葛艷麗　張俊杰　王志榮　黃濱濱

·基礎研究·

胃癌組織中血管內皮生長因子C的表達及其臨床意義

葛艷麗張俊杰王志榮黃濱濱

【摘要】目的探討血管內皮生長因子-C(VEGF-C)與其受體-3(VEGFR-3)與胃癌臨床病理因素的關系。方法采用免疫組織化學染色，檢測20例正常胃組織和98例胃癌組織中VEGF-C表達。結果胃癌組織中VEGF-C陽性表達率為71.4%(70/98)，而癌旁組織和正常胃粘膜組織中其陽性表達率為9.2%(9/98)和5.0%(1/20)。98例胃癌組織中VEGF-C表達與患者性別、腫瘤直徑大小、腫瘤部位、分化程度、是否存在血管浸潤以及浸潤深度無顯著相關，而與淋巴結轉移、淋巴管浸潤、遠處轉移、TNM臨床分期顯著相關(P<0.05)。結論VEGF-C及其受體系統(tǒng)是淋巴管生成的重要調節(jié)因子，對于胃癌區(qū)域淋巴管生成、淋巴轉移途徑有非常重要的意義。

【關鍵詞】胃癌；血管內皮生長因子C；臨床意義

The Expression and Clinical Significance of Vascular Endothelial Growth Factor- C in Gastric Cancer Tissues

GEYanli，ZHANGJunjie，WANGZhirong，etal.TongjiHospitalAffiliatedtoTongjiUniversity，Shanghai，200065

【Abstract】ObjectiveTo study the vascular endothelial growth factor-C(VEGF-C) and its receptor(VEGFR-3) and their relationship with clinical pathological factors of gastric cancer.MethodsExpression of VEGF-C in 20 cases of normal gastric tissues and 98 cases of gastric cancer tissues were detected by immunohistochemical staining.ResultsVEGF-C positive expression rate was 71.4%(70/98) in gastric cancer tissues，and VEGF-C positive expression rates in tissues adjacent to tumors and normal gastric mucosa tissues were 9.2%(9/98) and 5.0%(1/20).The expression of VEGF-C in 98 cases of gastric cancer tissues and patient's gender，tumor diameter，size，location，degree of differentiation，presence of vascular invasion and infiltration depth had no significant correlation，but were significantly correlated with lymph node metastasis，lymphatic vessel invasion，distant metastasis，and TNM clinical stage (P<0.05).ConclusionVEGF-C and its receptor system is an important regulatory factor of lymphangiogenesis，it has very important significance in lymphangiogenesis of gastric cancer region and lymphatic metastasis.

【Key words】Gastric cancer；Vascular endothelial growth factor-C；Clinical significance

(ThePracticalJournalofCancer,2015,30:159～161)

1材料與方法

1.1　研究對象

收集本院2002年3月-2008年10月間，手術切除的胃癌及癌旁組織的石蠟標本共98例，另選擇20例正常胃組織石蠟標本作為對照組。患者術前均未實行放療或化療。均經(jīng)過病理檢查證實。98例胃癌中，男性62例，女性36例；年齡22~76歲，平均年齡(55±8)歲；腫瘤體積：直徑<5 cm者57例，≥5 cm者41例；腫瘤部位：胃底33例，胃竇、幽門65例；腫瘤分化程度：高、中分化腺癌55例，低分化腺癌43例；區(qū)域性淋巴結轉移：陰性者61例，陽性者37例；15例發(fā)生遠處轉移；淋巴管侵犯：陰性者47例，陽性者51例； 靜脈侵犯：陰性者74例，陽性者24例；超聲檢測浸潤深度：T1~T2 33例，T3~T4 65例；根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟的新TNM分期:Ⅰ、Ⅱ期39例，Ⅲ、Ⅳ期59例。對98例患者進行隨訪2~6年，平均4.6年，其中86例獲隨訪，隨訪率為87.8%。

1.2　研究方法

免疫組化染色：采用鏈霉素-生物素(SP)免疫組化技術，血管內皮生長因子-C(vascular endothelial growth factor-C，VEGF-C)兔抗人多克隆抗體和鼠抗人D-240單克隆抗體購自美國SANTA CRUZ公司。實驗步驟按照說明書進行操作，以實驗胃癌陽性切片作為陽性對照，用PBS作為陰性對照，同一條件下進行SP染色。

1.3　結果判定

首先在低倍鏡下選取陽性癌細胞最密集區(qū)域，然后在高倍視野下記數(shù)其中5個視野中的1 000個癌細胞，以陽性細胞占腫瘤細胞總數(shù)的百分率表示(%)。VEGF-C染色結果以超過30%的腫瘤細胞胞質中出現(xiàn)染色顆粒為陽性表達。D-240染色以出現(xiàn)染色的內皮細胞簇或條狀為陽性，無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，深褐色為3分。0分為陰性，1~3分為陽性。

1.4　統(tǒng)計學處理

應用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行分析，并應用χ2檢驗，Spearman分析兩者的相關性。生存率分析用Kaplan-Meier和Log-rank檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1　VEGF-C在胃癌組織中的陽性表達率

在胃癌組織中VEGF-C陽性表達率為71.4%(70/98)，而癌旁組織和正常胃粘膜組織中大都為陰性和弱陽性，其陽性表達率為9.2%(9/98)和5.0%(1/20)。表明VEGF-C在胃癌組織中的陽性表達率遠高于正常胃粘膜組織的(P<0.01)，差異具有統(tǒng)計學意義。

2.2　VEGF-C在胃癌組織中的表達與其臨床病理特征的關系(表1)

98例胃癌組織中，VEGF-C表達與患者性別、腫瘤部位、腫瘤直徑大小、分化程度、是否存在血管浸潤以及浸潤深度無顯著相關，但淋巴結轉移者其陽性率顯著高于無淋巴結轉移者(89.2% vs 60.7%，P=0.0005)，存在淋巴管浸潤者其陽性率明顯高于不存在淋巴管浸潤者(90.2% vs 51.1%，P=0.001)。同樣，發(fā)生遠處轉移者其陽性表達率也高于對照組(90.5% vs 66.2%，P<0.022)。TNMⅢ、Ⅳ期患者其陽性表達率顯著高于Ⅰ、Ⅱ期患者(86.4% vs 48.7%，P=0.042)。

2.3　VEGF-C表達與胃癌預后的關系

VEGF-C陽性表達患者術后2、4、6年生存率為58.8%、34.1%、33.7%，而同樣時間陰性表達患者術后生存率為85.6%、72.2%、69.4%，后者明顯高于前者(P<0.05)。

表1　VEGF-C表達與胃癌臨床病理特征的關系(例，%)

3討論

惡性腫瘤轉移的主要播散途徑之一是其擴散到原發(fā)部位之外，侵入淋巴管，稱為淋巴結轉移[1]，是嚴重影響患者預后的因素。腫瘤淋巴結轉移主要依靠腫瘤部位淋巴結的生成，但是由于缺乏淋巴內皮細胞特異性標記物和其相關生物因子的研究，其淋巴結轉移的分子機制迄今為止尚不明確[2]。直到1996年隨著VEGF-C的發(fā)現(xiàn)[3]，止步不前的腫瘤淋巴結轉移研究出現(xiàn)轉機。

VEGF-C 是VEGF 家族的成員，其編碼基因位于染色體4q34，能表達含有419個氨基酸片段的蛋白，其相對分子質M約為46 KD[4]。VEGF-C是分泌性糖蛋白結構高度保守，對淋巴管、血管的形成和動脈血管滲透性具有調節(jié)作用，并且參與調控體內多種病理和生理過程[5]。血管內皮生長因子受體-3(VEGFR-3) 特異表達于淋巴管內皮，作為VEGF-C的特異性受體，通過與其結合，參與受體的酪氨酸激酶信號系統(tǒng)的介導和啟動調控，MAPK由胞內激酶的反應所介導，被VEGF-C激活后，加速淋巴管內皮細胞的有絲分裂和增殖進程，最終導致新生淋巴管的生長[6-7]。在腫瘤患者體內，VEGF-C可能在附近的淋巴管內皮細胞和腫瘤細胞原發(fā)灶之間相互旁分泌過程中發(fā)揮重要調節(jié)作用，腫瘤細胞分泌VEGF-C，對淋巴管內皮產生強烈的化學吸引作用，在轉移早期就對腫瘤細胞侵襲淋巴管產生加速作用[8]。

本研究發(fā)現(xiàn)，98例胃癌患者中有70例患者組織中出現(xiàn)VEGF-C表達，而在正常和癌旁組織中多表達為陰性和弱陽性。證實胃癌細胞具有分泌VEGF-C的功能，通過自分泌方式作用于VEGFR-3利于淋巴管增生；本研究中有淋巴結轉移、淋巴管浸潤、遠處轉移、TNM臨床分期Ⅲ、Ⅳ期的患者癌組織中VEGF-C的表達明顯增高。在有淋巴結轉移和淋巴管浸潤的情況下，VEGF-C表達的陽性率顯著高于無淋巴結轉移和無淋巴管浸潤的情況，說明VEGF-C的表達與淋巴管侵襲和淋巴結轉移之間存在功能性相關關系。胃癌細胞通過分泌VEGF-C與VEGFR-3特異性結合，刺激淋巴管內皮生長并加速其新生，促進腫瘤細胞對淋巴管的侵襲作用，最終提升腫瘤在淋巴中轉移的概率。Ⅲ、Ⅳ期組胃癌組織中VEGF-C的陽性表達顯著高于Ⅰ、Ⅱ期組(P<0.05)，表明隨著VEGF-C表達升高，胃癌細胞向周圍組織器官浸潤得到了促進和增強，更有利于出現(xiàn)淋巴轉移。而與一些研究報道相反[9]，我們發(fā)現(xiàn)病程中出現(xiàn)腫瘤細胞遠處轉移的患者體內，VEGF-C陽性表達率有明顯升高(P<0.05)，有統(tǒng)計學意義，闡釋VEGF-C表達升高促進了原發(fā)病灶中腫瘤的轉移，加快出現(xiàn)腫瘤細胞遠處轉移。

綜上所述，檢測VEGF-C在胃癌中的表達情況，進一步闡明了胃癌發(fā)生淋巴轉移的機制，由此可見，VEGF-C及其受體系統(tǒng)是淋巴管生成的重要調節(jié)因子，對于腫瘤區(qū)域淋巴管生成、淋巴途徑的轉移具有非常重要的意義。

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(編輯：吳小紅)

(收稿日期2014-07-23修回日期 2014-09-21)

中圖分類號：R735.2

文獻標識碼：A

文章編號：1001-5930(2015)02-0159-03

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2015.02.001

通訊作者：王志榮

基金項目：國家自然科學基金資助(編號：NO.1200170111)
作者單位：200065 同濟大學附屬同濟醫(yī)院消化內科