高雙英,吳　靜

(1.武漢科技大學(xué)校醫(yī)院檢驗(yàn)科,武漢 430081; 2.華潤(rùn)武鋼總醫(yī)院檢驗(yàn)科,武漢 430081)

調(diào)節(jié)性T細(xì)胞檢測(cè)在漿細(xì)胞性乳腺炎患者篩查中的臨床價(jià)值

高雙英1,吳靜2※

(1.武漢科技大學(xué)校醫(yī)院檢驗(yàn)科,武漢 430081; 2.華潤(rùn)武鋼總醫(yī)院檢驗(yàn)科,武漢 430081)

漿細(xì)胞性乳腺炎(plasm cell mastitis,PCM)是指乳腺組織發(fā)生炎性病變[1]，其中炎性滲出以漿細(xì)胞為主；好發(fā)于非哺乳期或妊娠期，大多伴有乳頭內(nèi)陷、乳暈部有乳房腫塊。該病易反復(fù)發(fā)作，并可能形成瘺管。關(guān)于PCM發(fā)病機(jī)制目前尚不完全清楚，大量研究顯示[2-3]，PCM病灶部位存在有大量淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞以及吞噬細(xì)胞等，提示機(jī)體免疫系統(tǒng)在本病的發(fā)病中起重要作用。本研究通過(guò)對(duì)PCM患者外周血CD4+CD25+CD127-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞變化水平，探討其在PCM診斷中的作用，以期為臨床治療提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料選擇2008年5月至2013年5月華潤(rùn)武鋼總醫(yī)院收治的62例PCM患者(PCM組)，年齡23～62歲，平均(38±6)歲；患者均為非哺乳期的經(jīng)產(chǎn)婦，并經(jīng)細(xì)胞學(xué)或切片檢查確診為PCM。根據(jù)病程將PCM分為3期。①急性期18例，臨床表現(xiàn)：病程約2周，乳房腫塊伴有疼痛，腫脹、皮膚發(fā)紅等急性乳腺炎的表現(xiàn)，但全身反應(yīng)輕，無(wú)明顯發(fā)熱。②亞急性期31例，患者臨床表現(xiàn)為：病程3周，炎樣癥狀消失，出現(xiàn)乳房腫塊，并與皮膚粘連。③慢性期13例，臨床表現(xiàn)：經(jīng)過(guò)反復(fù)發(fā)作后，乳房腫塊可縮小成硬結(jié)狀，出現(xiàn)1個(gè)或數(shù)個(gè)邊界不清的硬結(jié)。選擇本院收治的30例乳腺癌患者作為乳腺癌組，年齡24～67歲，平均(36±7)歲。另選擇同期在本院體檢的30例健康女性作為健康對(duì)照組，年齡18～73歲，平均(38±9)歲；3組研究對(duì)象在年齡等一般資料上差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1儀器與試劑FITC標(biāo)記的鼠抗人CD4單克隆抗體、PE標(biāo)記的鼠抗人CD25單克隆抗體、PE標(biāo)記的鼠抗人CD127單克隆抗體均購(gòu)自美國(guó)Becton Dickinson公司；調(diào)節(jié)性T細(xì)胞標(biāo)志性分子FoxP3檢測(cè)試劑盒由美國(guó) eBioscience 公司提供。儀器為BD FACSCalibur流式細(xì)胞儀；溶血?jiǎng)┵?gòu)自杭州康樹(shù)生物技術(shù)有限公司。

1.2.2方法患者均于清晨空腹肘靜脈取血3 mL，置于抗凝管中，立即送檢。檢測(cè)時(shí)取100 μL全血，加入10 μL CD4抗體、10 μL CD25抗體、2 μL CD127抗體，室溫避光混勻 15 min，再加入2 mL溶血?jiǎng)?7 ℃溶解10 min后立即上機(jī)檢測(cè)；圈定淋巴細(xì)胞為門(mén)內(nèi)細(xì)胞，要求每次獲取10 000以上門(mén)內(nèi)細(xì)胞，并將數(shù)據(jù)保存。FoxP3檢測(cè)按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。采用酶偶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)血漿轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(transforming growth factor β,TGF-β)水平，相關(guān)試劑盒由上海酶聯(lián)生物科技有限公司提供，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.2.3血清指標(biāo)檢測(cè)對(duì)3組血清學(xué)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，包括紅細(xì)胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)、C反應(yīng)蛋白、補(bǔ)體C3、C4。免疫球蛋白(IgA、IgM、IgG)、血小板計(jì)數(shù)以及血紅蛋白；其中C反應(yīng)蛋白、C3、C4、Ig采用散射免疫比濁法檢測(cè)，ESR采用魏氏法檢測(cè)，血小板計(jì)數(shù)、血紅蛋白采用血細(xì)胞分析儀法檢測(cè)。

2結(jié)果

2.1各組外周血CD4+CD25+CD127-T細(xì)胞、CD4+CD25+FoxP3+T細(xì)胞百分率、TGF-β水平比較與對(duì)照組比較，PCM患者外周血CD4+CD25+CD127-T細(xì)胞、CD4+CD25+FoxP3+T細(xì)胞百分率、TGF-β顯著降低(P<0.05)；而乳腺癌組患者各指標(biāo)顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，其中PCM組中急性期CD4+CD25+FoxP3+T細(xì)胞百分率、TGF-β顯著低于亞急性期和慢性期，亞急性期低于慢性期(P<0.05)，見(jiàn)表1，2。

組別例數(shù)CD4+CD25+CD127-T細(xì)胞(%)CD4+CD25+FoxP3+T細(xì)胞(%)TGF-β(mg/L)健康對(duì)照組304.0±1.84.4±1.487±16乳腺癌組305.8±2.2a5.5±1.0a385±37aPCM組3.0±0.5ab2.4±1.1ab53±19abF12.6156.798103.437P0.0000.0020.000

PCM：漿細(xì)胞性乳腺炎；TGF-β：轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β；a與對(duì)照組比較，P<0.05；b與乳腺癌組比較，P<0.05

組別例數(shù)CD4+CD25+CD127-T細(xì)胞(%)CD4+CD25+FoxP3+T細(xì)胞(%)TGF-β(mg/L)急性期182.8±1.21.6±0.735±11亞急性期313.1±1.2a2.4±1.0a56±14a慢性期133.5±1.2ab3.3±1.3ab70±22abF0.6394.71420.700P0.5310.0130.000

PCM：漿細(xì)胞性乳腺炎；TGF-β：轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β；a與急性期比較，P<0.05；b與亞急性期比較，P<0.05

2.2CD4+CD25+CD127-T細(xì)胞與CD4+CD25+FoxP3+T細(xì)胞、TGF-β相關(guān)性分析CD4+CD25+CD127-T細(xì)胞與CD4+CD25+FoxP3+T細(xì)胞、TGF-β呈正相關(guān)(r=0.589，P=0.021；r=0.724，P=0.000)。

2.3CD4+CD25+CD127-T細(xì)胞與血清學(xué)指標(biāo)相關(guān)性分析 PCM患者外周血CD4+CD25+CD127-T細(xì)胞與C反應(yīng)蛋白、ESR、IgA、IgG、IgM、C3、C4、血小板計(jì)數(shù)、血紅蛋白無(wú)明顯相關(guān)性(r=-0.251，P=0.384；r=0.024，P=0.954；r=-0.181，0.537；r=0.095，P=0.743；r=0.453，P=0.094；r=-0.149，P=0.669；r=-0.581，P=0.074；r=0.095，P=0.757；r=-0.339，P=0.243)。

3討論

PCM是一種炎癥樣的乳腺良性疾病，該病主要表現(xiàn)為乳房膿腫、乳頭凹陷、非周期性乳房疼痛等；該病占乳房良性病變的4%～8%，且發(fā)病率呈上升趨勢(shì)[4]。PCM臨床表現(xiàn)多樣，因此命名也各異，如乳管導(dǎo)管擴(kuò)張癥、導(dǎo)管炎等。有學(xué)者提出可以按照病程分為急性期、亞急性期和慢性期；分期不同，炎癥反應(yīng)也各不相同[5]。大量研究證實(shí)PCM伴有大量漿細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，其中漿細(xì)胞浸潤(rùn)最為明顯。隆仙琴等[6]將PCM患者術(shù)后病灶組織的勻漿接種于小鼠，獲得PCM小鼠模型，這提示PCM是一種自身免疫系統(tǒng)疾病。

調(diào)節(jié)性T細(xì)胞主要在CD4+CD25+胸腺中分化、成熟，并在CD4+T細(xì)胞選擇過(guò)程中得到CD4+CD25+FoxP3+表型[7]。曾美等[8]研究發(fā)現(xiàn)，CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞主要功能是維持機(jī)體正常的免疫反應(yīng)，如自身耐受、移植排斥、急性感染和超敏反應(yīng)，預(yù)防機(jī)體內(nèi)自身免疫性疾病的發(fā)生。施宇衡等[9]研究發(fā)現(xiàn)，CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞占人外周血CD4+T細(xì)胞的7.8%，在維持CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的發(fā)育和功能有重要作用。最近國(guó)外一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)[10]，人類(lèi)CD127表達(dá)與T細(xì)胞活化無(wú)明顯關(guān)系，作為調(diào)節(jié)性T細(xì)胞一個(gè)重要標(biāo)志物，CD127常用于區(qū)別CD25和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，且其活性不依賴(lài)于CD25的表達(dá)，這說(shuō)明CD127表達(dá)可以評(píng)價(jià)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的功能和數(shù)量，有利于分析自身免疫性疾病的異常免疫調(diào)節(jié)。

目前臨床上對(duì)PCM診斷方法主要是超聲或CT，但是由于PCM臨床表現(xiàn)無(wú)特異性，常常造成誤診；據(jù)杜莉等[11]報(bào)道，在收治的1039例PCM患者中，約有30%被誤診為乳腺癌；因此篩查PCM時(shí)，準(zhǔn)確排查乳腺癌非常重要。研究顯示[12]，CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞主要參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，因此乳腺癌患者CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)量會(huì)顯著升高。在本研究中我們采用流式細(xì)胞儀對(duì)不同分期的PCM患者、乳腺癌患者以及健康人群外周血CD4+CD25+CD127-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞進(jìn)行檢查，結(jié)果顯示，PCM患者外周血CD4+CD25+CD127-T細(xì)胞、CD4+CD25+FoxP3+T細(xì)胞百分率、TGF-β顯著低于對(duì)照組，其中急性期降低最為明顯(P<0.05)；而乳腺癌組患者各指標(biāo)則顯著高于對(duì)照組；這提示我們通過(guò)檢測(cè)外周血CD4+CD25+CD127-T細(xì)胞百分率可以有效鑒別PCM和乳腺癌，這為提高臨床診斷率提供了一個(gè)理想的指標(biāo)。相關(guān)性分析顯示，CD4+CD25+CD127-T細(xì)胞與CD4+CD25+FoxP3+T細(xì)胞呈正相關(guān)，這提示CD127代替FoxP3存在理論上的可能；但這仍需要進(jìn)一步功能試驗(yàn)證實(shí)。本研究對(duì)PCM患者外周血CD4+CD25+CD127-T細(xì)胞與血清學(xué)指標(biāo)相關(guān)性進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，CD4+CD25+CD127-T細(xì)胞與C反應(yīng)蛋白、ESR、IgA、IgG、IgM、C3、C4、血小板計(jì)數(shù)、血紅蛋白無(wú)明顯相關(guān)性；這與魏明等[13]報(bào)道不一致，我們分析可能與本研究病例數(shù)較少有關(guān)。

綜上所述，CD4+CD25+CD127-T細(xì)胞PCM發(fā)病中起重要作用，可以作為篩查PCM的輔助方法；另外CD4+CD25+CD127-T細(xì)胞檢測(cè)還有助于診斷乳腺癌，因此有著顯著的臨床價(jià)值。

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摘要：目的探討調(diào)節(jié)性T細(xì)胞檢測(cè)在漿細(xì)胞性乳腺炎(PCM)診斷中的臨床價(jià)值。方法將2008年5月至2013年5月華潤(rùn)武鋼總醫(yī)院收治的62例PCM患者按照病程分為急性期(18例)、亞急性期(31例)和慢性期(13例)；另選擇30例乳腺癌患者和30例健康女性作為乳腺癌組和健康對(duì)照組；比較各組外周血CD4+CD25+CD127-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞水平變化。結(jié)果健康對(duì)照組、乳腺癌組、PCM組外周血CD4+CD25+CD127-T細(xì)胞、CD4+CD25+FoxP3+T細(xì)胞百分率、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGF-β)分別為(4.0±1.8)%、(4.4±1.4)%、(87±16) mg/L; (3.0±0.5)%、(2.4±1.1)%、(53±19) mg/L; (5.8±2.2)%、(5.5±1.0)%、(385±37) mg/L。PCM組顯著低于健康對(duì)照組(P<0.05)；乳腺癌組患者各指標(biāo)顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。急性期PCM組CD4+CD25+CD127-T細(xì)胞、CD4+CD25+FoxP3+T細(xì)胞、TGF-β為(2.8±1.2)%、(1.6±0.7)%、(35±11) mg/L，亞急性期分別為(3.1±1.2)%、(2.4±1.0)%、(56±14) mg/L，慢性期為(3.5±1.2)%、(3.3±1.3)%、(70±22) mg/L，急性期顯著低于亞急性期和慢性期，亞急性期顯著低于慢性期(P<0.05)。相關(guān)性分析顯示，CD4+CD25+CD127-T細(xì)胞與CD4+CD25+FoxP3+T細(xì)胞、TGF-β呈正相關(guān)(r=0.589，0.724，P<0.05)，與C反應(yīng)蛋白、紅細(xì)胞沉降率、IgA、IgG、IgM、C3、C4、血小板計(jì)數(shù)、血紅蛋白無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05)。結(jié)論P(yáng)CM患者外周血CD4+CD25+CD127-T細(xì)胞顯著降低，可以作為篩查PCM的指標(biāo)之一。

關(guān)鍵詞：漿細(xì)胞性乳腺炎；調(diào)節(jié)性T細(xì)胞； FoxP3；相關(guān)性

Clinical Value of Regulatory T Cell Detection in Diagnosis of Patients with Plasma Cell MastitisGAOShuang-ying1,WUJing2.(1.DepartmentofLaboratoryMedicine,UniversityHospitalofWuhanUniversityofScienceandTechnology,Wuhan430081,China; 2.DepartmentofLaboratoryMedicine,HuarunGroupWuhanSteelGeneralHospital,Wuhan430081,China)

Abstract：ObjectiveTo explore the clinical value of regulatory T cell detection diagnosis in patients with plasma cell mastitis(PCM).MethodsA total of 62 cases of PCM treated in Huarun Group Wuhan Steel General Hospital during May 2008 and May 2013 according to the disease course were divided into 18 cases of acute phase,31 cases of subacute phase and 13 cases of chronic phase;another 30 cases of breast cancer patients and 30 healthy women were selected as breast cancer group and healthy control group;the peripheral blood levels of CD4+CD25+CD127-regulatory T cells of each group were compared.ResultsThe peripheral blood level of CD4+CD25+CD127T cells,the percentage of CD4+CD25+FoxP3+T cells,transforming growth factor β(TGF-β) in the healthy control group,breast cancer group,PCM group were (4.0±1.8)%,(4.4±1.4)%,(87±16) mg/L; (3.0 + 0.5)%,(2.4±1.1)%,(53±19) mg/L;(5.8±2.2)%,(5.5±1.0)%,(385±37) mg/L.The PCM group′s indexes were significantly lower than the healthy control group(P<0.05);and the breast cancer group′s indexes were significantly higher than the healthy control group(P<0.05).Peripheral blood CD4+CD25+CD127-T cells,the percentage of CD4+CD25+FoxP3+T cells,TGF-β in the acute phase of PCM group were (2.8±1.2)%,(1.6±0.7)%,(35±11) mg/L，were significantly lower than that of the subacute phase(3.1±1.2)%,(2.4±1.0)%,(56±14) mg/L and chronic phase(3.5±1.2)%,(3.3±1.3)%,(70±22) mg/L,the acute phase were significantly lower than those of the subacute phase and chronic phase,the subacute phase were significantly lower than the chronic phase(P<0.05).Correlation analysis showed that the relationship between CD4+CD25+CD127-T cells and CD4+CD25+FoxP3+T cells,TGF-β were positively correlated(r=0.589，0.724，P<0.05),but had no obvious correction with C-reactive protein,erythrocyte sedimentation rate,IgA,IgG,IgM,C3,C4,platelet count,and hemoglobin(P>0.05).ConclusionCD4+CD25+CD127-T cells of peripheral blood in patients with PCM is significantly lower,thus can be used as one of the screening indexes of PCM.

Key words：Plasma cell mastitis; Regulatory T cells; FoxP3; Correlation

收稿日期：2014-12-08修回日期：2015-04-29編輯：相丹峰

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.16.068

中圖分類(lèi)號(hào)：R655.8

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1006-2084(2015)16-3060-03