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·論著·

腹腔神經(jīng)叢阻滯對肝部分切除術(shù)后大鼠腎功能的影響

車建翔,邱慶明,倪俊,李軍

[摘要]目的觀察腹腔神經(jīng)叢阻滯(NCPB)對肝部分切除術(shù)(PH)大鼠術(shù)后腎功能的影響。方法分別于雄性SD大鼠肝臟左、中葉根部結(jié)扎、切除,構(gòu)建經(jīng)典大鼠PH模型,然后隨機分為對照組和NCPB組。NCPB組在術(shù)后12 h開始予0.5%利多卡因1 ml行雙側(cè)經(jīng)皮NCPB,1次/d,連續(xù)7 d；對照組以0.9%生理鹽水代替。分別于術(shù)后第1、3、7 d,NCPB后30 min測定大鼠腎功能、腎臟組織超微結(jié)構(gòu)、腎血流灌注及腎臟總抗氧化能力(T-AOC)。結(jié)果NCPB組血尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)在PH術(shù)后第1、3 d顯著低于對照組(P<0.05或P<0.01),第7 d兩組的BUN 和Cr差異無統(tǒng)計學(xué)意義；在術(shù)后第1、3和7 d,NCPB組腎血流量在各時間點均顯著高于對照組(P<0.05或P<0.01)；在術(shù)后第1、3和7 d,NCPB組的腎組織T-AOC各時間點均顯著高于對照組(P<0.05或P<0.01)；而術(shù)后腎組織超微結(jié)構(gòu)的改變NCPB組明顯輕于對照組,其恢復(fù)也早于對照組。結(jié)論NCPB能夠減輕PH術(shù)后大鼠的腎臟損害,可能與增加腎血流灌注,減輕腎臟組織的氧化應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]腹腔神經(jīng)叢阻滯；肝切除；腎功能；氧化應(yīng)激

腹腔神經(jīng)叢是人體內(nèi)最大的自主神經(jīng)叢,目前臨床上腹腔神經(jīng)叢阻滯(neurolytic celiac plexus block,NCPB)主要用于治療慢性頑固性腹痛[1]。在前期研究中發(fā)現(xiàn),大鼠行肝部分切除術(shù)(partial hepatectomy,PH)術(shù)后,NCPB能減輕全身性炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)的發(fā)生、發(fā)展,從而明顯改善肝功能[2-3]。大量臨床觀察發(fā)現(xiàn),嚴(yán)重的肝外傷后機體容易并發(fā)急性腎功能損害,本研究擬通過觀察NCPB對大鼠肝部分切除術(shù)后腎功能的影響,初步探討其保護作用及機制。

1材料與方法

1.1動物及分組60只健康清潔SD雄性大鼠,3月齡,平均體重(210±15)g,自由進(jìn)食、飲水,由第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院實驗動物中心提供(醫(yī)動字第24301045)。行大鼠肝左葉、中葉根部結(jié)扎、切除,構(gòu)建大鼠70%肝臟部分切除術(shù)模型(PH模型)[4],后隨機分為對照組和NCPB組,每組各30只。NCPB組在術(shù)后12 h給予雙側(cè)0.5%利多卡因1 ml經(jīng)皮行NCPB,1次/d；而對照組以生理鹽水代替。大鼠經(jīng)皮NCPB方法參照文獻(xiàn)[2]。

1.2檢測指標(biāo)

1.2.1腎功能PH術(shù)后1、3和7 d,在乙醚麻醉下,各分別取5只大鼠靜脈血,自然沉積分離血清,取1 ml,送成都軍區(qū)總醫(yī)院檢驗科全自動生化儀(Olympus AU2700)測定尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)。

1.2.2腎血流量采用放射性生物微球法[5]測定雙腎血流量。事先以99Tcm標(biāo)記蟾蜍紅細(xì)胞作為生物微球。NCPB后30 min,乙醚麻醉、固定大鼠,分離同側(cè)頸總動脈和股動脈并插入左心室導(dǎo)管和股動脈插管。取標(biāo)記好的蟾蜍紅細(xì)胞懸液1 ml,經(jīng)左心室導(dǎo)管在30 s內(nèi)勻速注入左心室,在注射生物微球前10 s開始從股動脈以約1 ml/min的恒速抽血1 ml,作為參考血樣本。大鼠在注入微球后處死,測定腎組織重量,并用γ計數(shù)儀(GC-911,中佳光電公司)分別測定參考血樣本及腎組織的放射活性,按Domenech公式計算腎組織血流量,即：腎組織血流量[ml/(min·g)]= 參考血樣本流速(ml/min)×腎組織放射活性(cpm)/參考血樣本放射活性(cpm)/腎組織重量(g)。

1.2.3腎組織總抗氧化能力(T-AOC)取大鼠雙腎,稱重,用生理鹽水按10%組織溶液在冰浴中勻漿,4 ℃下1500 r/min離心10 min,取上清,按試劑盒(南京建成生物工程研究所)操作說明檢測。按照公式計算總抗氧化能力：T-AOC[IU/(mg·pro)]=[(測定管OD值-對照管OD值)/0.01]/ 30×(反應(yīng)液總體積/取樣量)×樣品測試前的稀釋倍數(shù)/所測樣本蛋白含量(mg)。

1.2.4腎組織超微結(jié)構(gòu)觀察在PH術(shù)后第1 d、3 d、7 d行NCPB后30 min,斷頭處死大鼠,取腎組織約 0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm,3%的戊二醛固定液預(yù)固定,1%四氧化鋨再固定,丙酮逐級脫水,EPON 812包埋,作1 μm半薄切片光學(xué)定位,作50~80 nm超薄切片,醋酸鈾和枸櫞酸鉛雙重染色,H600-Ⅳ型透射電子顯微鏡觀察。

2結(jié)果

2.1NCPB對PH術(shù)后大鼠腎功能的影響經(jīng)NCPB處理后,NCPB組大鼠血BUN在1 d和3 d后均顯著低于對照組(P<0.05或P<0.01)；血Cr在1 d和3 d也顯著低于對照組(P<0.01)；在PH術(shù)后7 d,兩組的血BUN和Cr相比無顯著性差異(P>0.05),見表1。

2.2NCPB對PH大鼠腎血流量的影響與對照組相比,NCPB組大鼠的腎臟血流量在PH術(shù)后1、3和7 d均顯著高于對照組(P<0.05或P<0.01,表2)。

2.3兩組腎組織T-AOC比較與對照組相比,NCPB組大鼠的腎臟T-AOC在PH術(shù)后1、3和7 d均顯著高于對照組(P<0.05或P<0.01,表2)。

2.4 NCPB對PH術(shù)后大鼠腎組織超微結(jié)構(gòu)的影響對照組在PH術(shù)后1 d和3 d,腎小管上皮細(xì)胞線粒體腫脹,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張,細(xì)胞核染色質(zhì)輕度聚集；在術(shù)后7 d時超微結(jié)構(gòu)恢復(fù)正常。NCPB組在PH術(shù)后1 d腎小球結(jié)構(gòu)正常,僅腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)線粒體輕度腫脹,而在術(shù)后3 d和7 d均恢復(fù)正常。見圖1。

圖1　PH術(shù)后大鼠腎組織超微結(jié)構(gòu)(×8000)

A、B、C分別為對照組1、3、7 d；D、E、F分別為NCPB組1、3、7 d

表1　PH術(shù)后不同時間兩組大鼠腎功能的變化(n=5)

注：與對照組相比,①P<0.05,②P<0.01

表2　PH術(shù)后兩組大鼠腎血流量和腎組織T-AOC比較(n=5)

注：與對照組相比,①P<0.05,②P<0.01

3討論

嚴(yán)重的肝外傷及某些復(fù)雜的肝臟手術(shù)后,由于有效循環(huán)容量減少,體內(nèi)血流再分布,全身炎癥反應(yīng)等因素的影響,導(dǎo)致肝臟以外的心、肺、腎等遠(yuǎn)隔重要臟器的損害,而腎臟往往是最早受影響的器官之一[6-7]。腎臟作為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的重要器官,一旦發(fā)生損傷,患者的預(yù)后將受到嚴(yán)重影響[8]。因此,如何降低嚴(yán)重肝外傷、肝葉切除等大型手術(shù)術(shù)后急性腎損傷的發(fā)生具有重要意義。前期研究發(fā)現(xiàn),NCPB能改善PH術(shù)后大鼠的殘肝血流灌注,從而明顯改善肝功能。該研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)NCPB處理可顯著降低PH術(shù)后大鼠血清BUN和Cr,表明NCPB對PH大鼠術(shù)后的腎功能具有一定保護作用。PH術(shù)后一方面由于失血、脫水等因素使機體處于低血容量狀態(tài),腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)分泌增多,引起腎血管收縮；另一方面由于疼痛、炎癥等因素使交感-腎上腺髓質(zhì)系統(tǒng)過度興奮,引起腎血管痙攣,從而導(dǎo)致腎功能不全。通過放射性微球免疫法測定大鼠PH術(shù)后腎組織血流量,發(fā)現(xiàn)以0.5%利多卡因NCPB處理可顯著增加大鼠PH術(shù)后腎血流量。進(jìn)一步通過電鏡檢測腎組織的超微結(jié)構(gòu)也發(fā)現(xiàn)PH術(shù)后大鼠腎小管上皮細(xì)胞線粒體腫脹,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張,而NCPB處理可顯著減輕腎組織病理學(xué)改變程度,表明NCPB增加PH術(shù)后大鼠腎臟的血流灌注、減輕腎組織缺血缺氧程度可能是NCPB改善PH大鼠術(shù)后腎功能的重要原因。

機體T-AOC的變化能較好反映組織氧化應(yīng)激損傷的程度[9]。當(dāng)機體處于病理狀態(tài)時,如嚴(yán)重的創(chuàng)傷、休克、缺血-再灌注損傷,可引起氧自由基大量產(chǎn)生[10],而氧自由基清除能力的減弱最終可導(dǎo)致細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化、細(xì)胞內(nèi)Ca2+超載、DNA變性斷裂,從而導(dǎo)致組織細(xì)胞的損傷和死亡[11]。

綜上所述,PH術(shù)后NCPB處理可顯著提高大鼠的腎組織總抗氧化能力,減輕腎組織氧化應(yīng)激損傷的程度,可能是NCPB改善PH大鼠術(shù)后腎功能的重要原因。

【參考文獻(xiàn)】

[1]Pello S,Miller A,Ku T,et al.Hemorrhagic gastritis and duodenitis following celiac plexus neurolysis[J].Pain Physician,2009,12(6):1001-1003.

[2]Li J,Yan HT,Che JX,et al.Effects of neurolytic celiac plexus block on liver regeneration in rats with partial hepatectomy[J].PLoS ONE,2013,8(9):e73101.

[3]李軍,車建翔,魏曉紅,等.腹腔神經(jīng)叢阻滯對肝部分切除術(shù)后肝細(xì)胞凋亡的影響[J].創(chuàng)傷外科雜志,2014,16(1):50-53.

[4]Hung KC,Hsieh PM,Yang KL,et al.Effect of thalidomide on the expression of vascular endothelial growth factor in a rat model of liver regeneration[J].Oncol Lett,2013,5(3):852-856.

[5]謝曾柱,劉副玉,黃慶愿,等.缺氧對右心室最大心肌血流量影響[J].中國應(yīng)用生理學(xué)雜志,1997,13(4):302-305.

[6]李曉蕓,黑子清,黎尚榮,等.重型肝癌、肝硬化患者肝移植圍術(shù)期腎功能的變化[J].中國危重病急救醫(yī)學(xué),2007,19(7):386-389.

[7]張東江,王紅梅,張建龍.大鼠肝缺血再灌注損傷時腎功能不全發(fā)生機制探討[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2008,31(12):1664-1666,1670.

[8]Beal AL,Cerra FB.Multiple organ failure syndrome in the 1990s.Systemic inflammatory response and organ dysfunction[J].JAMA,1994,271(3):226-233.

[9]龔楚鏈,譚芳,黑子清,等.肝移植患者圍手術(shù)期氧化應(yīng)激對術(shù)后肺部并發(fā)癥的影響[J].中華肝臟外科手術(shù)學(xué)電子雜志,2013,2(4)：249-253.

[10]賈志華,胡曉松.氧自由基在腎缺血再灌注損傷中的作用[J].西南軍醫(yī),2011,13(5):894-896.

[11]張穎,劉寧,任青愛,等.硫氫化鈉防治截肢術(shù)后大鼠腎臟損傷的機制[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2013,33(8)：1148-1150.

Effect of neurolytic celiac plexus block on renal function of rats after partial hepatectomy

Che Jianxiang1,Qiu Qingming1,Ni Jun1,Li Jun21.Department of Anesthesiology,Hospital 44 of PLA,Guiyang,Guizhou,550009,China;2.Department of Anesthesiology,General Hospital of Chengdu Military Command,Chengdu,Sichuan,610083,China

[Abstract]ObjectiveTo observe the effect of neurolytic celiac plexus block(NCPB)on renal function of rats after partial hepatectomy(PH).MethodsLigation and resection were made in the left and middle liver of male SD rates in order to build classical PH model rats,which were then randomly divided into control group and NCPB group.1 ml of 0.5% lidocaine was administered to the rats in the NCPB group for bilateral percutaneous NCPB 12 hours later from the operation,one time per day,for seven successive days.0.9% normal saline was used in the control group,instead.Within 30 min after NCPB on the 1st day,the 3rd day,and the 7th day,the rat renal function,renal tissue ultrastructure,renal blood perfusion and total antioxidant capacity(T-AOC)were determined respectively.ResultsThe postoperative blood urea nitrogen(BUN)and creatinine(Cr)on the 1st day and the 3rd day in the NCPB group were significantly lower than those in the control group(P<0.05 orP<0.01),and on the 7th day,BUN and Cr in the two groups had not statistically significant difference;the postoperative renal blood flows on the 1st day,the 3rd day,and the 7th day in the NCPB group were all higher than those in the control group(P<0.05 orP<0.01),while the changes of postoperative renal tissue ultrastructure in the NCPB group were significantly less than those in the control group,and the recovery was also earlier than that in the control group.ConclusionNCPB can reduce renal damage in rats after PH,which may be associated with renal blood perfusion increase and oxidative stress reduction of renal tissue.

[Key words]neurolytic celiac plexus block;hepatectomy;renal function;oxidative stress

(收稿日期:2014-11-25)

文章編號1004-0188(2015)02-0117-03

doi:10.3969/j.issn.1004-0188.2015.02.001

中圖分類號R 614.4

文獻(xiàn)標(biāo)識碼A

通訊作者:李軍,E-mail:LJ89199@163.com

基金項目:成都軍區(qū)“十二五”面上課題(C12005)
作者單位:550009 貴陽,解放軍44醫(yī)院麻醉科(車建翔,邱慶明,倪俊)；成都軍區(qū)總醫(yī)院麻醉科(李軍)