拭子進(jìn)行PCR呼吸道病毒檢測明確病因，比較不同病原體所致AECOPD的HBP與CD64的水平差異。結(jié)果 AECOPD患者HBP與CD64水平分別為(86.84±38.91)ng/mL、(6.85±2.82)MFI，明顯高于COPD穩(wěn)定期患者的(56.24±24.58)ng/mL、(3.32±1.09)MFI，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。細(xì)菌感染與混合感染AECOPD患者HBP與CD64水平均明顯高于病毒感染及非感染的AECOPD患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。HBP與CD64對細(xì)菌感染AECOPD的敏感性均在85%以上，特異性在90%以上，明顯高于混合感染及病毒感染AECOPD。結(jié)論 HBP與CD64可作為AECOPD的輔助診斷指標(biāo)。

慢性阻塞性肺疾病； 急性加重期； 肝素結(jié)合蛋白； CD64

慢性阻塞性肺疾病(COPD) 為氣道氣流不完全可逆性受限，且持續(xù)進(jìn)行性，是一種常見的肺部疾病，嚴(yán)重影響著人類的健康。急性加重期(AECOPD)不但使病情進(jìn)一步惡化，還造成患者呼吸功能持續(xù)下降最終導(dǎo)致呼吸衰竭甚至死亡[1]。最近研究表明肝素結(jié)合蛋白(HBP)可被用于膿毒血癥早期輔助診斷[2]。也有研究發(fā)現(xiàn)，中性粒細(xì)胞所表達(dá)的CD64也是全身感染，尤其是細(xì)菌感染的早期敏感指標(biāo)之一[3]。在此背景下，本研究擬探討AECOPD患者中性粒細(xì)胞中HBP與CD64的表達(dá)及意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇本院2013年7月至2014年11月呼吸科住院及門診就診的COPD患者200例作為研究對象，其中COPD穩(wěn)定期100例，AECOPD者100例。根據(jù)AECOPD病因再分為細(xì)菌感染組(n=28)、混合感染組(n=33)、病毒感染組(n=27)及非感染組(n=12)，比較COPD、AECOPD及其各亞組HBP及CD64的表達(dá)。兩種分組下，各組一般資料比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，AECOPD及COPD穩(wěn)定期的診斷均根據(jù)美國胸科學(xué)會歐洲呼吸學(xué)會聯(lián)合發(fā)布的慢性阻塞性肺疾病診斷、處理和預(yù)防全球策略(2011年修訂版)指南[4]。排除急性加重期病程超過3 d者，排除半個(gè)月內(nèi)有抗菌藥物使用史，無呼吸系統(tǒng)以外部位細(xì)菌感染者，無高血壓、冠心病、糖尿病、自身免疫病等嚴(yán)重疾患者。

1.2 檢測方法 血清HBP檢測采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)進(jìn)行；CD64指數(shù)采用EPICS-XL型流式細(xì)胞儀(美國Beckman公司)測定；聚合酶鏈反應(yīng)(PCT)免疫熒光檢測法，法國梅里埃公司生產(chǎn)；采用免疫透射比濁法檢測hs-CRP水平；AECOPD患者同時(shí)送檢痰液進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)及鼻拭子進(jìn)行PCR呼吸道病毒檢測明確病因及病原體。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS 15.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。正態(tài)分布且方差齊性者采用One-Way ANOVA方差分析，組間兩兩比較采用Bonferroni檢驗(yàn)；正態(tài)分布但方差不齊者采用Welch近似方差分析，組間兩兩比較采用Dunnett T3檢驗(yàn)；非正態(tài)分布者采用Kruskal-Wallis非參數(shù)檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 COPD穩(wěn)定期與AECOPD患者HBP、CD64、PCT、hs-CRP及白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)比較 結(jié)果顯示AECOPD HBP與CD64水平，明顯高于COPD穩(wěn)定期，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。AECOPD患者PCT、hs-CRP及WBC同樣明顯高于COPD穩(wěn)定期患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表1。

2.2 不同病因下AECOPD患者HBP、CD64、PCT、hs-CRP及WBC比較 結(jié)果顯示AECOPD不同病因中，細(xì)菌感染與混合感染患者HBP、CD64、PCT及hs-CRP水平均明顯高于病毒感染及非感染，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；單純細(xì)菌感染患者HBP、CD64與PCT水平均明顯高于混合感染組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表2。

表1 COPD穩(wěn)定期與AECOPD患者HBP、CD64、PCT、hs-CRP及WBC比較

表2 不同病因下AECOPD 患者HBP、CD64、PCT、hs-CRP及WBC比較

注：與非感染相比，*P<0.05；與病毒感染相比，#P<0.05；與混合感染相比，△P<0.05。

2.3 HBP、CD64、PCT及hs-CRP對不同病原體感染AECOPD診斷的敏感性及特異性 結(jié)果顯示HBP與CD64對細(xì)菌感染的敏感性均在85%以上，特異性在90%以上明顯高于混合感染及病毒感染。見表3。

表3 HBP、CD64、PCT及hs-CRP對不同病原體感染

3 討 論

COPD的發(fā)病機(jī)制至今仍未完全清楚，一般認(rèn)為COPD發(fā)病與T淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞所造成的炎性反應(yīng)合并蛋白酶、抗蛋白酶平衡破壞，氧化應(yīng)激反應(yīng)等多種因素有關(guān)[4]，支氣管內(nèi)多種炎癥細(xì)胞被激活后會合成分泌白細(xì)胞介素-8(IL-8)、白三烯B4、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)等多種炎性因子，導(dǎo)致杯狀細(xì)胞黏化生、增生且黏液細(xì)胞分泌功能增加，最終肺間質(zhì)纖維化及肺組織結(jié)構(gòu)重建。AECOPD是COPD進(jìn)行性加重的主要原因，大部分由細(xì)菌、病毒感染引起，也可為環(huán)境污染、大量吸煙、心肺功能不全等非感染因素引起。AECOPD患者氣道中性粒細(xì)胞明顯增加，肺實(shí)質(zhì)炎性反應(yīng)較穩(wěn)定期更為嚴(yán)重[5]。部分患者獲得準(zhǔn)確的病原學(xué)證據(jù)較為困難，感染病原體在單從臨床表現(xiàn)上不易區(qū)分。近年來，有不少研究在尋找能夠反映AECOPD的早期診斷標(biāo)記物，以便早期診斷，早期干預(yù)，預(yù)防COPD的進(jìn)展和惡化[6-7]。

HBP主要是由多形核中性粒細(xì)胞(PMN)受外界刺激后合成釋放，健康人血中HBP水平均很低，當(dāng)出現(xiàn)感染時(shí)，部分細(xì)菌遷移至血管內(nèi)，細(xì)菌本身及細(xì)菌相關(guān)毒素均可刺激中性粒細(xì)胞尤其是PMN表達(dá)釋放HBP，導(dǎo)致血中HBP水平明顯升高。Linder等[8]研究已發(fā)現(xiàn)腦脊液中HBP的水平與顱內(nèi)感染存在相關(guān)性。細(xì)菌性腦膜炎患者HBP水平明顯高于病毒性腦膜炎患者及對照組。Chew等[9]的研究則表明HBP有助于感染性休克的早期診斷，呼吸系統(tǒng)感染、泌尿系統(tǒng)感染及消化系統(tǒng)感染等局部感染伴隨休克患者HBP水平明顯高于沒有合并休克的患者，可見HBP與急性感染關(guān)系更為密切。AECOPD病因各異，大部分是由細(xì)菌感染引起，病毒感染也較常見，本研究發(fā)現(xiàn)在AECOPD患者，HBP表達(dá)較COPD穩(wěn)定期要明顯增加，尤其是細(xì)菌感染及混合感染所致，對于細(xì)菌感染引起的AECOPD，HBP診斷的敏感性為86.9%，特異性為93.4%，在早期診斷中具有一定的意義。

CD64為IgG的Fc段受體，屬于免疫球蛋白超家族成員。CD64可識別位于免疫球蛋白的Fc片段，CD64表達(dá)受多種細(xì)胞因子調(diào)節(jié)，是細(xì)胞免疫與體液免疫之間的重要橋梁。CD64主要分布于外周血中的單核細(xì)胞、樹突細(xì)胞表面及巨噬細(xì)胞，在中性粒細(xì)胞表面正常狀態(tài)下一直低水平表達(dá)，在受到粒細(xì)胞集落刺激因子(GCSF)和細(xì)菌細(xì)胞壁的脂多糖(LPS)、干擾素-γ(IFN-γ)等多種分子刺激時(shí)，中性粒細(xì)胞表面的CD64表達(dá)量大大增加[10]。研究表明，中性粒細(xì)胞表面CD64表達(dá)水平增加，是全身感染尤其是細(xì)菌感染早期診斷的敏感指標(biāo)之一，同時(shí)與疾病嚴(yán)重程度及預(yù)后密切相關(guān)[11]。本研究發(fā)現(xiàn)AECOPD患者CD64表達(dá)水平較COPD穩(wěn)定期要明顯升高，與HBP類似，在細(xì)菌感染及混合感染患者CD64水平更高，且具有一定的特異性與敏感性，可以作為AECOPD早期診斷指標(biāo)。

綜上所述，AECOPD患者HBP與CD64水平明顯升高，尤其是細(xì)菌感染所引起的AECOPD，因此HBP與CD64可作為AECOPD的輔助診斷指標(biāo)，至于兩者是否與AECOPD患者心肺功能及預(yù)后有相關(guān)性，仍有待進(jìn)一步研究。

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Expression and significance of HBP and CD64 in acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease

JIANGYan-qiong,HEDuan-ming,WUHui-yan

(FifthAffiliatedHospital,GuangzhouMedicalUniversity,Guangzhou,Guangdong510700,China)

Objective To investigate the expression and significance of CD64 and neutrophils heparin binding protein(HBP) in acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease(COPD).Methods 200 inpatients and outpatients with COPD in the respiration department of our hospital from July 2013 to November 2014 were collected as the research subjects,including 100 cases of stable COPD and 100 cases of acute exacerbation COPD (AECOPD).CD64 expression was measured by using flow cytometry and immunofluorescence,the expression of HBP was detected by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA),meanwhile serum procalcitonin (PCT),high-sensitivity C-reactive protein (hs-CRP) and white blood cell(WBC) count were detected for conducting the comparative analysis.The diagnostic value of HBP and CD64 in AECOPD was evaluated.In AECOPD patients,the sputum bacterial culture was performed and the nasal swab was conducted the PCR respiratory virus detection for determining pathogens.The HBP and CD64 expressions in AECOPD caused by different etiologies were compared.Results The expressions of HBP and CD64 in AECOPD were (86.84±38.91)ng/mL and (6.85±2.82)MFI,which were significantly higher than(56.24±24.58) ng/mL and (3.32±1.09)MFI in stable COPD,the differences were statistically significant(P<0.01).In different etiologies of AECOPD,the HBP and CD64 expressions in bacterial infection and mixed infection were significantly higher than those in viral infection and non-infection,the differences were statistically significant(P<0.01).The susceptibility and specificity of HBP and CD64 to bacterial infection were more than 85% and more than 90%,which were significantly higher than those to mixed infection and viral infection.Conclusion HBP and CD64 can be used as the assisted diagnostic markers of AECOPD.

COPD; acute exacerbation; HBP; CD64

江雁瓊,女，本科，副主任技師,主要從事臨床免疫學(xué)研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.14.024

A

1672-9455(2015)14-2034-03

2015-02-25

2015-04-15)