李靜，樊祥偉，高晶，于雪峰*

(1.南昌大學第四附屬醫(yī)院，江蘇 南昌 330003;2.揚州大學附屬淮安婦幼保健院，江蘇 淮安 223002)

腦性癱瘓(Cerebral Palsy，CP)簡稱腦癱，為嬰兒出生前后一個月內(nèi)由于各種原因所導致的顱腦損傷或發(fā)育缺陷所引起的姿勢異?；蜻\動障礙，屬于非進行性腦損傷。腦癱是目前兒童致殘的主要疾病之一，其發(fā)病率在世界范圍內(nèi)約為1‰～5‰［1-2］，病因和損害程度不同會使患兒大腦產(chǎn)生不同的病理改變。利用電刺激運動區(qū)療法促進腦癱大鼠腦神經(jīng)細胞增殖再生，并通過磁共振彌散張量纖維束成像技術(shù)觀察治療前后腦神經(jīng)纖維數(shù)量及走行情況，對腦癱的預(yù)后進行評估，從而為臨床治療腦癱患兒提供有效的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 實驗動物

雄性SD大鼠，14天齡左右，由江西省中醫(yī)學院實驗動物中心提供并飼養(yǎng)(2級)。實驗動物常規(guī)飼養(yǎng)，飲食自由，明暗周期12h/12h，室溫(20±3)℃。

1.1.2 動物分組及模型制備

按照國際公認改良的HIE實驗動物造模方法造模。先在提供的120只實驗大鼠中隨機選30只大鼠，隨機分為正常組、假手術(shù)組和造模組，每組10只。其余90只實驗大鼠備用。正常組:不做手術(shù)處理。假手術(shù)組:10%的水合氯醛腹腔麻醉，劑量按4ml/Kg體重計算。麻醉生效后，實驗大鼠仰臥于手術(shù)板上，固定四肢和頭部，碘伏消毒頸部及胸部，頸前正中切口，用眼科剪剪開胸腺至胸骨上窩的皮膚，切口長約5mm，分離皮下組織，于胸鎖乳突肌內(nèi)側(cè)與頸前肌交界的三角區(qū)域內(nèi)分離左頸總動脈，解剖后不結(jié)扎，縫合切口。模型組:造模方法操作同假手術(shù)組，但解剖左頸總動脈后用0號線結(jié)扎。

術(shù)后立即置于37℃水封閉缺氧箱中，箱內(nèi)持續(xù)充以濃度為8%氧氣+92%氮氣的混合氣體，氣流量1L/min，室溫24℃，維持缺氧2h后分別開箱取出。缺氧過程用測氧儀持續(xù)監(jiān)測確認箱內(nèi)氧氣含量維持在8%，缺氧后正常喂養(yǎng)，每只動物的缺氧過程都獨立計時。完成操作24h后分別進行神經(jīng)行為學檢測和病理學檢測，鑒定腦癱動物模型。

病理學檢測:常規(guī)HE染色病理檢測，光鏡下觀察皮質(zhì)、內(nèi)囊、胼胝體等部位腦組織，可見組織疏松，膠質(zhì)細胞聚集，囊間少突膠質(zhì)細胞減少，腦室內(nèi)出血，腦皮質(zhì)內(nèi)血管擴張，腦皮質(zhì)內(nèi)毛細血管破例出血。

神經(jīng)行為學檢測鑒定:必須同時具備隨意運動障礙、姿勢異常、肌張力異常;伴有或不伴有不自主動作、情感行為能力異常;傾斜板試驗必須有一項是陽性。

1.1.3 干預(yù)治療方法

預(yù)實驗造模成功后，其余90只實驗大鼠隨機分成3組，每組30只，按照國際公認改良的HIE實驗動物造模方法造模。1)假手術(shù)組:籠內(nèi)正常飼養(yǎng)，不給予任何干預(yù)治療。2)模型組:籠內(nèi)正常飼養(yǎng)，不給予任何干預(yù)治療。3)頭部電針組:造模后第一周開始，給予電針刺激頭部運動區(qū)治療。根據(jù)大鼠腦定位圖譜確定運動區(qū)頭皮表面投影上2/5給與電針刺激。電針參數(shù)為:電流5mA，周期0.1s。每日1次，10次為1個療程，合計4個療程。

1.2 掃描技術(shù)及參數(shù)

采用Bruker BioSpin磁共振成像系統(tǒng)，場強7.0T，配有自帶大鼠頭部射頻發(fā)射和接受線圈孔徑16cm，梯度場強度300mT/m，由首都醫(yī)科大學天壇醫(yī)院神經(jīng)外科研究所提供儀器和技術(shù)支持。冠狀面掃描Slice Thickness=1mm，TR=4500ms，TE=35ms，Spacing Between Slices=1.3mm，F(xiàn)lip Angle=90°，Pixel Spacing=0.3125×0.3125mm，field of view=40×33.75mm，matrix size=128×108，Bruker公司產(chǎn)品，Rang of Bo 7.0T;Range of RT bore size 31cm;Gradient coil BGA 20-S;Optional or insert BGA 12-S;Gradient Strength 290mT/m;Slewrate 1160T/m/s。

1.3 圖像及數(shù)據(jù)分析

用GEAW4.2專用Functool軟件對圖像進行處理。數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理使用SPSS 14.0。

2 結(jié)果 見圖1。

圖1 各組大鼠DTT圖像

3 討論

著名學者Bach Y Ritap 1930年就提出了腦的可塑性這一概念［3］，隨后國內(nèi)外學者對腦的可塑、再生及功能重組等問題進行了不斷深入的研究。腦的可塑性［4］是指腦在環(huán)境變化或受傷時神經(jīng)具有的結(jié)構(gòu)和功能的相應(yīng)變化能力，為腦損傷后的恢復提供了基本保證。腦的可塑性在結(jié)構(gòu)上表現(xiàn)為［5］:1)受損神經(jīng)細胞軸突的側(cè)支芽生(sprouting)，增加在部分傳入靶區(qū)的投射密度;2)新長出的側(cè)支與靶細胞再建突觸聯(lián)系，可表現(xiàn)為部分傳入靶區(qū)內(nèi)突觸性終末的數(shù)量先減少，后增多;或終末增大或每個終末上的突觸增多，或電活性增強等;3)靶區(qū)內(nèi)部分傳入的二級神經(jīng)元出現(xiàn)興奮性遞質(zhì)受體上調(diào)，突觸后致密區(qū)擴大;4)膠質(zhì)細胞增多、增大等。國內(nèi)諸多學者［6］采用電刺激方法證實了神經(jīng)損傷后會產(chǎn)生一系列變異和適應(yīng)過程，代償機制中最重要的就是CNS細胞軸突再生、樹突側(cè)支芽生及突觸閾值改變，發(fā)揮儲備或休眠狀態(tài)的神經(jīng)細胞功能，調(diào)整神經(jīng)元的興奮性，重建神經(jīng)功能網(wǎng)絡(luò)，重現(xiàn)功能重組，達到功能重塑的作用。因此，來自外部的干預(yù)與誘導成為重要的研究內(nèi)容，多項臨床和動物實驗研究結(jié)果已證實了對中樞神經(jīng)損傷后的早期干預(yù)具有促進神經(jīng)干細胞(NSCs)增殖、遷移和分化作用，具有促進大腦神經(jīng)元發(fā)育、胞體突起生長、突觸生長及功能重建作用［7-8］。

彌散張量成像(DTI)是在傳統(tǒng)磁共振成像(Magnetic Resonance Imaging，MRI)及彌散加權(quán)成像(Diffusion Weighted Imaging，DWI)為基礎(chǔ)的一種新的磁共振成像技術(shù)，可以定時定量地對組織內(nèi)水分子的彌散特性在三維空間內(nèi)分析［9］。彌散張量纖維束成像(DTT)是以DTI為基礎(chǔ)，無創(chuàng)的在活體內(nèi)顯示白質(zhì)纖維束的解剖結(jié)構(gòu)、定量測量白質(zhì)纖維束的完整性，可以直接顯示纖維束的變化，觀察神經(jīng)纖維數(shù)量，追蹤纖維走行，觀察白質(zhì)纖維束受壓、移位、中斷等不同損害的程度，可評估其結(jié)構(gòu)完整性與方向性。測量目標區(qū)域神經(jīng)纖維束的數(shù)量，可以從影像學角度對神經(jīng)纖維的損害程度進行定量分析［10］，盡早估計病情狀況、估計預(yù)后。

本課題主要研究電針對腦癱大鼠的治療作用，并通過磁共振檢查觀察腦癱大鼠腦白質(zhì)纖維束恢復情況，從而驗證電針療法對腦癱治療的有效性，為臨床治療腦癱患兒提供更有效的實驗數(shù)據(jù)及理論依據(jù)。

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