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        植物根際促生菌對藍莓根際土壤養(yǎng)分與微生物數(shù)量的影響

        2015-03-09 22:48:06孫運杰等
        山東農(nóng)業(yè)科學(xué) 2014年1期
        關(guān)鍵詞:土壤酶活性土壤養(yǎng)分藍莓

        孫運杰等

        摘要:從藍莓根際土壤中篩選出4種植物根際促生細菌(PGPR)L12、L13、L14和L15。通過藍莓盆栽試驗,研究了這4株P(guān)GPR對藍莓根際土壤養(yǎng)分與微生物數(shù)量的影響。結(jié)果表明,在藍莓的一個生長周期內(nèi),L13和L14能夠顯著增加藍莓根際土壤中的可培養(yǎng)微生物數(shù)量,而接種L12和L15降低了藍莓根際土壤中可培養(yǎng)微生物的數(shù)量;接種4株P(guān)GPR均能增加土壤有機質(zhì)含量。L13對土壤速效養(yǎng)分具有明顯的促進作用,增加幅度為5.05%~22.27%;菌株L15、L14、L13對土壤酶活性的影響較大。綜合以上分析,L13能夠明顯改善藍莓根際土壤的養(yǎng)分狀況和提高根際土壤微生物數(shù)量,具有良好的應(yīng)用潛力。

        關(guān)鍵詞:藍莓;植物根際促生菌;土壤養(yǎng)分;微生物數(shù)量;土壤酶活性

        中圖分類號:S154.39文獻標(biāo)識號:A文章編號:1001-4942(2014)01-0066-04

        植物根際促生細菌(plantgrowth-promotingrhizobacteria,PGPR)是在植物根際系統(tǒng)定殖,能夠顯著促進植物生長或抑制病原菌活動的一類有益細菌的總稱[1,2]。它不僅具有普通土壤微生物的促進有機質(zhì)分解與轉(zhuǎn)化、養(yǎng)分循環(huán)和吸收等作用[3],還對植物生長及病害防治有極其顯著的作用[4,5]。近年來研究證明,PGPR可以固定空氣中的氮氣,提高土壤可溶性磷[6]、分泌或誘導(dǎo)植物產(chǎn)生生長調(diào)節(jié)物質(zhì)(如IAA、GA等)、促進植物根系生長和養(yǎng)分吸收利用、增強植物對病原菌和環(huán)境脅迫的抗性、忍耐力和適應(yīng)性等功能[3,7]。

        藍莓(Vacciniumssp.L.),又名越橘、藍漿果,屬杜鵑花科(Ericaceae)越桔屬(Vaccinium)漿果類經(jīng)濟林木。其天然資源豐富,風(fēng)味獨特,而且具有相當(dāng)好的營養(yǎng)保健功效,有“水果皇后”美譽,經(jīng)濟價值極高。藍莓具有根毛少、根淺等特性,根系多分布于淺層土壤中,要求土壤疏松,有機質(zhì)含量必須在3%以上,土壤pH值在4.0~5.0之間[8]。由于藍莓栽培條件較為苛刻,有必要對土壤有機質(zhì)含量、酸堿度、微生物及環(huán)境條件等進行改良。接種PGPR,可以提高作物品質(zhì)與產(chǎn)量,普遍認為是一種環(huán)境友好、經(jīng)濟有效的措施[9]。本研究利用從藍莓根際土壤中篩選出的幾種PGPR,結(jié)合藍莓盆栽試驗,分析其對藍莓土壤養(yǎng)分與微生物數(shù)量的影響,確定利于藍莓生長的優(yōu)良菌株,可為藍莓PGPR生物肥的研制與應(yīng)用提供理論依據(jù)。

        1材料與方法

        1.1試驗地概況

        試驗于2011年3月中旬至10月在山東省林業(yè)科學(xué)研究院試驗苗圃進行。土壤為潮土,堿解氮、有效磷、速效鉀含量分別為27.96、26.52、79.00mg/kg,有機質(zhì)含量為6.83g/kg。

        1.2供試材料

        供試材料為半高叢兔眼藍莓一年生組培苗,青島沃林藍莓基地提供。4株P(guān)GPR(L12、L13、L14和L15)是山東省林業(yè)科學(xué)研究院與山東農(nóng)業(yè)大學(xué)從藍莓根際土壤中利用保綠法和蘿卜子葉增重法分別篩選獲得;將篩選出的細菌分離物分別接種到NA液體培養(yǎng)基,37℃、180r/min搖床培養(yǎng)48h。利用平板計數(shù)法測定每毫升含菌量,計算菌液濃度,并用無菌水稀釋至2×108cfu/ml。

        1.3試驗設(shè)計

        采取盆栽試驗,隨機區(qū)組設(shè)計,共設(shè)置5個處理:處理1,對照(CK);處理2,L12;處理3,L13;處理4,L14;處理5,L15。使用聚乙烯盆(30cm×25cm),按照草炭與土體積比1∶3,硫磺粉15g,將土壤、草炭、硫磺混勻,裝盆備用。定植藍莓苗,并分別將4種菌液與水按1∶2的比例混勻,按照每盆40億微生物總量澆入,處理1用相同體積的無菌水代替,每處理重復(fù)5次,正常管理。

        1.4樣品采集及測定方法

        2013年9月27日采用剝離法采集根際土:先帶土取出植株,輕輕抖落大塊不含根系的土壤(非根際土),然后用力將根表面附著土壤全部抖落下來,迅速裝入塑料袋內(nèi)(根際土)。采集的根際土樣分為2份,一份自然風(fēng)干、過2mm篩,用于測定土壤化學(xué)性質(zhì),另一份于實驗室測定土壤微生物。土壤微生物種群數(shù)量測定采用稀釋涂布平板法,測定細菌采用牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基;測定真菌采用馬丁培養(yǎng)基+孟加拉紅+硫酸鏈霉素;測定放線菌采用改良高氏1號培養(yǎng)基+重鉻酸鉀。

        土壤EC采用電位法(水土比1∶5)測定;堿解氮、有效磷、速效鉀的測定分別采用堿解擴散法、0.5mol/LNaHCO3浸提-鉬銻抗比色法、1mol/LNH4OAc浸提-火焰光度法;土壤有機質(zhì)采用重鉻酸鉀容量法—外加熱法[10]。土壤脲酶采用苯酚鈉比色法,以培養(yǎng)24h后1g土壤中NH3-N的質(zhì)量(mg)表示脲酶活性(U);土壤過氧化氫酶(CAT)采用高錳酸鉀滴定容量法,以20min后1g土壤消耗的0.02mol/LKMnO4的體積(ml)表示;土壤蔗糖酶采用3,5-二硝基水楊酸比色法,以24h后1g土壤中葡萄糖的質(zhì)量(mg)表示蔗糖酶活性(Suc);土壤堿性磷酸酶用磷酸苯二鈉比色法,以培養(yǎng)24h后1g土壤中釋出酚的質(zhì)量(mg)表示[11]。

        1.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

        采用Word2003制作圖表,DPSv7.05軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。

        2結(jié)果與分析

        2.1不同菌株處理對土壤微生物數(shù)量的影響

        利用稀釋平板計數(shù)法測定的微生物數(shù)量占微生物總種群數(shù)的0.01%~10%,雖然不能反映土壤中微生物的絕對數(shù)量,但其數(shù)量同樣對土壤生態(tài)環(huán)境具有重要參考意義[12]。一定程度上,土壤微生物的數(shù)量、類型及其變化反映了土壤有機碳的礦化速率及各種土壤養(yǎng)分的存在狀態(tài),同時微生物種群結(jié)構(gòu)失衡是導(dǎo)致作物減產(chǎn)、土壤質(zhì)量下降、生態(tài)系統(tǒng)物質(zhì)與能量循環(huán)被破壞的主要原因之一[13]。向土壤添加一定量的微生物,可能起促進作用,增加土壤微生物種群類型及數(shù)量,也可能引起微生物種群間的競爭,減少土壤微生物的種群類型及數(shù)量。表1顯示的是藍莓一個生長周期的土壤微生物數(shù)量。處理L14的細菌數(shù)量最高,但與處理L13差異不顯著,處理L13、L14均顯著高于其他處理。放線菌數(shù)量介于細菌、真菌之間,且4個處理之間差異顯著,與CK相比,處理L14、L12、L13分別增加了334.57%、108.64%、61.73%。試驗測得真菌數(shù)量明顯小于細菌、放線菌數(shù)量,處理L13比處理L14、L15、CK、L12分別增加了10.88%、30.82%、52.46%、65.90%。微生物總量的規(guī)律與細菌、真菌變化規(guī)律基本一致,表現(xiàn)為處理L14>L13>CK>L12>L15。endprint

        3結(jié)論與討論

        本試驗結(jié)果表明:在藍莓的一個生長周期內(nèi),接種菌株L14和L13能夠顯著增加藍莓根際土壤中可培養(yǎng)微生物的數(shù)量,而接種菌株L12和L15降低了藍莓根際土壤中可培養(yǎng)微生物的數(shù)量;接種各菌株均能增加土壤有機質(zhì)含量,L13對土壤速效養(yǎng)分含量具有明顯的促進作用;菌株L15、L14、L13對土壤酶活性的影響較大。綜合來看:L13能夠明顯改善藍莓根際土壤的養(yǎng)分狀況和改變根際土壤微生物,具有良好的應(yīng)用潛力。

        土壤酶是一個非常敏感的指標(biāo),施肥種類、管理與耕作方式、作物種類、土壤水分和環(huán)境條件等均可能影響其活性[16]。因此,用土壤酶活性作為評價PGPR菌株對土壤生物學(xué)特性的影響情況比較復(fù)雜,應(yīng)結(jié)合土壤微生物性狀的試驗結(jié)果做不同分析。劉方春等人研究了植物根際促生細菌對櫻桃根際土壤微生物數(shù)量的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn),植物根際促生細菌可顯著提高櫻桃根際土壤中的細菌數(shù)量,真菌數(shù)量顯著減少[5]。本研究L12和L15降低了藍莓根際土壤中可培養(yǎng)微生物的數(shù)量。其結(jié)果的差異一方面可能與PGPR種類與植物種類有關(guān),另一方面也可能是稀釋平板法的局限性造成的。土壤中可培養(yǎng)微生物的比例極低,目前已從傳統(tǒng)的微生物分離培養(yǎng)發(fā)展到熒光技術(shù)、PCR-RFLP和PLFA圖譜分析方法等[15]。因此,評價藍莓PGPR菌株對根際土壤微生物多樣性的影響,還應(yīng)進一步采用多種方法開展研究。

        在土壤中接種PGPR只要能存活,無論是否改變微生物群落結(jié)構(gòu),都會在一定程度上影響群落的代謝活性[17]。PGPR在植物根圍聚集,它們旺盛的代謝作用加強了土壤中有機物質(zhì)的分解,促進了植物營養(yǎng)元素的礦化,增強了對作物營養(yǎng)的供應(yīng)[18]。盡管L13處理能夠明顯改善藍莓根際土壤的養(yǎng)分狀況和提高根際土壤微生物數(shù)量,但未必能完全證明它能夠在藍莓根際土壤中存活和定殖,因為其菌液中的代謝產(chǎn)物也有可能產(chǎn)生同樣的效果。因此,有必要對L13在藍莓根際土壤中的存活和定殖規(guī)律、促進藍莓根際土壤養(yǎng)分活化及生物性狀的作用機理進一步探討。

        參考文獻:

        [1]VermaJP,YadavJ,TiwariKN,etal.Impactofplantgrowthpromotingrhizobacteriaoncropproduction[J].InternationalJournalofAgriculturalResearch,2010,5:954-983.

        [2]WeyensN,LelieDVD,TaghaviS,etal.Exploitingplant-microbepartnershipstoimprovebiomassproductionandremediation[J].TrendsBiotechnol.,2009,27:591-598.

        [3]榮良燕,姚拓,黃高寶,等.植物根際優(yōu)良促生菌(PGPR)篩選及其接種劑部分替代化肥對玉米生長影響研究[J].干旱地區(qū)農(nóng)業(yè)研究,2013,31(2):59-65.

        [4]劉方春,邢尚軍,馬海林,等.根際促生細菌(PGPR)對冬棗根際土壤微生物數(shù)量及細菌多樣性影響[J].林業(yè)科學(xué),2013,49(8):75-80.

        [5]劉方春,邢尚軍,馬海林,等.PGPR生物肥對甜櫻桃(Cerasuspseudocerasus)根際土壤生物學(xué)特征的影響[J].應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報,2012,18(5):722-727.

        [6]KloepperJW,LeongJ,TeintzeM,etal.Enhancedplantgrowthbysiderophoresproducedbyplantgrowth-promotingrhizobacteria[J].Nature,1980,286:885-886.

        [7]LiuH,WuXQ,RenJH,etal.IsolationandidentificationofphosphobacteriainpoplarrhizospherefromdifferentregionsofChina[J].Pedosphere,2011,21(1):90-97.

        [8]和陽,楊巍,劉雙,等.藍莓栽培中土壤改良的方法及作用[J].北方園藝,2010,14:46-48.

        [9]AbbasiMK,SharifS,KazmiM,etal.Isolationofplantgrowthpromotingrhizobacteriafromwheatrhizosphereandtheireffectonimprovinggrowth,yieldandnutrientuptakeofplants[J].PlantBiosystems,2011,145(1):159-168.

        [10]鮑士旦.土壤農(nóng)化分析[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2000,25-108.

        [11]關(guān)松蔭.土壤酶及其研究方法[M].北京:農(nóng)業(yè)出版社,1986,3-25.

        [12]宋洪寧,杜秉海,張明巖,等.環(huán)境因素對東平湖沉積物細菌群落結(jié)構(gòu)的影響[J].微生物學(xué)報,2010,50(8):1065-1071.

        [13]劉來,黃保健,孫錦,等.大棚辣椒連作土壤微生物數(shù)量、酶活性與土壤肥力的關(guān)系[J].中國土壤與肥料,2013,2:5-10.

        [14]劉善江,夏雪,陳桂梅,等.土壤酶的研究進展[J].中國農(nóng)學(xué)通報,2011,27(21):1-7.

        [15]楊成德,龍瑞軍,陳秀蓉,等.土壤微生物功能群及其研究進展[J].土壤通報,2008,39(2):421-425.

        [16]郭文文,諸葛玉平,李建勇,等.轉(zhuǎn)基因番茄栽培對土壤生物學(xué)特性的影響[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué),2010,3:46-50.

        [17]RamosB,GarciaJAL,ProbanzaA,etal.AlterationsintherhizobacterialcommunityassociatedwithEuropeanaldergrowthwheninoculatedwithPGPRstrainBacillusucheniformis[J].EnvironmentalandExperimentalBotany,2003,49(1):61-68.

        [18]劉方春,邢尚軍,馬海林,等.生物肥對冬棗根際土壤微環(huán)境特征的影響[J].北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報,2012,34(5):100-104.endprint

        3結(jié)論與討論

        本試驗結(jié)果表明:在藍莓的一個生長周期內(nèi),接種菌株L14和L13能夠顯著增加藍莓根際土壤中可培養(yǎng)微生物的數(shù)量,而接種菌株L12和L15降低了藍莓根際土壤中可培養(yǎng)微生物的數(shù)量;接種各菌株均能增加土壤有機質(zhì)含量,L13對土壤速效養(yǎng)分含量具有明顯的促進作用;菌株L15、L14、L13對土壤酶活性的影響較大。綜合來看:L13能夠明顯改善藍莓根際土壤的養(yǎng)分狀況和改變根際土壤微生物,具有良好的應(yīng)用潛力。

        土壤酶是一個非常敏感的指標(biāo),施肥種類、管理與耕作方式、作物種類、土壤水分和環(huán)境條件等均可能影響其活性[16]。因此,用土壤酶活性作為評價PGPR菌株對土壤生物學(xué)特性的影響情況比較復(fù)雜,應(yīng)結(jié)合土壤微生物性狀的試驗結(jié)果做不同分析。劉方春等人研究了植物根際促生細菌對櫻桃根際土壤微生物數(shù)量的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn),植物根際促生細菌可顯著提高櫻桃根際土壤中的細菌數(shù)量,真菌數(shù)量顯著減少[5]。本研究L12和L15降低了藍莓根際土壤中可培養(yǎng)微生物的數(shù)量。其結(jié)果的差異一方面可能與PGPR種類與植物種類有關(guān),另一方面也可能是稀釋平板法的局限性造成的。土壤中可培養(yǎng)微生物的比例極低,目前已從傳統(tǒng)的微生物分離培養(yǎng)發(fā)展到熒光技術(shù)、PCR-RFLP和PLFA圖譜分析方法等[15]。因此,評價藍莓PGPR菌株對根際土壤微生物多樣性的影響,還應(yīng)進一步采用多種方法開展研究。

        在土壤中接種PGPR只要能存活,無論是否改變微生物群落結(jié)構(gòu),都會在一定程度上影響群落的代謝活性[17]。PGPR在植物根圍聚集,它們旺盛的代謝作用加強了土壤中有機物質(zhì)的分解,促進了植物營養(yǎng)元素的礦化,增強了對作物營養(yǎng)的供應(yīng)[18]。盡管L13處理能夠明顯改善藍莓根際土壤的養(yǎng)分狀況和提高根際土壤微生物數(shù)量,但未必能完全證明它能夠在藍莓根際土壤中存活和定殖,因為其菌液中的代謝產(chǎn)物也有可能產(chǎn)生同樣的效果。因此,有必要對L13在藍莓根際土壤中的存活和定殖規(guī)律、促進藍莓根際土壤養(yǎng)分活化及生物性狀的作用機理進一步探討。

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        [6]KloepperJW,LeongJ,TeintzeM,etal.Enhancedplantgrowthbysiderophoresproducedbyplantgrowth-promotingrhizobacteria[J].Nature,1980,286:885-886.

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        [8]和陽,楊巍,劉雙,等.藍莓栽培中土壤改良的方法及作用[J].北方園藝,2010,14:46-48.

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        [17]RamosB,GarciaJAL,ProbanzaA,etal.AlterationsintherhizobacterialcommunityassociatedwithEuropeanaldergrowthwheninoculatedwithPGPRstrainBacillusucheniformis[J].EnvironmentalandExperimentalBotany,2003,49(1):61-68.

        [18]劉方春,邢尚軍,馬海林,等.生物肥對冬棗根際土壤微環(huán)境特征的影響[J].北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報,2012,34(5):100-104.endprint

        3結(jié)論與討論

        本試驗結(jié)果表明:在藍莓的一個生長周期內(nèi),接種菌株L14和L13能夠顯著增加藍莓根際土壤中可培養(yǎng)微生物的數(shù)量,而接種菌株L12和L15降低了藍莓根際土壤中可培養(yǎng)微生物的數(shù)量;接種各菌株均能增加土壤有機質(zhì)含量,L13對土壤速效養(yǎng)分含量具有明顯的促進作用;菌株L15、L14、L13對土壤酶活性的影響較大。綜合來看:L13能夠明顯改善藍莓根際土壤的養(yǎng)分狀況和改變根際土壤微生物,具有良好的應(yīng)用潛力。

        土壤酶是一個非常敏感的指標(biāo),施肥種類、管理與耕作方式、作物種類、土壤水分和環(huán)境條件等均可能影響其活性[16]。因此,用土壤酶活性作為評價PGPR菌株對土壤生物學(xué)特性的影響情況比較復(fù)雜,應(yīng)結(jié)合土壤微生物性狀的試驗結(jié)果做不同分析。劉方春等人研究了植物根際促生細菌對櫻桃根際土壤微生物數(shù)量的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn),植物根際促生細菌可顯著提高櫻桃根際土壤中的細菌數(shù)量,真菌數(shù)量顯著減少[5]。本研究L12和L15降低了藍莓根際土壤中可培養(yǎng)微生物的數(shù)量。其結(jié)果的差異一方面可能與PGPR種類與植物種類有關(guān),另一方面也可能是稀釋平板法的局限性造成的。土壤中可培養(yǎng)微生物的比例極低,目前已從傳統(tǒng)的微生物分離培養(yǎng)發(fā)展到熒光技術(shù)、PCR-RFLP和PLFA圖譜分析方法等[15]。因此,評價藍莓PGPR菌株對根際土壤微生物多樣性的影響,還應(yīng)進一步采用多種方法開展研究。

        在土壤中接種PGPR只要能存活,無論是否改變微生物群落結(jié)構(gòu),都會在一定程度上影響群落的代謝活性[17]。PGPR在植物根圍聚集,它們旺盛的代謝作用加強了土壤中有機物質(zhì)的分解,促進了植物營養(yǎng)元素的礦化,增強了對作物營養(yǎng)的供應(yīng)[18]。盡管L13處理能夠明顯改善藍莓根際土壤的養(yǎng)分狀況和提高根際土壤微生物數(shù)量,但未必能完全證明它能夠在藍莓根際土壤中存活和定殖,因為其菌液中的代謝產(chǎn)物也有可能產(chǎn)生同樣的效果。因此,有必要對L13在藍莓根際土壤中的存活和定殖規(guī)律、促進藍莓根際土壤養(yǎng)分活化及生物性狀的作用機理進一步探討。

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