吳 丹，唐麗君，王 杉，聶仁昌

(1 江西省藥品審評中心，南昌 330046;2 江西省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢測院，南昌 330029;3江西省疾病預(yù)防控制中心，南昌 330029;4江西巨日生物技術(shù)有限公司，南昌 330200)

免疫力低下嚴(yán)重危害著現(xiàn)代人類健康，均衡營養(yǎng)可提高自身免疫力。西洋參、蟲草、靈芝均有增強(qiáng)免疫力的功效。張佳麗［1］研究表明，將西洋參、冬蟲夏草、靈芝聯(lián)合使用比單獨(dú)使用這些藥物有更好的免疫調(diào)節(jié)作用。藥理研究表明，西洋參的主要活性成分有西洋參皂苷，西洋參多糖等，對免疫、抗腫瘤、抗衰老等有顯著的功效［2-4］。靈芝主要的免疫調(diào)節(jié)作用包括促進(jìn)增殖，對造血干細(xì)胞的刺激作用和激活免疫效應(yīng)細(xì)胞活性［5］。冬蟲夏草可激活增強(qiáng)單核-巨嗜細(xì)胞的系統(tǒng)的非特異性免疫作用和自然殺傷細(xì)胞的活性，對體液免疫功能也有調(diào)節(jié)作用［6，7］。由于野生蟲草過度采挖、價(jià)格高昂，市面上出現(xiàn)的西洋參、冬蟲夏草、靈芝復(fù)方保健食品不能滿足廣泛需求，本文以發(fā)酵蟲草代替野生蟲草，開發(fā)出以西洋參、發(fā)酵蟲草菌多糖粉、靈芝為主要原料的具有調(diào)節(jié)免疫力功能的保健食品，并且該品種已經(jīng)通過保健食品注冊。

1 材料與儀器設(shè)備

1.1 材料

原料:西洋參(2010 版藥典)、靈芝(2010 版藥典)、發(fā)酵蟲草菌多糖粉(Q/ZWZ 002—2009);輔料:低聚異麥芽糖(GB/T20881—2007)、西洋參香精(QB/T1505—2007)、純化水。

1.2 儀器與設(shè)備

725 型分光光度計(jì)、Agilent 1200 型高效液相色譜儀、酶標(biāo)儀、pH 計(jì)等。

生產(chǎn)設(shè)備:中藥多功能提取回流濃縮機(jī)組、配料罐、全自動(dòng)液體灌封機(jī)、滅菌柜、純化水制備設(shè)備等。

2 配方的確定

西洋參、靈芝、發(fā)酵蟲草菌多糖粉均是可以用于保健食品的原料。車振明［8］研究表明，人工培育的蛹蟲草純子實(shí)體在劑量達(dá)到2.5g/(kg·bw)的條件下，作為食品食用是安全的。姜文玲［9］研究表明，靈芝提取液無亞慢性毒性，最大無作用劑量大于20g/kg。西洋參總皂甙LD50≥5g/kg［10］。

通過研究確定，西洋參用量區(qū)間為2～3g/d、靈芝用量區(qū)間為4～6g/d、發(fā)酵蟲草菌多糖粉用量區(qū)間為2～3g/d。

3 試驗(yàn)方法

3.1 工藝流程

藥材提取:西洋參、靈芝加水煎煮→過濾→濃縮→醇沉→濾過→回收乙醇。

制劑配制:配制→濾過→半成品檢驗(yàn)→灌裝→滅菌→清洗→燈檢→成品檢驗(yàn)。

3.2 操作要點(diǎn)

(1)藥材提取

煎煮:西洋參和靈芝加純化水煎煮3 次，每次加8倍量水，煎煮1.5h，煎煮液濾過，將3 次濾液合并，藥渣濾除，濾液備用。

濃縮:將濾液70℃減壓(真空度－0.07～－0.08MPa)濃縮，至1∶1 (藥液體積與藥材重量比)，備用。

醇沉:濃縮液放冷，逐步加入食用酒精(含乙醇量95%)，慢加快攪，至含醇量達(dá)到55%。醇沉液靜置24h，備用。

濾過:取醇沉的上層液，板框(200 目)濾過，醇沉液底部沉淀?xiàng)壢?，濾液備用。

回收乙醇:70℃減壓(真空度－0.07～－0.08MPa)濃縮回收乙醇，并濃縮至藥液相對密度為1.03～1.07，備用。

(2)制劑生產(chǎn)

配制:取低聚異麥芽糖和發(fā)酵蟲草菌多糖粉，分別加總體積20%的純化水，加熱(90℃)攪拌使溶解，放冷，備用。加入藥材提取液，攪拌混勻，加西洋參香精同時(shí)加純化水至全量，攪拌混勻，為粗制液，備用。

濾過:去粗制液板框(200 目)濾過，備用。

半成品檢驗(yàn):對感官、pH 值、可溶性固形物等項(xiàng)目進(jìn)行檢測。

滅菌:滅菌溫度105℃、滅菌時(shí)間45min。

3.3 功效成分的穩(wěn)定性試驗(yàn)

對加工出的3 個(gè)批次口服液進(jìn)行加速穩(wěn)定性研究，其標(biāo)志性功效成分變化如圖1、圖2。總皂苷、腺苷測定值變化在6.0%以內(nèi)，未超出檢測方法誤差范圍。因此，上述工藝加工出的口服液中標(biāo)志性成分穩(wěn)定性較好。

圖1 3 個(gè)批次口服液加速試驗(yàn)中總皂甙含量的變化

圖2 3 個(gè)批次口服液加速試驗(yàn)中腺苷含量的變化

4 安全性毒理學(xué)及功能評價(jià)

4.1 安全性毒理學(xué)評價(jià)

急性經(jīng)口毒性研究表明，本品最大耐受劑量大于20.0mL/(kg·bw)(相當(dāng)于人體推薦量的200 倍)，屬于無毒級。三項(xiàng)遺傳毒性試驗(yàn)結(jié)果均為陰性。30d 喂養(yǎng)試驗(yàn)期間，動(dòng)物生長發(fā)育良好，各生理生化指標(biāo)與對照組比較均無顯著差異。大體解剖和組織病理檢查均未見異常，提示口服液的最大無作用劑量大于10.0mL/(kg·bw)，為人體推薦量的100 倍。

4.2 調(diào)節(jié)免疫力功能評價(jià)

取去糖2 倍濃縮液作為受試樣品，設(shè)置2.1、4.2、12.6 mL/kg 3 個(gè)劑量組給小鼠連續(xù)灌胃30d 后進(jìn)行免疫指標(biāo)測試。小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)、遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)、HC50、抗體生成細(xì)胞小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能試驗(yàn)測定結(jié)果均為陽性，小鼠碳廓清試驗(yàn)結(jié)果為陰性，提示口服液具有調(diào)節(jié)免疫力功能。

5 產(chǎn)品質(zhì)量指標(biāo)

口服液為深棕色。微生物和重金屬指標(biāo)符合國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。標(biāo)志性成分:腺苷含量≥7.81 mg/100mL、總皂苷含量(以人參皂苷Re 計(jì))≥34.6 mg/100mL、可溶性固形物≥10%、pH 值3.5～5.5。

6 結(jié)論

口服液生產(chǎn)工藝可行、穩(wěn)定，標(biāo)志性成分在加速試驗(yàn)中有良好的穩(wěn)定性?？诜航?jīng)過毒理安全性評價(jià)證明安全，功能研究證明其具有調(diào)節(jié)免疫力功效，其各項(xiàng)理化指標(biāo)和微生物指標(biāo)均符合國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，標(biāo)志性成分含量滿足產(chǎn)品安全有效要求。

［1］張佳麗，楊睿悅，王楠，李勇.參靈草復(fù)合粉增強(qiáng)小鼠免疫功能的實(shí)驗(yàn)研究［C］.北京市營養(yǎng)學(xué)會(huì)第四屆會(huì)員代表大會(huì)暨膳食及健康研討會(huì)論文集，2010:62-66.

［2］王紅梅，馬玲.西洋參的免疫調(diào)節(jié)作用研究進(jìn)展［J］.中國食品衛(wèi)生雜志，2002，14(5):43-45.

［3］易駿.國內(nèi)西洋參抗衰老作用機(jī)制的研究概況［J］.福建教育學(xué)院學(xué)報(bào)，2000，4:94-96.

［4］史艷宇，李紅，楊世杰.西洋參有效部位的抗腫瘤作用研究［J］.中國藥理學(xué)通報(bào)，2005，21(1):75-78.

［5］李秀芬，強(qiáng)玉豐，儀慧蘭.靈芝水提液對小鼠免疫功能的增強(qiáng)作用［J］.山西大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2004，27(1):62-64.

［6］張書超，秦曉紅，于新.冬蟲夏草藥理作用的研究進(jìn)展［J］.中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2008，5(14):16-17.

［7］李鋒.冬蟲夏草免疫抑制作用研究現(xiàn)狀［J］.川北醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2001，16(2):108-110.

［8］車振明.人工培育的蛹蟲草純子實(shí)體食用安全性研究［J］.食用菌，2003，3:45-46.

［9］姜文玲.靈芝液安全性毒理學(xué)評價(jià)［J］.職業(yè)與健康，1994，4:51-13.

［10］郭生楨.西洋參總皂甙毒理實(shí)驗(yàn)(摘要) ［J］.人參研究，1995，2:15.