馬 雷，高英英，辛 華，李 升，曲燦華，于海東，李雅江，孫玉鴻

(1.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院,黑龍江 佳木斯 154003;2.佳木斯大學(xué)檢驗醫(yī)學(xué)院,黑龍江 佳木斯 154003)

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益母草總堿在治療丙酸睪丸素誘導(dǎo)大鼠前列腺增生模型中的應(yīng)用研究①

馬 雷1，高英英2，辛 華1，李 升1，曲燦華1，于海東1，李雅江1，孫玉鴻1

(1.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院,黑龍江 佳木斯 154003;2.佳木斯大學(xué)檢驗醫(yī)學(xué)院,黑龍江 佳木斯 154003)

目的：探討益母草總堿在治療丙酸睪丸素誘導(dǎo)的大鼠前列腺增生模型中的作用及前列腺增生的發(fā)生機制。方法：以丙酸睪丸素誘導(dǎo)建立模型，再給予益母草總堿治療，處死后立即取前列腺組織，以放射免疫法檢測DHT和T，以免疫組化法檢測EGF、bFGF、TGF-β1平均光密度值。結(jié)果：各實驗組與模型組比較DHT、T都存在顯著性差異，有統(tǒng)計學(xué)意義。各實驗組前列腺組織中EGF、bFGF、TGF-β1平均光密度值與模型組比較都有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論：丙酸睪丸素誘導(dǎo)大鼠前列腺增生模型成立，益母草總堿在治療前列腺增生方面有重要應(yīng)用價值。

益母草總堿；前列腺增生

隨著人口老齡化的加劇，前列腺增生癥(Benign prostatic hyperplasia，BPH)成為老年男性最常見的泌尿系統(tǒng)疾病之一，而且這一趨勢愈演愈烈，無數(shù)老年男性飽受這一病癥的折磨[1]。我國流行病學(xué)數(shù)據(jù)顯示，在進行尸檢時發(fā)現(xiàn)BPH發(fā)病率有向中老年人群蔓延的趨勢，而在60歲以上老年人群發(fā)病率高達63.5%。BPH的臨床表現(xiàn)主要是隨著病情的發(fā)展，出現(xiàn)進行性的排尿困難，最后出現(xiàn)尿潴留，給腎臟及身體帶來傷害，甚至危及人的生命[2]。所以，對BPH發(fā)生機制和治療的研究變得越來越迫切。本實驗利用中藥益母草總堿對丙酸睪丸素造模的BPH大鼠進行治療，探討B(tài)PH的發(fā)生機制，并且對益母草總堿的功效進行評估。

1 資料與方法

1.1 一般資料

①實驗動物：18月齡老年SD雄性大鼠90只，購自佳木斯大學(xué)動物實驗中心。分為6組，每組15只，分別設(shè)置為益母草小劑量組、益母草中劑量組、益母草大劑量組、癃閉舒對照組、模型組、空白對照組。

②試劑：益母草總堿購自咸陽航空一六八生物工程有限公司；癃閉舒膠囊購自石家莊科迪藥業(yè)有限公司；丙酸睪丸素購自河南科倫藥業(yè)有限公司；大鼠雙氫睪酮(Dihydrotestosterone,DHT)，睪酮(Testosterone,T)檢測試劑盒購自南京森貝伽生物科技有限公司；大鼠表皮生長因子(Epidermal growth factor,EGF)、成纖維細胞生長因子(basic Fibroblast growth factor,bFGF)、轉(zhuǎn)化生長因子β1(Transforming growth factor beta1,TGF-β1)免疫組化檢測試劑盒購自上海雅吉生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 丙酸睪丸素誘導(dǎo)老年大鼠BPH模型和給藥 首先將益母草小、中、大劑量組、癃閉舒對照組、模型組5組共75只大鼠去勢，接下來連續(xù)7d給予肌注青霉素待其恢復(fù)。然后連續(xù)30d給予皮下注射丙酸睪丸素4mg/100g，空白對照組只皮下注射4mg/生理鹽水。

自注射丙酸睪丸素第1天起，益母草小、中、大劑量組、癃閉舒對照組、模型組，每天1次分別給予胃飼益母草總堿12.5mg/kg、25mg/kg、50mg/kg、癃閉舒膠囊蒸餾水溶液(用量約為臨床用藥量的10倍)、等量蒸餾水。

1.2.2 大鼠前列腺濕重和前列腺指數(shù)計算：稱大鼠體重后，處死大鼠，仔細摘取前列腺，用濾紙吸干組織表面液體，用電子天平稱取前列腺組織濕重，計算前列腺指數(shù)(前列腺指數(shù)=前列腺濕重mg/鼠體重g)。

1.2.3 顯微鏡下觀察前列腺組織結(jié)構(gòu)：取前列腺組織固定后，送病理科用蘇木精-伊紅染色，用OlympusX51顯微鏡觀察BPH造模成功與否。

1.2.4 大鼠前列腺組織中DHT、T檢測：取200mg前列腺組織，及時勻漿，由放射免疫實驗室專業(yè)人員，嚴格按照試劑使用說明書要求操作，測量前列腺組織中DHT、T水平。

1.2.5 大鼠前列腺組織中EGF、bFGF、TGF-β1平均光密度值檢測：取前列腺組織，用4%甲醛固定保存后，進行免疫組化檢測，計算生長因子的平均光密度值。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 益母草總堿對大鼠前列腺濕重和前列腺指數(shù)的影響

空白對照組與模型組比較分析，可見大鼠前列腺組織的濕重和指數(shù)都有顯著性差異，說明誘導(dǎo)BPH模型成功。各治療組與模型組比較，濕重只有小劑量組有統(tǒng)計學(xué)意義，前列腺指數(shù)只有大劑量組無統(tǒng)計學(xué)意義，并且癃閉舒組存在顯著性差異，見表1。

表1 益母草總堿對大鼠前列腺濕重和前列腺指數(shù)的影響

※與模型組比P<0.05,※※與模型組比P<0.01。

2.2 顯微鏡觀察各試驗組大鼠前列腺組織結(jié)構(gòu)的情況

模型組大鼠前列腺褶皺增多，呈乳頭狀突起，朝向前列腺腺腔內(nèi)部，細胞層次增多，間質(zhì)增厚，腺腔面積明顯縮小，期間可見大量粉紅色分泌物。空白對照組大鼠前列腺褶皺很少，上皮細胞排列整齊一致，細胞間質(zhì)很薄，由單層柱狀上皮組成，腺腔面積較大，分泌物很少。說明使用丙酸睪丸素誘導(dǎo)大鼠BPH模型成功。同模型組比較，癃閉舒給藥組和益母草總堿大、中、小劑量給藥組大鼠前列腺組織都有不同程度的褶皺增生減少、腺腔擴大和間質(zhì)變薄。

2.3 益母草總堿對大鼠前列腺組織中DHT、T的表達水平的影響

各實驗組與模型組比較DHT、T都存在顯著性差異，有統(tǒng)計學(xué)意義，見表2。

表2 各實驗組大鼠前列腺組織中DHT、

※與模型組比P<0.05,※※與模型組比P<0.01。

2.4 益母草總堿對大鼠前列腺組織中EGF、bFGF、TGF-β1的平均值的影響

各實驗組前列腺組織中EGF平均光密度值與模型組比較都有統(tǒng)計學(xué)意義，其中小劑量組和癃閉舒組存在顯著性差異。各組與模型組比較，bFGF平均光密度值都有統(tǒng)計學(xué)意義。各組與模型組比較，TGF-β1平均光密度值都有統(tǒng)計學(xué)意義，其中益母草總堿中、小劑量組和癃閉舒組存在顯著性差異，見表3。

表3 各實驗組大鼠前列腺組織中EGF、bFGF、TGF-β1平均光密度值

※與模型組比P<0.05,※※與模型組比P<0.01。

3 討論

益母草味苦、辛，微寒。分布于全國大部分地區(qū)，可以植物全草入藥，功效為活血調(diào)經(jīng)，利尿消腫，清熱解淋。益母草總堿是益母草發(fā)揮主要功效的組成成分[3]。本課題應(yīng)用益母草總堿治療BPH正符合中醫(yī)藥應(yīng)對 “癃閉”、“淋證”的診治原則。模型組與空白對照組比較，前列腺組織形態(tài)出現(xiàn)褶皺增多，間質(zhì)變厚，腺腔縮小，分泌物量多。同時，模型組大鼠的前列腺濕重，尤其是前列腺指數(shù)顯著大于空白對照組。充分說明本實驗利用丙酸睪丸素誘導(dǎo)建立老年大鼠BPH模型是成功的。需要注意的是本實驗時間較長，動物處理過程較復(fù)雜，故應(yīng)挑取健康狀況良好的大鼠，來減少損失率。各治療組及模型組大鼠前列腺組織勻漿標本中DHT和T的水平均高于空白對照組，模型組顯著增高，說明DHT和T在前列腺組織中的含量增高與BPH發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系。與模型組比較，益母草總堿和癃閉舒膠囊治療大鼠BPH的過程中降低了前列腺組織中EGF和bFGF水平，提高了TGF-β1水平，與文獻報道一致[4,5]，證明益母草總堿可以通過調(diào)節(jié)生長因子的動態(tài)平衡的方式，來達到治療BPH的目的。這為闡明BPH發(fā)病機制中細胞因子途徑提供有力的證據(jù)。根據(jù)實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)大鼠BPH模型前列腺組織中的激素水平和生長因子呈現(xiàn)一定的相關(guān)性，BPH發(fā)生過程中激素和生長因子之間的相互作用關(guān)系有待進一步探討。

[1]DijkmanGA，DebruyneFM.Epidemiologyofprostatecancer[J].EurUrol,1996,30(3):281-295

[2]馬雷，辛華，高英英,等. 血清總PSA、游離PSA檢測在前列腺癌診斷中的臨床應(yīng)用研究[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2007, 30(2):11-12

[3]鄭師明，嚴鵬科，李世煌，等.精制益母草生物堿提取純化工藝研究[J],中國藥房,2010,21(15):1370

[4]Gandour-EdwardsR,MackPC,GumerlockPH.Abnormalitiesofapoptoticandcellcycleregulatoryproteinsindistincthistopathologiccomponentsofbenignprostatichyperplasia[J].ProstateCancerandProstaticDiseases, 2004, 7(4):321-326

[5]GuessHA.Benignprostatichyperplasia:antecedentsandnaturalhistory[J].Epidemiologicreviews, 1992, 14(1): 131-153

黑龍江省中醫(yī)藥科研項目，編號：ZHY12-Z191;佳木斯大學(xué)科研項目,編號:S2010-103。

馬雷(1980～)男,黑龍江哈爾濱人,碩士,主管技師。

高英英(1980～)女,黑龍江雞西人,碩士,講師。E-mail:happygaoyingying@163.com。

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1008-0104(2015)03-0082-02

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