朱峰等

摘要：以4個(gè)不同表現(xiàn)型石榴品種‘泰山紅、‘大青皮、‘墨石榴和‘三白為試材，利用高效液相色譜法（HPLC）分別測(cè)定果皮和果汁中楊梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素、芹菜素等類黃酮含量。結(jié)果表明：4個(gè)品種的果皮、果汁中均存在這5種類黃酮物質(zhì)，其中以楊梅酮和槲皮素含量最高。4個(gè)品種間類黃酮含量有差異?！资窆ず凸械念慄S酮總量均最高，分別達(dá)到377.5μg/g和82.0μg/g，‘泰山紅、‘大青皮和‘墨石榴果皮和果汁中類黃酮含量依次降低。此外，同一品種不同部位也有差異，‘三白果皮類黃酮總量是果汁的4.60倍，而‘泰山紅、‘墨石榴和‘大青皮依次是3.51、4.45、4.28倍。表明類黃酮含量在石榴不同品種以及同一品種果皮和果汁中均存在差異性。

關(guān)鍵詞：石榴；果皮；果汁；類黃酮；HPLC

中圖分類號(hào)：S665.401文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A文章編號(hào)：1001-4942（2014）01-0040-04

石榴（PunicagranatumL.）是傳統(tǒng)的栽培果樹之一，具有較高的食用、藥用及觀賞價(jià)值。目前，全世界有1000多個(gè)栽培品種[2]。石榴在中國(guó)已有2000多年的栽培歷史，據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，我國(guó)栽培面積目前已達(dá)到11.7×104hm2左右，居世界第一位，形成了山東棗莊、陜西臨潼、新疆葉城、云南蒙自、四川會(huì)理、河南開封、安徽懷遠(yuǎn)等幾個(gè)石榴適生栽培區(qū)。

類黃酮具有結(jié)構(gòu)和特征的多樣性，廣泛存在于水果、蔬菜、堅(jiān)果、種子和莖皮中，是植物體內(nèi)最重要的次生代謝產(chǎn)物之一，也是人類膳食不可缺少的組成部分[1]。研究表明，石榴中富含類黃酮物質(zhì)，其果實(shí)提取物對(duì)心腦血管疾病、腫瘤、細(xì)菌感染等具有顯著的防治作用[3～8]。雖然石榴中的類黃酮研究開展較早，但已往對(duì)類黃酮研究主要集中在定性和總量測(cè)定[9，10]方面，且大都局限于單一品種。利用高效液相色譜法測(cè)定石榴類黃酮物質(zhì)含量的研究較少[11]，對(duì)不同石榴品種果皮和果汁中類黃酮物質(zhì)組分含量的研究尚未見相關(guān)報(bào)道。本試驗(yàn)以4個(gè)不同表現(xiàn)型石榴品種為試材，采用高效液相色譜法（HPLC）對(duì)果皮、果汁中類黃酮組分（楊梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素、芹菜素）的含量進(jìn)行了提取和測(cè)定，以揭示不同石榴品種類黃酮組分在含量上的差異，為石榴類黃酮物質(zhì)的開發(fā)利用和良種選育提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1供試品種以山東省果樹研究所石榴種質(zhì)資源圃中的‘泰山紅、‘大青皮、‘三白和‘墨石榴4個(gè)石榴品種為試材。該資源圃立地條件一致，常規(guī)管理。

1.1.2試劑以楊梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素、芹菜素等5種類黃酮物質(zhì)為標(biāo)準(zhǔn)品，其中楊梅酮購(gòu)自Sigma公司、芹菜素購(gòu)自ChromaDex公司，槲皮素、木犀草素和山奈素購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。

1.1.3試驗(yàn)設(shè)計(jì)每個(gè)品種每3株為一個(gè)小區(qū)，隨機(jī)區(qū)組排列，重復(fù)3次。

1.2試驗(yàn)方法

取樣時(shí)，選取樹勢(shì)一致的植株，自樹體東南西北4個(gè)方向及高度一致的果枝采集果實(shí)。采摘后低溫條件下帶回實(shí)驗(yàn)室，用削皮刀取得果皮，籽粒手工壓榨后經(jīng)三層紗布過(guò)濾得到果汁。

采用Aglient1260高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）進(jìn)行測(cè)定分析，甲醇、甲酸均為色譜級(jí)。

1.2.1類黃酮的提取取0.5g果皮和10g果汁，分別放于40ml62.5%的甲醇水溶液中，添加BHA（2g/L）。仔細(xì)加入6mol/LHCl10ml，使總體積達(dá)50ml，然后提取液在90℃水浴中回流2h，冷卻至室溫，超聲處理5min。取提取液10ml，經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾后用于HPLC測(cè)定。

1.2.2類黃酮標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置分別取楊梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素、芹菜素1mg，用甲醇分別定容至5ml，超聲處理10min，得每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)溶液，各取1ml混勻得到5種標(biāo)準(zhǔn)品混合液，配好的溶液于-20℃保存。

1.2.3HPLC分析采用Aglient1260高效液相色譜儀，配備Agilent1260VWD可變波長(zhǎng)檢測(cè)器。色譜柱為ZORBAXSBC18柱（150mm×4.6mm，5μm），柱溫30℃。采用2%甲酸（A液）和甲醇溶液（B液）為流動(dòng)相，進(jìn)樣量為10μl。其中類黃酮分析時(shí)的流速為0.8ml/min，梯度洗脫程序：0～45min（80%A液，20%B液），45～60min（20%A液，80%B液）。

1.2.4類黃酮的定性及定量分析定性分析根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間確定。定量分析采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法。類黃酮總量為各組分含量的總和。

1.2.5統(tǒng)計(jì)分析采用Anova對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行差異顯著性分析。

2結(jié)果與分析

2.1類黃酮標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

類黃酮在確定的色譜條件下，取10μl標(biāo)準(zhǔn)品混合液進(jìn)樣分析，得到標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖（圖1）。5種類黃酮標(biāo)準(zhǔn)品流出順序分別為楊梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素和芹菜素。endprint

摘要：以4個(gè)不同表現(xiàn)型石榴品種‘泰山紅、‘大青皮、‘墨石榴和‘三白為試材，利用高效液相色譜法（HPLC）分別測(cè)定果皮和果汁中楊梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素、芹菜素等類黃酮含量。結(jié)果表明：4個(gè)品種的果皮、果汁中均存在這5種類黃酮物質(zhì)，其中以楊梅酮和槲皮素含量最高。4個(gè)品種間類黃酮含量有差異?！资窆ず凸械念慄S酮總量均最高，分別達(dá)到377.5μg/g和82.0μg/g，‘泰山紅、‘大青皮和‘墨石榴果皮和果汁中類黃酮含量依次降低。此外，同一品種不同部位也有差異，‘三白果皮類黃酮總量是果汁的4.60倍，而‘泰山紅、‘墨石榴和‘大青皮依次是3.51、4.45、4.28倍。表明類黃酮含量在石榴不同品種以及同一品種果皮和果汁中均存在差異性。

關(guān)鍵詞：石榴；果皮；果汁；類黃酮；HPLC

中圖分類號(hào)：S665.401文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A文章編號(hào)：1001-4942（2014）01-0040-04

石榴（PunicagranatumL.）是傳統(tǒng)的栽培果樹之一，具有較高的食用、藥用及觀賞價(jià)值。目前，全世界有1000多個(gè)栽培品種[2]。石榴在中國(guó)已有2000多年的栽培歷史，據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，我國(guó)栽培面積目前已達(dá)到11.7×104hm2左右，居世界第一位，形成了山東棗莊、陜西臨潼、新疆葉城、云南蒙自、四川會(huì)理、河南開封、安徽懷遠(yuǎn)等幾個(gè)石榴適生栽培區(qū)。

類黃酮具有結(jié)構(gòu)和特征的多樣性，廣泛存在于水果、蔬菜、堅(jiān)果、種子和莖皮中，是植物體內(nèi)最重要的次生代謝產(chǎn)物之一，也是人類膳食不可缺少的組成部分[1]。研究表明，石榴中富含類黃酮物質(zhì)，其果實(shí)提取物對(duì)心腦血管疾病、腫瘤、細(xì)菌感染等具有顯著的防治作用[3～8]。雖然石榴中的類黃酮研究開展較早，但已往對(duì)類黃酮研究主要集中在定性和總量測(cè)定[9，10]方面，且大都局限于單一品種。利用高效液相色譜法測(cè)定石榴類黃酮物質(zhì)含量的研究較少[11]，對(duì)不同石榴品種果皮和果汁中類黃酮物質(zhì)組分含量的研究尚未見相關(guān)報(bào)道。本試驗(yàn)以4個(gè)不同表現(xiàn)型石榴品種為試材，采用高效液相色譜法（HPLC）對(duì)果皮、果汁中類黃酮組分（楊梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素、芹菜素）的含量進(jìn)行了提取和測(cè)定，以揭示不同石榴品種類黃酮組分在含量上的差異，為石榴類黃酮物質(zhì)的開發(fā)利用和良種選育提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1供試品種以山東省果樹研究所石榴種質(zhì)資源圃中的‘泰山紅、‘大青皮、‘三白和‘墨石榴4個(gè)石榴品種為試材。該資源圃立地條件一致，常規(guī)管理。

1.1.2試劑以楊梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素、芹菜素等5種類黃酮物質(zhì)為標(biāo)準(zhǔn)品，其中楊梅酮購(gòu)自Sigma公司、芹菜素購(gòu)自ChromaDex公司，槲皮素、木犀草素和山奈素購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。

1.1.3試驗(yàn)設(shè)計(jì)每個(gè)品種每3株為一個(gè)小區(qū)，隨機(jī)區(qū)組排列，重復(fù)3次。

1.2試驗(yàn)方法

取樣時(shí)，選取樹勢(shì)一致的植株，自樹體東南西北4個(gè)方向及高度一致的果枝采集果實(shí)。采摘后低溫條件下帶回實(shí)驗(yàn)室，用削皮刀取得果皮，籽粒手工壓榨后經(jīng)三層紗布過(guò)濾得到果汁。

采用Aglient1260高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）進(jìn)行測(cè)定分析，甲醇、甲酸均為色譜級(jí)。

1.2.1類黃酮的提取取0.5g果皮和10g果汁，分別放于40ml62.5%的甲醇水溶液中，添加BHA（2g/L）。仔細(xì)加入6mol/LHCl10ml，使總體積達(dá)50ml，然后提取液在90℃水浴中回流2h，冷卻至室溫，超聲處理5min。取提取液10ml，經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾后用于HPLC測(cè)定。

1.2.2類黃酮標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置分別取楊梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素、芹菜素1mg，用甲醇分別定容至5ml，超聲處理10min，得每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)溶液，各取1ml混勻得到5種標(biāo)準(zhǔn)品混合液，配好的溶液于-20℃保存。

1.2.3HPLC分析采用Aglient1260高效液相色譜儀，配備Agilent1260VWD可變波長(zhǎng)檢測(cè)器。色譜柱為ZORBAXSBC18柱（150mm×4.6mm，5μm），柱溫30℃。采用2%甲酸（A液）和甲醇溶液（B液）為流動(dòng)相，進(jìn)樣量為10μl。其中類黃酮分析時(shí)的流速為0.8ml/min，梯度洗脫程序：0～45min（80%A液，20%B液），45～60min（20%A液，80%B液）。

1.2.4類黃酮的定性及定量分析定性分析根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間確定。定量分析采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法。類黃酮總量為各組分含量的總和。

1.2.5統(tǒng)計(jì)分析采用Anova對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行差異顯著性分析。

2結(jié)果與分析

2.1類黃酮標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

類黃酮在確定的色譜條件下，取10μl標(biāo)準(zhǔn)品混合液進(jìn)樣分析，得到標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖（圖1）。5種類黃酮標(biāo)準(zhǔn)品流出順序分別為楊梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素和芹菜素。endprint

摘要：以4個(gè)不同表現(xiàn)型石榴品種‘泰山紅、‘大青皮、‘墨石榴和‘三白為試材，利用高效液相色譜法（HPLC）分別測(cè)定果皮和果汁中楊梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素、芹菜素等類黃酮含量。結(jié)果表明：4個(gè)品種的果皮、果汁中均存在這5種類黃酮物質(zhì)，其中以楊梅酮和槲皮素含量最高。4個(gè)品種間類黃酮含量有差異。‘三白石榴果皮和果汁中的類黃酮總量均最高，分別達(dá)到377.5μg/g和82.0μg/g，‘泰山紅、‘大青皮和‘墨石榴果皮和果汁中類黃酮含量依次降低。此外，同一品種不同部位也有差異，‘三白果皮類黃酮總量是果汁的4.60倍，而‘泰山紅、‘墨石榴和‘大青皮依次是3.51、4.45、4.28倍。表明類黃酮含量在石榴不同品種以及同一品種果皮和果汁中均存在差異性。

關(guān)鍵詞：石榴；果皮；果汁；類黃酮；HPLC

中圖分類號(hào)：S665.401文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A文章編號(hào)：1001-4942（2014）01-0040-04

石榴（PunicagranatumL.）是傳統(tǒng)的栽培果樹之一，具有較高的食用、藥用及觀賞價(jià)值。目前，全世界有1000多個(gè)栽培品種[2]。石榴在中國(guó)已有2000多年的栽培歷史，據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，我國(guó)栽培面積目前已達(dá)到11.7×104hm2左右，居世界第一位，形成了山東棗莊、陜西臨潼、新疆葉城、云南蒙自、四川會(huì)理、河南開封、安徽懷遠(yuǎn)等幾個(gè)石榴適生栽培區(qū)。

類黃酮具有結(jié)構(gòu)和特征的多樣性，廣泛存在于水果、蔬菜、堅(jiān)果、種子和莖皮中，是植物體內(nèi)最重要的次生代謝產(chǎn)物之一，也是人類膳食不可缺少的組成部分[1]。研究表明，石榴中富含類黃酮物質(zhì)，其果實(shí)提取物對(duì)心腦血管疾病、腫瘤、細(xì)菌感染等具有顯著的防治作用[3～8]。雖然石榴中的類黃酮研究開展較早，但已往對(duì)類黃酮研究主要集中在定性和總量測(cè)定[9，10]方面，且大都局限于單一品種。利用高效液相色譜法測(cè)定石榴類黃酮物質(zhì)含量的研究較少[11]，對(duì)不同石榴品種果皮和果汁中類黃酮物質(zhì)組分含量的研究尚未見相關(guān)報(bào)道。本試驗(yàn)以4個(gè)不同表現(xiàn)型石榴品種為試材，采用高效液相色譜法（HPLC）對(duì)果皮、果汁中類黃酮組分（楊梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素、芹菜素）的含量進(jìn)行了提取和測(cè)定，以揭示不同石榴品種類黃酮組分在含量上的差異，為石榴類黃酮物質(zhì)的開發(fā)利用和良種選育提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1供試品種以山東省果樹研究所石榴種質(zhì)資源圃中的‘泰山紅、‘大青皮、‘三白和‘墨石榴4個(gè)石榴品種為試材。該資源圃立地條件一致，常規(guī)管理。

1.1.2試劑以楊梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素、芹菜素等5種類黃酮物質(zhì)為標(biāo)準(zhǔn)品，其中楊梅酮購(gòu)自Sigma公司、芹菜素購(gòu)自ChromaDex公司，槲皮素、木犀草素和山奈素購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。

1.1.3試驗(yàn)設(shè)計(jì)每個(gè)品種每3株為一個(gè)小區(qū)，隨機(jī)區(qū)組排列，重復(fù)3次。

1.2試驗(yàn)方法

取樣時(shí)，選取樹勢(shì)一致的植株，自樹體東南西北4個(gè)方向及高度一致的果枝采集果實(shí)。采摘后低溫條件下帶回實(shí)驗(yàn)室，用削皮刀取得果皮，籽粒手工壓榨后經(jīng)三層紗布過(guò)濾得到果汁。

采用Aglient1260高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）進(jìn)行測(cè)定分析，甲醇、甲酸均為色譜級(jí)。

1.2.1類黃酮的提取取0.5g果皮和10g果汁，分別放于40ml62.5%的甲醇水溶液中，添加BHA（2g/L）。仔細(xì)加入6mol/LHCl10ml，使總體積達(dá)50ml，然后提取液在90℃水浴中回流2h，冷卻至室溫，超聲處理5min。取提取液10ml，經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾后用于HPLC測(cè)定。

1.2.2類黃酮標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置分別取楊梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素、芹菜素1mg，用甲醇分別定容至5ml，超聲處理10min，得每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)溶液，各取1ml混勻得到5種標(biāo)準(zhǔn)品混合液，配好的溶液于-20℃保存。

1.2.3HPLC分析采用Aglient1260高效液相色譜儀，配備Agilent1260VWD可變波長(zhǎng)檢測(cè)器。色譜柱為ZORBAXSBC18柱（150mm×4.6mm，5μm），柱溫30℃。采用2%甲酸（A液）和甲醇溶液（B液）為流動(dòng)相，進(jìn)樣量為10μl。其中類黃酮分析時(shí)的流速為0.8ml/min，梯度洗脫程序：0～45min（80%A液，20%B液），45～60min（20%A液，80%B液）。

1.2.4類黃酮的定性及定量分析定性分析根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間確定。定量分析采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法。類黃酮總量為各組分含量的總和。

1.2.5統(tǒng)計(jì)分析采用Anova對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行差異顯著性分析。

2結(jié)果與分析

2.1類黃酮標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

類黃酮在確定的色譜條件下，取10μl標(biāo)準(zhǔn)品混合液進(jìn)樣分析，得到標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖（圖1）。5種類黃酮標(biāo)準(zhǔn)品流出順序分別為楊梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素和芹菜素。endprint