左 燦，王艷蘭，李海英，卿之駒△

(1.中南大學湘雅二醫(yī)院檢驗科，長沙 410011；2.湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院檢驗科，長沙 410007)

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·論 著·

不同離心條件和抗凝劑對凝血功能檢測結果的影響

左 燦1，王艷蘭1，李海英2，卿之駒1△

(1.中南大學湘雅二醫(yī)院檢驗科，長沙 410011；2.湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院檢驗科，長沙 410007)

目的 探討不同離心條件和抗凝劑對凝血功能檢測結果的影響。方法 采用不同的離心速度和離心時間、兩種不同的抗凝劑，用STA-R型全自動血凝儀分別測定其凝血酶原時間(PT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)、凝血酶時間(TT)、抗凝血酶Ⅲ活性(ATⅢ)、纖維蛋白原(Fib)、D-二聚體(D-D)和纖維蛋白(原)降解產物(FDP)。結果 與3 000 r/min離心10 min組測定結果比較，除3 000 r/min離心5 min組PT、TT、ATⅢ、Fib的差異無統(tǒng)計學意義外(P>0.05)，其余各組的凝血功能檢查結果差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。與枸櫞酸鈉抗凝血檢測結果相比，乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝血使PT、APTT、TT延長，ATⅢ活性增高(P<0.05)，而Fib、D-D、FDP差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結論 3 000 r/min離心10 min為凝血功能檢測的最佳離心條件，且測定Fib、D-D、FDP時臨床可用EDTA-K2抗凝血替代，其余均必須使用枸櫞酸鈉抗凝血。

凝血功能； 離心條件； 枸櫞酸鈉； 乙二胺四乙酸二鉀

隨著現代醫(yī)療技術的進步和發(fā)展，凝血功能檢測越來越廣泛地應用于臨床。目前，凝血功能已作為常規(guī)檢測指標應用于患者手術前準備、抗凝藥物劑量的監(jiān)測、出血性疾病或血栓性疾病的初步診斷與療效評估[1]。而伴隨著全自動血凝儀的廣泛使用，凝血功能檢測變得更快速、簡便、準確和可靠的同時，也使標本前處理的重要性日益突出。其中，離心條件對凝血功能檢測質量至關重要[2]。與此同時，由枸櫞酸鈉抗凝的真空采血管所造成的標本采集比例不符及血液凝固在臨床上尤為常見，而重新對患者采血不僅增加了患者的痛苦，更耽誤時間。乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝的血常規(guī)檢查在臨床上更為常見，同樣作為抗凝血，其是否可用于凝血功能檢測這一設想給了作者啟發(fā)。本研究旨在尋求凝血功能檢測的最佳離心條件，并以枸櫞酸鈉和EDTA-K2兩種抗凝血對60例門診隨機病例進行凝血功能檢測對比，以探討不同抗凝劑對凝血功能的檢查結果是否具有影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機選取2013年12月至2014年4月在中南大學湘雅二醫(yī)院門診就診的患者60例，以109 mmol/L枸櫞酸鈉抗凝管采集靜脈血1.8 mL、EDTA-K2抗凝管采集靜脈血2 mL，充分混勻，以3 000 r/min離心10 min分離血漿，并于室溫下2 h內檢測。健康志愿者30例，各順利采血7.2 mL，每人份血樣分別放于4支109 mmol/L枸櫞酸鈉抗凝管中(每支1.8 mL)，使抗凝劑與血液的比例為1∶9。充分混勻后，分別以3 000 r/min離心5 min，1 000、2 000、3 000 r/min各離心10 min分離血漿，并于室溫下2 h內檢測。

1.2 儀器與試劑 一次性使用真空采血管[109 mmol/L枸櫞酸鈉(1∶9)抗凝管和EDTA-K2抗凝管]；低速離心機(長沙湘智離心機儀器有限公司)；STA-R Evolution全自動血凝儀(法國Diagnostic Stago公司生產)；凝血酶原時間(PT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)、凝血酶時間(TT)、抗凝血酶Ⅲ活性(ATⅢ)、纖維蛋白原(Fib)、D-二聚體(D-D)的檢測均采用該公司提供的原裝配套試劑盒；纖維蛋白(原)降解產物(FDP)檢測試劑由日本積水株式會社提供。

1.3 凝血功能檢測 將所收集的血漿標本置于STA-R型全自動血凝儀上進行凝血功能的檢測。其中，PT、APTT、TT、Fib的檢測采用凝固法，ATⅢ的檢測采用發(fā)色底物法，D-D和FDP的檢測則采用免疫比濁法。按照標準操作規(guī)程(SOP)檢測，先檢測質控品，觀察是否在控，然后再進行臨床標本分析。

2 結 果

2.1 不同離心條件下凝血功能檢測結果的比較 對30例健康志愿者的4管枸櫞酸鈉抗凝血以不同條件離心后，其凝血功能檢測結果分析如下：相同離心速度、不同離心時間條件下，PT、TT、ATⅢ、Fib的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，APTT、D-D和FDP則差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；而相同時間、不同離心速度的條件下，凝血功能各項檢查結果的差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1。

2.2 兩種抗凝劑凝血功能檢測結果的比較 對60例門診隨機患者的不同抗凝血進行凝血功能檢測，其結果分析如下：EDTA-K2抗凝血的PT、APTT、TT、ATⅢ均高于枸櫞酸鈉抗凝血(P<0.05)，而兩者Fib、D-D、FDP檢測結果的差異則無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表2。

表1 不同離心條件凝血功能檢測結果比較±s)

注：與3 000 r/min離心10 min測定結果比較，*P<0.05。

表2 兩種抗凝劑凝血功能檢測結果比較±s)

注：與枸櫞酸鈉抗凝血測定結果比較，*P<0.05。

3 討 論

凝血功能是指機體在血管受損時所具有的，由凝血因子按照一定順序相繼激活而生成凝血酶，最終使纖維蛋白原變成纖維蛋白，而促使血液凝固的能力。凝血功能檢查是判斷機體止血與凝血系統(tǒng)病理變化、術前篩查出凝血性疾病的重要指標，是目前臨床用于診斷與觀察血栓形成、抗凝治療療效的常用檢測方法，多用于術前了解患者有無凝血功能的異常，有效地防止在術中及術后出現出血不止等意外情況，從而獲得最佳的手術效果[3-4]。

PT、APTT、TT、ATⅢ、Fib、D-D、FDP 7項凝血功能檢測指標是目前臨床上判斷出血性疾病類型的主要診斷指標。其中，PT主要反映外源性凝血系統(tǒng)的功能，可反映血漿中凝血酶原及凝血因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ水平的變化，是監(jiān)測口服抗凝藥物療效的首選指標[5]。APTT是內源性凝血因子缺乏最可靠的篩選試驗，可反映血漿中凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ水平的變化，可以作為普通肝素治療的首選監(jiān)護指標[6]。TT主要是對血中循環(huán)抗凝物質的篩查，實際上反映了血漿中Fib的含量，可用于溶栓治療的監(jiān)測。ATⅢ作為絲氨酸蛋白酶抑制家族的一員，是由肝臟產生的凝血系統(tǒng)中最重要的抗凝因子，在體內有著非常重要的抗凝調節(jié)作用[7]。Fib則是血漿中含量最高的一種糖蛋白，作為重要的凝血因子，是參與止血和血栓形成的主要物質，亦可作為纖溶篩查的指標[8]。D-D是纖溶酶作用于交聯(lián)纖維蛋白的一種特異性降解產物，是診斷活動性纖溶較好的指標，也可作為溶栓藥物的治療監(jiān)測指標[9-10]。FDP是纖維蛋白或纖維蛋白原在纖溶酶的作用下，被分解后所產生的降解產物的總稱，主要反映纖維蛋白溶解系統(tǒng)的功能狀況。

在實際進行凝血功能檢測的操作過程中，由于急診或樣本量大等，容易造成許多不規(guī)范的操作，從而引起一些系統(tǒng)性的誤差。尤其是在某些分工合作的醫(yī)院，其檢測項目分工很細，通常每人只需完成某一個步驟，因此，為了保證檢測結果的準確性，必須建立統(tǒng)一的操作規(guī)范，嚴格進行室內質量控制。從表1可知，離心條件對凝血功能的檢測具有明顯的影響，標本離心條件不同時，檢測結果會不一致，因此，合適的離心速度和離心時間是保證凝血功能檢測結果準確的必要條件。而目前，國內外基于此點的研究不在少數，但其結果報道不盡相同。高長鳳[11]認為APTT的最適離心速度是3 000 r/min，PT最合適的離心速度則為2 000 r/min；朱忠勇[12]則推崇PT、APTT、TT均在相對離心速度2 000～3 000 r/min離心30 min的情況下檢測。而本研究結果顯示，除PT、TT、ATⅢ、Fib檢測時3 000 r/min離心5 min和10 min的結果差異無統(tǒng)計學意義外，其余各組的凝血功能檢查結果均具有顯著差異，與Watanabe等[13]的報道結果一致。這說明了當離心時間過短或離心速度不夠時，血漿便得不到徹底的分離，致使血漿中仍殘留有部分的血小板，未達到凝血功能檢測所需要的血小板血漿的水平，從而激活某些內、外源性凝血因子，導致結果偏差[14]。一般說來，APTT檢測要求貧血小板血漿，以避免血小板活化對試驗造成干擾，PT檢測的要求則相對低一些，而TT等的檢測則并未提及具體的離心要求。綜上所述，進行凝血功能檢測時，應以APTT的離心條件為準，即3 000 r/min離心10 min應為凝血功能檢測的最佳離心條件。在此前提下，嚴格按照標準操作規(guī)程執(zhí)行，做好試驗的質量控制，進而可提高檢驗結果的準確性和可靠性。

而目前臨床上由枸櫞酸鈉抗凝的真空采血管所造成的抗凝劑與血液標本的比例不符、血液凝固等問題給檢驗工作帶來了巨大困擾。其可能由臨床采血時操作不甚熟練造成，主要的原因是采血不暢，尤其見于兒科、燒傷和休克等患者。為了確保試驗結果的準確性，做好分析前質量控制，目前常用的處理措施是通知臨床重新采集合格標本送檢。但對患者進行重新采血不僅加劇了患者的痛苦，更耽誤了檢測的時間，極有可能造成患者病情的延誤。而血常規(guī)檢測作為臨床診斷的基本項目之一，其使用的EDTA-K2抗凝血也最為常見，在枸櫞酸鈉抗凝血標本不合格的情況下，其是否可替代用于凝血功能檢查為本研究的主要內容。由表2可知，EDTA-K2抗凝血所測得的PT、APTT、TT和ATⅢ與枸櫞酸鈉抗凝血檢測結果之間的差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，而其Fib、D-D、FDP的差異則無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，與方曉琳等[15]的研究結果一致。究其原因，不同抗凝劑對凝血功能檢測結果的影響，主要是由其各自的作用機制不同所造成。血液在離體后會迅速發(fā)生變化，其中許多凝血因子變得很不穩(wěn)定。枸櫞酸鈉作為鈣離子的快速螯合劑，不僅可與血液中鈣離子結合形成可溶性螯合物，從而有效地阻止血液凝固，并且能夠保護Ⅴ因子和Ⅷ因子的活性，因此109 mmol/L的枸櫞酸鈉被指定為凝血項目的專用抗凝劑[16]。EDTA-K2則主要與血液中鈣離子結合成螯合物以阻止血液凝固，但對凝血因子的保護性相對較差，因此會導致PT、APTT、TT延長，ATⅢ活性增高，而對Fib、D-D、FDP的檢測結果無明顯影響[17]。由此可見，臨床上測定PT、APTT、TT和ATⅢ時必須采用109 mmol/L枸櫞酸鈉抗凝，而進行Fib、D-D和FDP檢測時，則可用EDTA-K2抗凝。

綜上所述，影響凝血功能檢測結果的因素很多，因此要求檢驗人員在檢測的全過程中都必須予以注意。在明確各影響因素的前提下，嚴格按照操作規(guī)范進行檢測，本著最大程度為患者著想的原則，盡量減輕患者痛苦，保證檢驗結果的準確性和可靠性。

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Influence of different centrifugation conditions and anticoagulants on detection results of coagulation function

ZUOCan1,WANGYan-lan1,LIHai-ying2,QINGZhi-ju1△

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,XiangyaSecondHospitalofCentralSouthUniversity,Changsha,Hunan410011,China;2.DepartmentofClinicalLaboratory,FirstHospitalofHunanUniversityofChineseMedicine,Changsha,Hunan410007,China)

Objective To explore the influence of different centrifugal conditions and anticoagulants on the detection results of blood coagulation function.Methods The prothrombin time(PT),activated partial thromboplastin time(APTT),thrombin time(TT),antithrombin Ⅲ(ATⅢ),fibrinogen(Fib),D-dimer(D-D) and fibrin degradation products (FDP) by STA-R type full automatic blood coagulation analyzer,which were detected by adopting different centrifugal speeds and time and two different kinds of anticoagulant.Results Compared with the detection results in the 3 000 r/min 10 min centrifugation group,the blood coagulation function test results had statistically significant differences among other centrifugal condition groups (P<0.05),except PT,TT,ATⅢ and Fib in the 3 000 r/min 5 min centrifugation group had no statistical differences(P>0.05).Compared with the detection results of sodium citrate anticoagulation,the anticoagulation by using ethylenediamine tetraacetic acid dipotassium(EDTA-K2) prolonged PT,APTT,TT and increased the ATⅢ activity(P<0.05),while Fib,D-D and FDP had no statistical differences(P>0.05).Conclusion The best centrifugal condition for blood coagulation function detection is 3 000 r/min centrifuging for 10 min,and in the determination of Fib,D-D and FDP,EDTA-K2anticoagulation can replace,while the others must use sodium citrate anticoagulation.

coagulation function; centrifugal conditions; sodium citrate; ethylenediamine tetraacetic acid dipotassium

左燦，女，在讀碩士，檢驗技師，主要從事臨床生物化學與分子生物學方面的研究?！?/p>

，E-mail:zuocan12@sina.cn。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.17.030

A

1672-9455(2015)17-2560-03

2015-03-15

2015-04-10)