袁林祥,劉湘丹,徐玉琴,周日寶,劉　承,蔡　建　(湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410208)

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自制大鼠固定裝置在大鼠斷尾采血中的應(yīng)用

袁林祥,劉湘丹,徐玉琴,周日寶,劉承,蔡建(湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410208)

[摘要]目的探討應(yīng)用簡(jiǎn)易自制新裝置進(jìn)行大鼠斷尾采血的效果，建立一種安全、實(shí)用、可重復(fù)的大鼠采血方法。方法用塑料瓶、木板等制作簡(jiǎn)易方便的裝置固定大鼠，對(duì)鼠尾清洗、水浴等合適處理后進(jìn)行斷尾采血。結(jié)果自制固定器制作簡(jiǎn)單、操作方便，1 d可對(duì)20只大鼠重復(fù)采血6次，出血量0.5～1.0 mL，無(wú)大鼠死亡及操作人員受傷等情況發(fā)生。結(jié)論應(yīng)用自制大鼠固定裝置大鼠采血，血量多、安全性好，是一種理想的大鼠斷尾采血新裝置。

[關(guān)鍵詞]大鼠；斷尾；新裝置；采血

大鼠為科研實(shí)驗(yàn)常用動(dòng)物之一，為滿足實(shí)驗(yàn)要求，需在保證大鼠損傷很小的前提下對(duì)大鼠進(jìn)行多次采血。目前常用的大鼠采血方法有心臟穿刺采血法、頸靜脈采血法、眼眶后靜脈叢采血法、斷尾采血法等[1]，其中斷尾采血法簡(jiǎn)單易行，操作方便，可不經(jīng)過(guò)麻醉直接采血。有效的大鼠固定方法是采血順利進(jìn)行的前提。目前，市場(chǎng)上大鼠固定器價(jià)位偏高，且常因規(guī)格有限而致其使用受限。筆者根據(jù)大鼠本身習(xí)性，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中設(shè)計(jì)了一種簡(jiǎn)單易操作的大鼠斷尾固定新裝置，通過(guò)應(yīng)用這種裝置進(jìn)行斷尾采血，可以滿足大鼠實(shí)驗(yàn)中短時(shí)間內(nèi)連續(xù)多次取血、取血速度快且對(duì)大鼠的影響比較小等要求，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更真實(shí)、準(zhǔn)確。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和材料

SPF級(jí)SD大鼠[合格證號(hào)：SCXK(湘)2011-0003]20只，雄性，2月齡，240～260 g，正常飼料飼養(yǎng)，自由飲水；手術(shù)剪、塑料瓶、木板等。

1.2固定瓶的制作

根據(jù)大鼠體積，選擇瓶身中間稍狹窄的硬質(zhì)飲料瓶(如格瓦斯飲料瓶等)，從瓶身中下部做一環(huán)形切口，去瓶蓋留取帶瓶口部分(圖1a)；另取一硬質(zhì)塑料瓶，從離瓶口約5 cm處做一環(huán)形切口，使其切口口徑小于圖1a A切口口徑，去瓶蓋留取帶瓶口部分(圖1a)。

1.3固定板的制作

選擇長(zhǎng)約30 cm，寬約15 cm的木板，在板一端離寬邊約1/3處下方橫著釘一高約12 cm的木塊；在板的另一端距離寬邊約3 cm處平行釘2顆釘子使其能卡住圖1a B的瓶頸(圖1b、c)；將固定瓶放于木板上面，并使其與圖1a B切口對(duì)接，根據(jù)瓶身大小及長(zhǎng)短，在木板中上部左右及瓶口上方各釘一釘子，使其能卡住固定瓶(圖1b、c)。

1.4固定裝置使用方法

將固定板平行擺在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，將圖1a A部分平置于桌面，從鼠籠內(nèi)取出大鼠，使其頭部對(duì)準(zhǔn)圖1a A瓶底切口，大鼠因?yàn)槠浔旧砹?xí)性，自然地鉆入瓶?jī)?nèi)，待其身體全部進(jìn)入瓶?jī)?nèi)后，取圖1a B部分，讓大鼠尾巴穿過(guò)圖1a B，瓶口朝下，A、B兩部分對(duì)接，并將B部分往A部分方向推進(jìn)，至大鼠在瓶?jī)?nèi)活動(dòng)范圍最小。此時(shí)，大鼠被固定在瓶?jī)?nèi)，可經(jīng)圖1a A部分瓶口自由呼吸，而鼠尾則由圖1a B部分瓶口露在外面，將A和B兩部分固定在板上(圖1d)。

1.5斷尾采血方法

斷尾前，用濕紗布將鼠尾清洗干凈。實(shí)驗(yàn)表明，大鼠第一次采血前不需要提前1～2 d斷尾使其血管充盈。鼠尾42 ℃水浴2～3 min使其靜脈血管預(yù)熱擴(kuò)張，取出鼠尾，紗布擦凈水分。手握半拳頭狀，左手中指和食指輕輕夾住鼠尾中下部，拇指輕輕按住尾尖前面一部分，最大限度固定鼠尾，右手拿手術(shù)剪，酒精燈外焰消毒，從尾尖約1 cm處進(jìn)行斷尾采血(圖1d、e)，用內(nèi)壁涂有肝素鈉的1.5 mL離心管收集血樣。若遇血量不足，于斷端上方按同樣方法再造一新切口，基本上可以滿足實(shí)驗(yàn)血量需求[2]。當(dāng)采血量達(dá)到實(shí)驗(yàn)所需血量，且鼠尾出血不止時(shí)，迅速在固定裝置下方墊一等高的盒子或其余物品，將固定裝置放平，用左手將鼠尾往上翹，右手用無(wú)菌棉球壓迫止血或用6%的火棉膠涂抹切口止血[3]。

a:固定瓶;b:固定板;c:固定裝置;d:固定裝置的使用;e:采血過(guò)程

2結(jié)果

通過(guò)應(yīng)用該裝置，項(xiàng)目組可在1 d內(nèi)對(duì)20只SD大鼠進(jìn)行重復(fù)6次采血，每只大鼠每次均能順利采到0.5～1.0 mL血液，所取血液基本無(wú)溶血現(xiàn)象，離心后上層血漿較澄清；整個(gè)采血過(guò)程大鼠較平靜，從未發(fā)生被大鼠抓傷、咬傷等情況；對(duì)斷尾后大鼠繼續(xù)觀察，尾尖創(chuàng)口恢復(fù)良好，未發(fā)生鼠尾感染和大鼠死亡現(xiàn)象。

3討論

大鼠采血方法有很多種。心臟穿刺采血法技術(shù)性較強(qiáng)[1,4,7,8]，易因操作不當(dāng)導(dǎo)致大鼠死亡，且常需麻醉，亦不適用于實(shí)驗(yàn)中間過(guò)程的采樣，一次采血量約0.3～0.4 mL,每只大鼠每天只能采3～5次。頸靜脈采血法可不經(jīng)麻醉直接采血[4,10]，但容易凝血及溶血，且采血時(shí)不易固定，操作人員被咬概率增大，一次采血量約0.2～0.4 mL，每只大鼠每天能采6～8次。眼眶后靜脈叢采血法操作時(shí)針頭進(jìn)入體內(nèi)深度最難把握[4,7,9]，把握不準(zhǔn)往往會(huì)導(dǎo)致血流很小以及凝血，甚至導(dǎo)致大鼠失明，不利于后續(xù)觀察，也容易讓組織液進(jìn)入血液,一次采血量約0.2～0.3 mL，每只大鼠每天能采3～4次。而斷尾采血法無(wú)需麻醉大鼠可直接采血，是一種安全、簡(jiǎn)單、可重復(fù)的采血方法。宋清斌等[5]對(duì)300只SD大鼠進(jìn)行采血，斷尾采血成功率為94.4%，遠(yuǎn)高于眼眶后靜脈叢采血及心臟穿刺采血等方法。但常由于采血量少，200～300 g大鼠僅能從尾部取到0.3～0.5 mL血液[6]，而使其使用范圍受到限制。項(xiàng)目組通過(guò)應(yīng)用本固定裝置，可減輕對(duì)大鼠的直接刺激，可在短時(shí)間或1 d內(nèi)進(jìn)行多次采血，并在采血量上實(shí)現(xiàn)突破，能滿足如藥動(dòng)學(xué)、ELISA等同一大鼠不同時(shí)間點(diǎn)連續(xù)取血的相關(guān)實(shí)驗(yàn)要求。

市場(chǎng)上大鼠固定裝置價(jià)位偏高，很多研究者[11-15]在大鼠固定裝置方面進(jìn)行了探索。劉文忠等[11]設(shè)計(jì)的固定裝置簡(jiǎn)單方便，但容易轉(zhuǎn)頭，固定效果欠佳；楊明智等[12]設(shè)計(jì)的固定裝置，固定效果好，但不適于斷尾操作；嵇承棟等[14]設(shè)計(jì)的固定裝置，固定效果不錯(cuò)，但固定瓶制作相對(duì)復(fù)雜。本項(xiàng)目組設(shè)計(jì)的裝置主要取材于廢棄飲料瓶和木板，制作材料易獲取，制作程序簡(jiǎn)單，操作方便安全，易于清洗，可以根據(jù)大鼠體積調(diào)整固定瓶大小，對(duì)大批次樣本可相互配合多組操作。固定板上釘子的設(shè)置，可方便固定瓶的固定及取卸，大大縮短了操作時(shí)間，也可調(diào)整釘子之間的寬度，更有效固定大鼠。固定板下方的木塊設(shè)置主要有兩大功能：①在操作時(shí)，可以使鼠尾處于身體最低點(diǎn)，有利于血液的匯集；②在進(jìn)行水浴及止血時(shí)，下方的木塊則成了一個(gè)支撐點(diǎn)，搭于其他容器上可以使木板處于水平狀態(tài)。固定瓶?jī)刹糠侄加脦靠诘牟糠侄皇且粋€(gè)瓶子分成兩部分或再對(duì)塑料瓶進(jìn)行修剪，相對(duì)結(jié)實(shí)，使大鼠固定更穩(wěn)固。此裝置也可以用于靜脈注射等相應(yīng)實(shí)驗(yàn)操作。

實(shí)驗(yàn)大鼠斷尾采血的幾點(diǎn)體會(huì)： ①斷尾前先對(duì)鼠尾進(jìn)行清洗，防止其他物質(zhì)對(duì)血液造成污染及發(fā)生溶血，有條件者最好在超凈工作臺(tái)上操作； ②整個(gè)采血過(guò)程中要保持環(huán)境安靜，防止大鼠產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)； ③大鼠采血前對(duì)其進(jìn)行水浴時(shí)，溫度以42 ℃為宜，超過(guò)45 ℃大鼠就開(kāi)始焦躁不安；④固定大鼠的瓶子使用之前先洗凈烘干，使用之后再清洗干凈，防止不良?xì)馕秾?duì)其產(chǎn)生影響，每次取血時(shí)可以提前多準(zhǔn)備幾個(gè)固定瓶，盡可能減少人為因素對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更準(zhǔn)確真實(shí)。

應(yīng)用本裝置對(duì)大鼠進(jìn)行斷尾采血，遵循了“3R”原則(replacement替代，reduction減少，refinement優(yōu)化)，所有大鼠都可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)，最大限度合理地利用了大鼠，也減少了大鼠的使用數(shù)量。

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(編輯：楊穎)

Application of a new device for blood collection by tail snipping in rats

YUAN Lin-xiang,LIU Xiang-dan,XU Yu-qin,ZHOU Ri-bao,LIU Cheng,CAI Jian(College of Pharmacy,Hunan University of Traditional Chinese Medicine,Changsha Hunan 410208，China)

Abstract:ObjectiveTo explore the effects of a new simple device for blood collection by tail snipping in rats so as to provide a safe, practical and repeatable method. MethodsThe rats were held by simple devices which made from plastic bottles and block and treated by some moderate ways for blood collection. ResultsThe device was easy to be made and handled. 20 rats could have 6 times of blood collection by this device in one day. There was no mouse death and no person injure during the experimental course. ConclusionThis device is a safe and ideal equipment for blood collection by tail snipping in rats.

Keywords:rats;tail snipping;new device;blood collection

[收稿日期]2014-06-17[修回日期] 2014-06-29

[通訊作者]周日寶,E-mail:13973134355@139.com；盧岳華，E-mail:513387910@qq.com

[基金項(xiàng)目]湖南省教育廳/財(cái)政廳重點(diǎn)項(xiàng)目(12A098)，湖南省教育廳大學(xué)生創(chuàng)新項(xiàng)目(2013-176)

doi:10.11659/jjssx.06E014199

[中圖分類號(hào)]Q95-34

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1672-5042(2015)01-0027-03