袁 輝，馬 岝,王得利

(牡丹江醫(yī)學(xué)院 口腔醫(yī)學(xué)院，黑龍江 牡丹江 157011)

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半枝蓮多糖對兔下頜骨骨折愈合過程中VEGF、SGF、bFGF表達水平的影響

袁 輝，馬 岝,王得利*

(牡丹江醫(yī)學(xué)院 口腔醫(yī)學(xué)院，黑龍江 牡丹江 157011)

目的：探討半枝蓮多糖對家兔下頜骨骨折愈合過程中血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)、骨生長因子(SGF)、堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)表達的影響，分析其作用機制。方法：選取新西蘭大耳白兔20只，在其左側(cè)下頜骨體部均造成2.0mm×4.0mm的部分骨折模型，隨機分為模型對照組、半枝蓮多糖治療組各10只。治療組大耳白兔在造模3天后，腹腔注射半枝蓮多糖藥物(150 mg·kg-1) ，每天1次；模型對照組大耳白兔給予等體積生理鹽水。在第1周、3周、5周時間點分別檢測兔血液中VEGF、SGF、bFGF表達水平的變化，并結(jié)合X線評分，分析其效果。結(jié)果：在各個檢測時間點，半枝蓮多糖治療組大耳白兔靜脈血中VEGF、SGF、bFGF含量均高于模型對照組，且X線評分均高于模型對照組。結(jié)論：半枝蓮多糖對大耳白兔下頜骨骨折愈合有一定的促進作用，可能是通過調(diào)節(jié)VEGF、SGF、bFGF影響因子的表達水平實現(xiàn)。

下頜骨骨折；半枝蓮多糖；VEGF；SGF；bFGF

半枝蓮為唇形科黃芩屬植物，別名并頭草、狹葉韓信草等。蔣儀的《藥鏡拾遺賦》最早載有：“半支蓮，解蛇傷之仙草。”我國半枝蓮資源豐富，分布于諸多省區(qū)。半枝蓮性辛、苦、寒，入肺、肝、腎經(jīng)，具有清熱解毒、化瘀利尿等功效，主治蟲蛇咬傷、瘡腫腫毒、跌打損傷等。國外對中草藥半枝蓮的研究較少，中醫(yī)臨床多用于治療肝癌、肺癌、胃癌、直腸癌和鼻咽癌等疾病。半枝蓮中主要有效成分為多糖，通過調(diào)節(jié)人體的免疫系統(tǒng)，喚起機體的免疫應(yīng)答，釋放免疫因子從而間接達到預(yù)防的目的[1]。

下頜骨骨折[2]為口腔頜面外科常見的疾病之一，下頜骨骨折損傷后愈合也是一個較為復(fù)雜的創(chuàng)傷修復(fù)過程。骨折修復(fù)是骨組織的再生過程，并最終形成原有骨形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能。但影響其愈合過程的外界和內(nèi)在因素眾多，例如孕期激素水平的變化、血糖水平、機體對鈣的吸收效果等。因此，加快骨折愈合一直是臨床醫(yī)學(xué)專家學(xué)者研究的重點。近年來，隨著對中藥治療促進骨折愈合研究的深入，關(guān)于中藥配方加快骨折愈合的報道眾多，并得到了廣大患者的認可。本研究通過對實驗動物模型進行藥物干預(yù)，并檢測骨折愈合中關(guān)鍵細胞因子的含量，觀察及評價該藥物的治療效果。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組

新西蘭大耳兔20只,健康雄性，體重(2.5±0.5)kg，由牡丹江醫(yī)學(xué)院實驗動物飼養(yǎng)中心提供。實驗動物分為模型對照組、半枝蓮多糖治療組,每組10只。

1.2 實驗材料

半枝蓮多糖藥品由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)提供；VEGF、SGF、bFGF ELISA試劑盒(哈爾濱海霞試劑有限公司)。

1.3 主要儀器

電子天平；電熱恒溫水浴鍋(成都臺盟儀器廠);微量移液器(上海優(yōu)博器械廠);MNT5-WS型臺式低速離心機；全自動酶標(biāo)儀-ER-7078A酶標(biāo)儀(成都儀器廠)；Ⅲ型X線機(日本島津公司)。

1.4 造模及給藥方法

20只大耳白兔(術(shù)前禁食禁水12h) ，硫苯妥鈉1∶50稀釋，于兔耳緣靜脈注射麻醉，1mL/kg，麻醉成功標(biāo)準(zhǔn)為無眨眼反射和口唇夾捏疼痛反射。仰臥位固定于兔臺上，手術(shù)消毒，在左側(cè)下頜骨體部切口，暴露下頜骨體骨面，用牙科渦輪高速裂鉆自下頜骨體下緣處向上垂直造成2.0mm×4.0mm的骨斷裂區(qū)域。按骨科手術(shù)常規(guī)處理縫合后，造模成功，隨機分為模型對照組、半枝蓮多糖治療組，每組10只，常規(guī)進食分籠飼養(yǎng)。治療組在造模3天后，腹腔注射半枝蓮多糖藥物(150 mg·kg-1) ，每天1次；模型組給予等體積生理鹽水，在第1周、3周、5周時間點檢測兔血液中VEGF、SGF、bFGF表達水平變化，并結(jié)合X線評分，分析其效果。

1.5 檢測指標(biāo)

在各個檢測時間點，兔耳緣靜脈采血，采用ELISA法檢測VEGF、SGF、bFGF含量的變化，并根據(jù)Lane等[3]的X線評分標(biāo)準(zhǔn)，對每組骨折區(qū)骨形成、骨連接及骨塑形等情況進行評分。

1.6 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果

2.1 兩組大耳白兔VEGF、SGF、bFGF含量變化的比較

在各個檢測時間點，半枝蓮多糖治療組大耳白兔靜脈血中VEGF、SGF、bFGF含量均高于模型對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1、表2、表3。

表1 兩組大耳白兔靜脈血中VEGF含量變化比較

組別VEGF(pg/mL)1周3周5周模型對照組(n=10)124.11±11.22126.11±12.26121.14±10.98半枝蓮多糖治療組(n=10)173.21±15.43*189.23±16.34*184.21±14.55*

注：與模型對照組相應(yīng)時間點指標(biāo)比較，*P<0.05。

表2 兩組大耳白兔靜脈血中SGF含量變化比較

組別SGF(μg/mL)1周3周5周模型對照組(n=10)45.32±5.6546.87±5.2948.19±5.91半枝蓮多糖治療組(n=10)73.43±8.88*76.28±6.22*79.27±7.23*

注：與模型對照組相應(yīng)時間點指標(biāo)比較，*P<0.05。

表3 兩組大耳白兔靜脈血中bFGF含量變化比較

組別bFGF(μg/mL)1周3周5周模型對照組(n=10)34.18±3.5532.11±4.2335.55±4.87半枝蓮多糖治療組(n=10)52.76±5.46*56.37±5.32*55.31±5.42*

注：與模型對照組相應(yīng)時間點指標(biāo)比較，*P<0.05。

2.2 兩組大耳白兔下頜骨骨折部位X線評分

在各個檢測時間點，半枝蓮多糖治療組大耳白兔下頜骨骨折部位X線評分均高于模型對照組。由表4。

3 討論

在骨外科疾病中，頜骨骨折發(fā)生率較高，可達35%左右，若沒有正確的治療方法或未得到及時有效的治療可能造成咬合關(guān)系紊亂和頜面部畸形。然而，骨折愈合是一個影響因素眾多、復(fù)雜的創(chuàng)傷組織再生過程[4]。同時，與諸多因素有關(guān)，例如骨折部位血運是否豐富或有骨質(zhì)疏松癥狀等。VEGF參與眾多的生理和病理過程，是機體重要的細胞因子，與組織修復(fù)及再生有重要的關(guān)系，已證實骨折后實驗動物機體的含量明顯增高，其病理損傷的防御性增高，對骨折愈合有積極作用。SGF是骨細胞產(chǎn)生并貯存于細胞，鄰近成骨細胞通過旁分泌和自分泌形式也可得到。骨損傷或破壞后貯存在骨細胞中的生長因子即得到釋放，通過調(diào)節(jié)其他骨細胞的功能對骨折愈合有著至關(guān)重要的作用[5]。bFGF是促進成纖維細胞生長的多肽類物質(zhì)，既能使成纖維細胞有絲分裂加快又可促進中胚層細胞的生長，還可刺激血管形成，在創(chuàng)傷愈合及肢體再生中發(fā)揮作用。在骨折損傷部位，隨著病程的發(fā)展其含量與預(yù)后關(guān)系密切，呈正相關(guān)[6]。

表4 兩組兔下頜骨骨折部位X線評分比較

組別X線評分1周3周5周模型對照組(n=10)1.13±0.213.45±0.435.56±0.57半枝蓮多糖治療組(n=10)2.79±0.25*5.78±0.32*7.38±0.77*

注：與模型對照組相應(yīng)時間點指標(biāo)比較，*P<0.05。

本研究實驗結(jié)果表明，在各個檢測時間點，半枝蓮多糖治療組大耳白兔靜脈血中VEGF、SGF、bFGF含量均高于模型對照組(P<0.05)；半枝蓮多糖治療組大耳白兔X線評分高于模型對照組(P<0.05)。提示半枝蓮多糖對大耳白兔下頜骨骨折的愈合過程有一定的促進作用，可能是通過調(diào)節(jié)VEGF、SGF、bFGF影響因子的表達水平實現(xiàn)。本研究在中藥治療下頜骨骨折領(lǐng)域有新的突破，為解除廣大患者開發(fā)新的無毒副作用藥物。

[1] 蔡震峰,任鳳蓮,申定珠.中草藥半枝蓮的研究進展[J].廣州化學(xué),2006,31(4):55.

[2] 劉陽,趙衛(wèi)東,王慧君,等.下頜骨骨折機理的解剖學(xué)研究[J].中國臨床解剖學(xué)雜志,2005,23(3):255-258.

[3] LANE J M，SCANDHU H S. Current approaches to experi-mental bone grafting[J].Orthopedic Clinics of North A-merica，1987，18(2):213-225.

[4] 胥少汀，葛寶豐，徐印坎. 實用骨科學(xué)[M]. 北京：人民軍醫(yī)出版社,1999:23-27.

[5] 朱建民,金宗達.骨生長因子[J]. 中國中醫(yī)骨傷科雜志,1995(1):53-58.

[6] 丁煥文,何錫煌.堿性成纖維細胞生長因子研究進展[J].中國細胞生物學(xué)學(xué)報,1996(1):14-17.

(責(zé)任編輯：李嵐春)

2015-07-12

袁輝(1982-)，男，碩士，牡丹江醫(yī)學(xué)院口腔醫(yī)學(xué)院講師，研究方向為機能學(xué)實驗與教學(xué)。E-mail：14421470@qq.com；馬岝(1987-)，女，碩士，牡丹江醫(yī)學(xué)院口腔醫(yī)學(xué)院助教，研究方向為口腔醫(yī)學(xué)。

王得利(1980-)，男，碩士，牡丹江醫(yī)學(xué)院口腔醫(yī)學(xué)院講師，研究方向為口腔醫(yī)學(xué)。E-mail：wangdeli168@163.com

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1673-2197(2015)24-0019-02

10.11954/ytctyy.201524008