謝迎春(三峽大學第一臨床醫(yī)學院 宜昌市中心人民醫(yī)院，湖北宜昌443003)

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不明原因肝病患者中隱匿性HBV感染情況觀察

謝迎春(三峽大學第一臨床醫(yī)學院 宜昌市中心人民醫(yī)院，湖北宜昌443003)

摘要：目的觀察不明原因肝病患者中隱匿性HBV感染情況。方法病因不明的肝病患者79例，應用PCR法檢測血清HBV DNA。結果79例病因不明肝病患者中，HBV DNA陽性 15例(18.98%)；其中，抗HBc陽性者中，HBV DNA陽性12例(37.5%)；與不明原因肝炎相比，隱匿性HBV感染者年齡大、失代償性肝硬化患者比例高，血透明質酸、ALT升高，白蛋白降低，P均<0.05。結論不明原因肝炎患者中存在一定的隱匿性HBV感染，與肝硬化密切相關。

關鍵詞：病毒性肝??；隱匿性感染；肝炎標志物；乙型肝炎病毒

長久以來，醫(yī)學界認為乙肝表面抗原(HBsAg)轉陰和抗-HBs出現是HBV清除和臨床體征恢復的指征。但是，近年來大量文獻報道[1～3]，有些血清HBsAg呈陰性的患者血清中仍可檢測出HBV DNA，這種情況臨床上稱為隱匿性HBV感染。本研究通過觀察不明原因肝病患者中隱匿性HBV感染情況，了解其發(fā)病的原因和流行病學情況?，F報告如下。

1資料與方法

1.1臨床資料納入標準：①血清乙肝病毒標志物(HBV-M)呈陰性，即HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc均陰性；② HBsAg陰性，但多個或單個抗體呈陽性(抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc中多個或單個陽性)。排除標準：①其他慢性病毒性肝炎；②酒精性或藥物性肝病；③代謝性肝病、自身免疫系統(tǒng)引起的肝病。宜昌市中心人民醫(yī)院2009年3月～2011年11月收治的符合標準的病因不明肝病患者79例，其中男41例、女38例，年齡(46.59±17.21)歲，病程(3.34±2.45) a；肝炎37例，肝癌9例，肝硬化33例。HBV-M檢測抗-HBs、抗-Hbe、抗-HBc陽性(1組)7例，抗-HBs、抗-HBc陽性(2組)9例，抗-HBc陽性(3組)32例，抗-Hbe、抗-HBc陽性(4組)5例，抗-HBs陽性(5組)6例，乙肝五項均陰性(6組)20例。治療前均行透明質酸、白蛋白、ALT檢測。

1.2方法

1.2.1HBV DNA檢測方法清晨肘部取空腹血5 mL，以12 000 r/min離心10 min，取上清液，置于-30 ℃保存核酸提取：取血清150 μL，嚴格按照試劑盒說明書要求操作，采用逐吸附法提取HBV DNA；最后得到50 μL核酸提取液，于-30 ℃保存，作為PCR擴增模板。引物設計：參考文獻[2]，選擇HBV DNA中S區(qū)，設計兩對引物。外部引物：上游引物5′-AGAACGTCCCAACATGACTG-3′，下游引物5′-CAAAGCTATCTACCGACCGG-3′；內部引物：上游引物5′-AGCAGGCGTGCCGCTCTTAG-3′，下游引物5′-ACATCTTCGCATCCGACTAG-3′；產物條帶為693 bp。PCR擴增方法：每次擴增反應中，陽性對照(試劑自帶)選用乙肝患者血清HBV DNA為模板；陰性以ddH2O為模板；反應體系總體積50 μL，其中Taq聚合酶0.3 μL，dNTPs 3μL，buffer 5 μL；外引物中上游引物2 μL、下游引物2 μL，DNA模板2 μL，ddH2O 35.7 μL。第1輪擴增反應條件：預變性95 ℃ 5 min，變性95 ℃ 1 min，退火55 ℃ 1 min，延伸75 ℃ 1 min，終末延伸75 ℃ 5 min，循環(huán)40次；第2輪擴增的模板為2 μL上輪PCR產物，反應體系與第1輪相同，選用內部引物中一對引物。反應條件：預變性95 ℃ 5 min，變性95 ℃ 2 min，退火50 ℃ 1 min，延伸70 ℃ 1 min，終末延伸70 ℃ 3 min，循環(huán)40次。反應結束后進行凝膠電泳分析，紫外檢測，與標準標志物對照，對應部位出現熒光條帶則為陽性。

2結果

79例病因不明肝病患者中，HBV DNA陽性 15例(18.98%)。其中，1～6組分別為0、1、12、0、0、2例；3組與1、4、5組比較，P均<0.05；3組與6組比較，P<0.05；其余各組間比較，P均>0.05。另外，HBV DNA陽性在肝炎、肝硬化、肝癌中分別為4、8、3例，三者間兩兩比較，P均>0.05。79例病因不明肝病患者中，隱匿性HBV感染失代償肝硬化5例(33.33%)，非隱匿性HBV感染者4例(6.25%)，P<0.05；二者年齡及血透明質酸水平、白蛋白、ALT比較，見表1；二者性別、輸血史和直系親屬HBV感染差異均無統(tǒng)計學意義(P均>0.05)。

HBVDNAn年齡(歲)透明質酸(ng/mL)白蛋白(g/L)ALT(U/L)陽性1552.1±10.1*856.23±60.67*33.17±5.78*369.54±38.49*陰性6443.7±14.2307.45±58.1237.78±7.92151.48±50.15

注：與HBV DNA陰性者比較，*P<0.05。

3討論

隱匿性HBV感染患者在血清HBV-M抗體陽性和(或)陰性的檢出率，很多文獻報道均有差異。有研究發(fā)現[4]，HBV-M陰性人群HBV DNA檢出率為5%，在抗-Hbe陽性、抗-HBc陽性者中檢出率為18%。本研究中，單抗HBc陽性檢出率最高，達37.5%，與文獻[5]報道一致；HBV-M全陰性檢出率為10%，與文獻報道[6]相當。目前，尚不明確HBV-M全陰性患者檢測到HBV DNA陽性的原因是從病毒標記物消失還是剛開始感染就已發(fā)生。因此，對于各種長期不明原因的肝病患者均應行HBV DNA檢測，判斷是否為隱匿性HBV感染導致。

另外，我們還發(fā)現隱匿性HBV感染多發(fā)于中老年人群，且失代償性肝硬化發(fā)生率(33.33%)顯著高于非隱匿性HBV感染者(6.25%)，ALT偏高、血清白蛋白下降，透明質酸升高。但隱匿性HBV感染者無家庭聚集爆發(fā)情況，該觀點也得到吳蓓穎等[7]研究的支持。

出現隱匿性HBV感染的原因可能與輸血性感染、器官移植等傳播HBV、急性慢性肝炎、血液透析和HBV母嬰傳播、肝硬化和肝癌等密切相關[8，9]。無償獻血者中存在隱匿性HBV感染，這在許多研究中已有報道。陳長榮等[10]對無償獻血者做隱匿性HBV感染篩查，結果發(fā)現隱匿性HBV感染率高達0.21%(20/9 091)；倪宏英等[11]報道，無償獻血者隱匿性HBV感染率為0.208%(19/9 159)，二者結果相當。Elgohry等[12]對埃及93例長期血液透析患者進行研究，發(fā)現隱匿性HBV感染者有25例(26.8%)，其中3例抗-HBc、抗-HBs同時陽性，1例抗-HBc、抗-HBs同時陰性，15例僅抗-HBc陽性，6例僅抗-HBs陽性，說明隱匿性HBV感染在長期血液透析患者中的發(fā)生率較高。

我國是一個肝病大國，隱匿性肝炎占很大比例,加強對此類患者的監(jiān)控和管理，對控制病情發(fā)展，減少遠期不良后果，甚至對預防輸血后肝炎、器官移植失敗、母嬰垂直傳播等均有重要意義[13]。因此，加大隱匿性HBV感染的流行病學、臨床治療、檢測方法研究，尋找其致病原因、提前預防、有效治療是一項艱巨任務。

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(收稿日期：2014-02-07)

中圖分類號：R512.6

文獻標志碼：B

文章編號：1002-266X(2015)04-0072-02

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.04.029