李志軍，王有鵬

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150001)

哮喘是一種嚴(yán)重威脅人類健康的由嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞等多種細(xì)胞參與的慢性呼吸道疾病，其詳盡發(fā)病機(jī)制尚不清楚。中藥抗支口服液在臨床治療哮喘取得了顯著療效，但其療效機(jī)理研究尚不深入。本實(shí)通過觀察抗支口服液對哮喘大鼠血清及肺泡灌洗液中IFN-γ和IL-6的影響，來探討抗支口服液治療哮喘的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

成年Wistar大鼠40只，體質(zhì)量(180±20)g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，符合一級實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)。

抗支口服液(組成:麻黃、石膏、杏仁、黃芩、射干、僵蠶、地龍、炙百部、川貝母、桑白皮、虎杖、蘆根、甘草)由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬二院制劑室生產(chǎn);大鼠IFN-γ試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司);IL-6試劑盒(南京凱基生物科技發(fā)展有限公司)。

1.2 造模與分組

將40只大鼠隨機(jī)分為4組(空白組、模型組、西藥組、抗支口服液組)每組10只，除空白組外，其余三組大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)后參考Palmans方法［1］進(jìn)行造模，首次接受致敏注射為實(shí)驗(yàn)第1天，于第1天和第8天給予各組大鼠腹腔注射10%卵蛋白、氫氧化鋁混合液1m l，使大鼠致敏，空白組則給予等量生理鹽水。從第3周天起于密閉空間內(nèi)用3%卵蛋白對大鼠進(jìn)行噴霧激發(fā)，霧化流量控制在5ml/min，每次15min，隔日1次，共激發(fā)4周。以大鼠出現(xiàn)呼吸加快、口唇發(fā)紺、點(diǎn)頭呼吸及站立不穩(wěn)等表現(xiàn)為激發(fā)成功?？瞻讓φ战M以生理鹽水代替卵蛋白進(jìn)行腹腔注射及霧化吸入。

1.3 給藥

除空白組外，其余3組分別均從第1次哮喘激發(fā)開始(造模第3周)至處死前每天給予生理鹽水、地塞米松及抗支口服液灌胃治療，連續(xù)4周，各組均每7天復(fù)查動(dòng)物體質(zhì)量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)均采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，檢測結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，進(jìn)行正態(tài)分布檢測，方差齊的組間比較采用單因素進(jìn)行分析;非正態(tài)分布或者方差不齊，則進(jìn)行多個(gè)獨(dú)立樣本的非參數(shù)檢驗(yàn)(Kniskal-WallisH檢驗(yàn))。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 抗支口服液對大鼠血清及肺泡灌洗液中IFN-γ的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組與空白組相比血清及肺泡灌洗液中IFN-γ含量均著降低(P＜0.05);與模型組相比，西藥及抗支口服液組血清IFN-γ含量均顯著升高(P＜0.05)，且抗支口服液與西藥組之間無顯著差異(P＞0.05)，與模型組相較抗支口服液組及西藥組肺泡灌洗液中IFN-γ含量有所升高，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示抗支口服液能夠升高哮喘大鼠血清及肺泡灌洗液中IFN-γ含量，尤其是血清。結(jié)果見表1。

表1 給藥4周后各組大鼠血清及肺泡灌洗液中IFN-γ的水平比較()

表1 給藥4周后各組大鼠血清及肺泡灌洗液中IFN-γ的水平比較()

注:與空白組相比，*P＜0.05;與模型組相比，#P＜0.05。

組別 n 血清中IFN-γ水平 BALF中IFN-γ水平空白組8 70.42±10.36 60.52±9.31模型組 8 42.16±19.97* 41.36±7.23西藥組 8 56.49±9.78# 49.56±6.39抗支口服液組 8 57.81±7.53#48.76±10.36

2.2 抗支口服液對大鼠血清及肺泡灌洗液中IL-6的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組與空白組相比血清及肺泡灌洗液中IL-6含量均顯著升高(P＜0.05);與模型組相比，西藥及抗支口服液組血清及肺泡灌洗液中IL-6含量均顯著降低(P＜0.05)，且抗支口服液與西藥組之間無顯著差異(P＞0.05)，提示抗支口服液能夠降低哮喘大鼠血清及肺泡灌洗液中IL-6含量。結(jié)果見表2。

表2 給藥4周后各組大鼠血清及肺泡灌洗液中IL-6水平比較()

表2 給藥4周后各組大鼠血清及肺泡灌洗液中IL-6水平比較()

注:與空白組相比，*P＜0.05;與模型組相比，#P＜0.05。

組別 n 血清中IL-6水平 BALF中IL-6水平空白組8 35.96±12.36 26.46±12.49模型組 8 57.21±8.36* 42.19±14.51*西藥組 8 37.56±11.29# 35.74±10.03#抗支口服液組 8 40.36±7.12# 37.16±9.48#

3 討論

支氣管哮喘是一種許多細(xì)胞及細(xì)胞因子參與的氣道慢性炎癥性疾病，其具體發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚，其中關(guān)于“Th1/Th2兩類細(xì)胞因子比率的失衡乃哮喘的發(fā)作的重要機(jī)制［1-2］”為目前研究的熱點(diǎn)。Th1細(xì)胞主要分泌IFN-γ，IL-2，IL-12等細(xì)胞因子。以上細(xì)胞因子具有協(xié)助機(jī)體抗細(xì)胞內(nèi)寄生微生物和遲發(fā)型超敏反應(yīng)的細(xì)胞免疫效應(yīng)功能。而Th2主要分泌IL-4、IL-5、IL-10、IL-1等具有促進(jìn)IgE及炎性介質(zhì)產(chǎn)生的H型細(xì)胞因子，進(jìn)而引起呼吸道毛細(xì)血管的擴(kuò)張、腺體的分泌、氣道平滑肌的收縮等的一些生理性變化，在免疫應(yīng)答中發(fā)揮作用。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，哮喘患者的氣道高反應(yīng)性和氣道炎癥與血清總IgE及特異性IgE陽性率有極大的相關(guān)性。而主要由Thl細(xì)胞中CD4+細(xì)胞產(chǎn)生的IFNγ不僅是具有促進(jìn)T淋巴細(xì)胞分化增殖作用的T細(xì)胞生長因子，還可以通過抑制IL-4 mRNA的轉(zhuǎn)錄水平而降低IL-4誘導(dǎo)的B淋巴細(xì)胞合成IgE，進(jìn)而抑制哮喘的發(fā)病。IL-6［3］是由氣道巨噬細(xì)胞及支氣管上皮細(xì)胞產(chǎn)生的能夠介導(dǎo)炎癥反應(yīng)和免疫反應(yīng)發(fā)生的介質(zhì)，其主要作用于組織細(xì)胞，能夠加速B細(xì)胞的終末分化，進(jìn)而促進(jìn)IgE生成，是引起氣道炎癥的重要細(xì)胞因子之一。有研究證實(shí)，哮喘急性發(fā)作時(shí)患者血清IL-6含量顯著升高。

目前在哮喘的臨床治療中，糖皮質(zhì)激素仍是臨床一線用藥，但因其有諸多不良反應(yīng)，在臨床的應(yīng)用頗受限制。近年來中藥在治療哮喘的臨床治療中越來越受到了人們的重視。在中醫(yī)理論中哮喘可歸屬于“哮證”范疇，乃呼吸道常見病之一，哮喘常見臨床表現(xiàn)如下:吼中哮鳴音，不同程度地喘息、氣急、胸悶等，實(shí)為本虛標(biāo)實(shí)之癥，雖病在肺，?？衫奂捌⒛I，以肺脾腎之氣虧虛為本，以痰濁氣機(jī)互相阻滯，肺失宣降為標(biāo)，其治則為:急則治其標(biāo)，緩則治其本的原則?？怪Э诜菏歉鶕?jù)哮喘病因病機(jī)而立方的，主要由麻黃、石膏、杏仁、黃芩、射干、僵蠶、地龍、炙百部、川貝母、桑白皮、虎杖、蘆根、甘草共13味組成。麻黃、石膏、蘆根清熱宣肺，杏仁、炙百部、川貝母化痰止咳，黃芩、射干、虎杖清熱解毒，僵蠶、地龍解熱平喘。全方升降適宜、散收相制，扶正祛邪，使肺熱邪毒以祛除，咳、喘、痰諸癥得以改善，是標(biāo)本兼治之劑。

綜上所訴，抗支口服液能顯著上調(diào)哮喘大鼠血清中IFN-γ含量，并能降低哮喘大鼠血清及肺泡灌洗液中IL-6的含量，是臨床治療哮喘的良方。

［1］李學(xué)良，許朝霞.支氣管哮喘發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2012，30(9):1960-1963.

［2］郭坤霞，賈金虎.探討支氣管哮喘的中醫(yī)治療新思路“痰熱喘咳從腸走，肺腎虛喘從腎溫”［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2014，42(5):114-116.

［3］徐莉，楊永青.支氣管哮喘患者血漿TNF-α、IL-6和NT-proBNP的臨床意義［J］.臨床肺科雜志，2013，18(2):292-293.