童斯浩,汪 毅,龔 理,錢振玨,柯章敏,鮑揚(yáng)漪
硫利達(dá)嗪對(duì)乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231和MCF-7的殺傷效應(yīng)
童斯浩1,汪 毅1,龔 理1,錢振玨2,柯章敏1,鮑揚(yáng)漪1
摘要目的 觀察硫利達(dá)嗪對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231 和MCF-7的凋亡作用,并探討其機(jī)制。方法 采用MTT法測(cè)定硫利達(dá)嗪對(duì)細(xì)胞的抑制作用,計(jì)算半數(shù)抑制濃度(IC50);流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)硫利達(dá)嗪對(duì)細(xì)胞周期分布和凋亡的影響;比色法測(cè)定藥物對(duì)細(xì)胞Caspase-3活性的影響;Western blot法檢測(cè)凋亡調(diào)節(jié)蛋白Bcl-2、Bax表達(dá)的變化。結(jié)果
硫利達(dá)嗪作用24 h后,MDA-MB-231、MCF-7細(xì)胞增殖明顯呈劑量依賴性抑制,其IC50為18、22 μmol/L。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,隨著加入硫利達(dá)嗪濃度的提高,MDA-MB-231、MCF-7細(xì)胞均發(fā)生不同程度的G0/G1期阻滯、細(xì)胞凋亡程度增加及伴隨胞內(nèi)Caspase-3活性增加。各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。Western blot法結(jié)果顯示隨著藥物濃度的增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)下調(diào)、促凋亡蛋白Bax表達(dá)明顯上調(diào),各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論 硫利達(dá)嗪對(duì)乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231、MCF-7有顯著的增殖抑制作用且可顯著誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生G0/G1期阻滯及凋亡,伴隨Caspase-3活性的上調(diào),其毒性機(jī)制可能與腫瘤細(xì)胞內(nèi)抗凋亡蛋白Bcl-2下調(diào)、Bax上調(diào)有關(guān)。
關(guān)鍵詞乳腺癌;硫利達(dá)嗪;周期;凋亡;Caspase-3;Bcl-2;Bax
2014-12-29接收
作者單位:1安徽醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院腫瘤科,合肥 230061
2安徽醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院腫瘤科,合肥 230001
乳腺癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率逐年上升且趨向低齡化;尤以雌激素、孕激素及人類表皮生長(zhǎng)因子受體2表達(dá)陰性的三陰乳腺癌惡性程度更高,預(yù)后較差,如何有效針對(duì)三陰乳腺癌的新藥研究成為目前乳腺癌治療的重點(diǎn)[1-2]。硫利達(dá)嗪為吩噻嗪衍生物,廣泛用于治療嚴(yán)重的精神和情緒障礙,如精神分裂癥[3]。在惡性腫瘤治療方面,該藥物起初被用于治療腫瘤相關(guān)發(fā)熱、出汗與抑郁癥[4]。研究[5]證實(shí)硫利達(dá)嗪在體外可對(duì)抗多種腫瘤細(xì)胞活性,提示其可能作為一種新型抗癌藥物,應(yīng)用于以后的腫瘤臨床治療。該研究以硫利達(dá)嗪作用于三陰乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞和乳腺癌MCF-7細(xì)胞,觀察其對(duì)乳腺癌細(xì)胞的周期變化及凋亡發(fā)生的影響,為乳腺癌的綜合治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù),為臨床研究奠定基礎(chǔ)。
1.1 材料
1.1.1 主要儀器 FACS Calibur流式細(xì)胞儀購(gòu)于美國(guó)BD公司;680全自動(dòng)酶標(biāo)儀購(gòu)于美國(guó)BIORAD公司;8000DH型二氧化碳培養(yǎng)箱購(gòu)于美國(guó)Thermo公司;CKX41型倒置顯微鏡購(gòu)于日本OLYMPUS公司。
1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物與細(xì)胞株 硫利達(dá)嗪購(gòu)自美國(guó)Gibco公司;乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7細(xì)胞株購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù),本實(shí)驗(yàn)室傳代保存。
1.1.3 主要試劑 高糖DMEM培養(yǎng)基、青霉素-鏈霉素雙抗、含乙二胺四乙酸(EDTA)胰酶、二甲基亞砜(DMSO)、胎牛血清購(gòu)于美國(guó)Gibco公司;流式抗體Annexin V-FICT/PI雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞周期檢測(cè)試劑盒、Caspase-3活性檢測(cè)試劑盒購(gòu)于中國(guó)貝博公司;MTT法檢測(cè)試劑盒購(gòu)于美國(guó)Sigma公司;小鼠抗人Bcl-2、Bax單克隆抗體購(gòu)于美國(guó)Abcam公司。
1.2 方法
1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及藥物配制 人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231、MCF-7細(xì)胞接種于10%胎牛血清、1%雙抗(100 μg/ml的青霉素和鏈霉素)的高糖DMEM培養(yǎng)基中,置于溫度為37℃、5%CO2飽和濕度條件下培養(yǎng)。2~3 d換液,0.25%胰酶消化傳代,取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。硫利達(dá)嗪原藥以生理鹽水、DMSO輔助溶解,配成0.1 mol/L的原液,分裝后放置-80℃?zhèn)溆?。?shí)驗(yàn)時(shí)將分裝好的原液配制成相應(yīng)的工作液,DMSO終濃度小于0.1%。
1.2.2 細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn) 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期乳腺癌細(xì)胞,0.25%胰酶消化,1 000 r/min離心5 min,重復(fù)2次;調(diào)整細(xì)胞密度為4×104個(gè)/ml,100 μl/孔接種至96孔板。4~6 h待細(xì)胞貼壁后換液,37℃孵育過(guò)夜,實(shí)驗(yàn)組(5、10、15、20、25、30 μmol/L硫利達(dá)嗪),
對(duì)照組(加入培養(yǎng)基),分別培養(yǎng)6、12、24 h,倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組均設(shè)3個(gè)復(fù)孔。MTT法檢測(cè)時(shí)每孔加入10 μl MTT(5 g/L),避光孵育4 h,棄上清液;每孔加入100 μl DMSO,室溫振蕩10 min,以酶標(biāo)儀在490 nm雙波長(zhǎng)檢測(cè)相應(yīng)的吸光度(absorbance,A)。抑制率(%)=(對(duì)照組孔A值-實(shí)驗(yàn)組孔A值)/對(duì)照組孔A值×100%。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。
1.2.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期及凋亡的變化 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231、MCF-7,調(diào)整細(xì)胞密度至3×104個(gè)/ml,以每孔2 ml接種于6孔板;實(shí)驗(yàn)組3孔,對(duì)照組1孔。硫利達(dá)嗪分別以15、20、25 μmol/L加入實(shí)驗(yàn)組孔,對(duì)照組換液不加藥;繼續(xù)培養(yǎng)24 h后,胰酶消化細(xì)胞,1 000 r/min離心5 min,棄上清液;預(yù)冷PBS洗滌細(xì)胞2遍,再將細(xì)胞加入4℃70%無(wú)水乙醇溶液混勻,固定過(guò)夜。第2天,1 000 r/min離心5 min,棄乙醇溶液,預(yù)冷PBS洗滌細(xì)胞2遍后棄上清液;加入400 μl溴化丙啶(propidium iodide,PI)染液,4℃避光孵育40 min,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期,實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。以同樣上述體系培養(yǎng)、處理細(xì)胞,收集細(xì)胞(包括上清液中細(xì)胞),預(yù)冷的PBS洗滌2次,調(diào)整細(xì)胞密度為1×106/ml,取60 μl懸液加入流式管中,以10 μl Annexin V-FITC和5 μl PI標(biāo)記,震蕩混勻后室溫避光孵育15 min,PBS洗滌2遍后加入400 μl流式鞘液,以流式檢測(cè)細(xì)胞凋亡程度。Annexin V-FITC和PI標(biāo)記的細(xì)胞即為凋亡細(xì)胞。細(xì)胞凋亡率(%)=凋亡細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。
1.2.4 Caspase-3活性的檢測(cè) 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞密度3×104個(gè)/ml培養(yǎng)于6孔板中;實(shí)驗(yàn)組3孔,對(duì)照組1孔,每孔2 ml。待細(xì)胞4~6 h貼壁后換液,37℃孵育過(guò)夜,以15、20、25 μmol/L的硫利達(dá)嗪加入實(shí)驗(yàn)組孔培養(yǎng)24 h;每孔分別胰酶消化,1 000 r/min離心5 min,PBS洗滌2遍;收集細(xì)胞并裂解,取樣本100 μl、Ac-DEVD-pNA(Caspase-3四肽熒光底物)10 μl共同加入96孔板中;37℃孵育1 h后于波長(zhǎng)為405 nm處檢測(cè)樣本A值,以不加底物的樣本為空白對(duì)照,實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。
1.2.5 Western blot法檢測(cè)蛋白表達(dá) 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞密度3×104個(gè)/ml培養(yǎng)于6孔板中,每孔2 ml;實(shí)驗(yàn)組3孔,對(duì)照組1孔。待4~6 h細(xì)胞貼壁后換液,37℃孵育過(guò)夜,硫利達(dá)嗪分別以15、20、25 μmol/L加入實(shí)驗(yàn)組孔,培養(yǎng)24 h;PBS洗滌2遍,收集細(xì)胞。蛋白裂解液冰上裂解30 min,4℃12 000 r/min離心30 min提取總蛋白。BCA法蛋白定量后加入5×Loading Buffer,100℃變形15 min;12% SDS-PAGE凝膠電泳,按照30 μg/孔上樣;12%SDSPAGE凝膠電泳,恒壓80 V電泳至分離膠,恒壓120 V至電泳結(jié)束,電轉(zhuǎn)印至PVDF膜上(220 mA、120 min)。TBST配制5%脫脂牛奶室溫封閉2 h,加入小鼠抗Bcl-2(1∶1 000)、小鼠抗Bax(1∶1 000)一抗室溫孵育1 h,TBST沖洗3次,每次10 min。辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記山羊抗小鼠二抗(1∶5 000)室溫孵育1 h,TBST沖洗3次,每次10 min;ECL顯影,暗室曝光成像。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行分析,數(shù)據(jù)以±s表示。組間比較采用單因素方差分析及Dunnette-t檢驗(yàn)。
2.1 硫利達(dá)嗪對(duì)乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231、MCF-7增殖的影響 MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示,硫利達(dá)嗪對(duì)兩株細(xì)胞的增殖抑制效應(yīng)呈劑量依賴性增強(qiáng)。藥物分別作用6、12、24 h,其中6 h中25 μmol/L濃度的硫利達(dá)嗪即可使MDA-MB-231的增殖抑制率達(dá)約76%,MCF-7達(dá)約70%。方差分析MDA-MB-231細(xì)胞MCF-7細(xì)胞組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=3.029E3、2.525E3,P<0.01)。各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),見(jiàn)圖1。通過(guò)SPSS 16.0軟件計(jì)算,硫利達(dá)嗪對(duì)MDA-MB-231和MCF-7的半數(shù)抑制濃度(IC50)值為18、22 μmol/L。細(xì)胞光鏡(×200倍)下觀察,硫利達(dá)嗪作用24 h后,對(duì)照組細(xì)胞呈現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)的貼壁生長(zhǎng),輪廓明確、清楚,生長(zhǎng)旺盛;而隨著藥物濃度的增加,細(xì)胞明顯輪廓不清、貼壁不緊、體積縮小、邊緣透亮、間隙增加,甚至出現(xiàn)漂浮狀細(xì)。見(jiàn)圖2、3。
2.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)硫利達(dá)嗪對(duì)MDA-MB-231、MCF-7細(xì)胞凋亡及周期的影響 流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示,15、20、25 μmol/L藥物作用24 h后MDA-MB-231的凋亡率為9.33%、33.94%、78.71%,MCF-7凋亡率為10.47%、27.50%、60.62%。方差分析MDA-MB-231細(xì)胞、MCF-7細(xì)胞組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=4.137E3、3.099E3,P<0.01)。各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,P<0.01),見(jiàn)圖4、5。周期分析顯示,MDA-MB-231、MCF-7在硫利達(dá)嗪作用24 h后均出現(xiàn)G0/G1期阻滯。G0/G1期方差分析MDA-MB-231細(xì)胞、MCF-7細(xì)胞,組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=812.229、265.542,P<0.01)。各實(shí)驗(yàn)
組與對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)圖6、7。
2.3 硫利達(dá)嗪對(duì)MDA-MB-231、MCF-7細(xì)胞Caspase-3活性的影響 Caspase-3活性檢測(cè)結(jié)果顯示,藥物作用24 h后,隨著加入硫利達(dá)嗪濃度的增加,乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231、MCF-7的Caspase-3活性明顯增加。方差分析MDA-MB-231細(xì)胞、MCF-7細(xì)胞,組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=806.448、1.834E3,P<0.01)。各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),見(jiàn)圖8。
2.4 Western blot法檢測(cè)硫利達(dá)嗪對(duì)MDA-MB-231、MCF-7細(xì)胞相關(guān)凋亡蛋白表達(dá)的影響 不同濃度硫利達(dá)嗪作用24 h后,Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示隨著藥物濃度的增加,抗凋亡蛋白Bcl-2下調(diào)、促凋亡蛋白Bax表達(dá)明顯上調(diào),各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),見(jiàn)圖9、10。
乳腺癌治療手段多樣,但在臨床治療中常伴隨易耐藥、易復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移率高等特點(diǎn),成為治療中的難題。硫利達(dá)嗪作為治療精神疾病的藥物已經(jīng)在臨床上廣泛運(yùn)用,隨著研究的深入,其抗腫瘤的特性也得到證實(shí)。研究[6-7]顯示硫利達(dá)嗪可顯著降低人類急性髓細(xì)胞白血病細(xì)胞的增殖與自我更新能力。Byun et al[8]發(fā)現(xiàn)硫利達(dá)嗪可通過(guò)抑制FAK-mTOR通路下調(diào)腫瘤細(xì)胞血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá),從而降低宮頸癌細(xì)胞OVCAR-3、2774增殖速度和腫瘤的侵襲能力。Rho et al[9]發(fā)現(xiàn)硫利達(dá)嗪對(duì)宮頸癌細(xì)胞具有顯著的細(xì)胞毒性,并可下調(diào)周期蛋白CyclinD1和CDK4的合成,誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生G1期阻滯,并通過(guò)抑制PI3K/AKT途徑發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)。
細(xì)胞凋亡是細(xì)胞受環(huán)境刺激后,在基因調(diào)控下產(chǎn)生的主動(dòng)死亡過(guò)程。Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)、Bcl-2家族抗凋亡和促凋亡蛋白表達(dá)的改變等,都與凋亡的發(fā)生密
切相關(guān)[10]。Caspase家族中的Caspase-3在凋亡中起到關(guān)鍵作用,是多種凋亡途徑的共同下游效應(yīng)部分?;罨腃aspase-3可直接剪切多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶、DNA依賴性蛋白激酶等,從而影響細(xì)胞DNA的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄及修復(fù)過(guò)程。Bcl-2家族蛋白通過(guò)維持線粒體外膜的完整性,從而控制線粒體內(nèi)細(xì)胞色素C等促凋亡分子的釋放。其中Bcl-2蛋白在線粒體膜外發(fā)揮作用,維持線粒體膜穩(wěn)定性,而B(niǎo)ax蛋白通過(guò)破壞線粒體膜的完整性發(fā)揮促凋亡作用[11]。Bcl-2和Bax通過(guò)同源和異源性二聚體來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡,Bcl-2/Bax正常情況下在細(xì)胞中比例相對(duì)固定,若外界刺激使得Bcl-2表達(dá)增高時(shí),可致Bax的同源二聚體分離且促使細(xì)胞出現(xiàn)抗凋亡作用,從而引起腫瘤的發(fā)生[12]。
本研究結(jié)果顯示,硫利達(dá)嗪于體外可顯著抑制乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231、MCF-7的增殖,增殖抑制率隨著時(shí)間的延長(zhǎng)和濃度的增加而升高;細(xì)胞光鏡下的變化亦非常明顯,在20 μmol/L濃度時(shí),乳腺癌細(xì)胞即明顯出現(xiàn)皺縮、數(shù)量降低。流式細(xì)胞術(shù)顯示,在不同硫利達(dá)嗪藥物濃度下,兩組乳腺癌細(xì)胞株均發(fā)生了G0/G1期阻滯,細(xì)胞凋亡率也隨著藥物濃度的增加而升高,而同比15、20、25 μmol/L濃度作用下,MDAMB-231 G0/G1期阻滯要明顯高于MCF-7;在20、25 μmol/L濃度下,三陰乳腺癌MDA-MB-231的凋亡率也要高于MCF-7,這為尋求三陰乳腺癌新的治療方法提供重要依據(jù)。本研究顯示,兩組乳腺癌細(xì)胞隨著藥物濃度增加,Caspase-3活性明顯增加,與此同時(shí),兩組乳腺癌細(xì)胞抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)下調(diào),且促凋亡蛋白Bax表達(dá)上調(diào),提示其促凋亡機(jī)制可能是硫利達(dá)嗪下調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2、上調(diào)促凋亡蛋白Bax,破壞了線粒體膜完整性而促發(fā)的。另外,因Bcl-2/Bax表達(dá)水平的改變,提示硫利達(dá)嗪在低濃度時(shí)可能會(huì)對(duì)腫瘤細(xì)胞具有一定的表觀遺傳修飾效應(yīng)。
綜上所述,硫利達(dá)嗪對(duì)乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231、MCF-7有著明顯的周期阻滯和凋亡效應(yīng),尤以對(duì)雌激素、孕激素及人類表皮生長(zhǎng)因子受體2陰性的乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的殺傷效應(yīng)更為顯著,提示其可能具有潛在治療三陰乳腺癌的價(jià)值。但是,硫利達(dá)嗪對(duì)腫瘤細(xì)胞其他凋亡調(diào)節(jié)蛋白的表達(dá)影響,其與化療藥物及靶向藥物等治療手段的配伍協(xié)同效應(yīng),以及在動(dòng)物模型上抗癌效應(yīng)及機(jī)制的證實(shí)尚需進(jìn)一步研究。
參考文獻(xiàn)
[1] 馬吉光,王寧菊,于文潔.“三陰”型與非“三陰”型乳腺癌患者的生物學(xué)行為差異性分析[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2011,31(10):1729-32.
[2] 王星星,孟 剛.浸潤(rùn)型導(dǎo)管癌中三陰乳腺癌的臨床特征與預(yù)后[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2009,44(5):606-12.
[3] von Bahr C,Movin G,Nordin C,et al.Plasma levels of thioridazine and metabolites are influenced by the debrisoquin hydroxylation phenotype[J].Clin Pharmacol Ther,1991,49(3):234-40.
[4] Cowap J,Hardy J.Thioridazine in the management of cancer-related sweating[J].J Pain Symptom Manage,1998,15(5):266.
[5] Kamiwatari M,Nagata Y,Kikuchi H,et al.Correlation between reversing of multidrug resistance and inhibiting of[3H]azidopine photolabeling of P-glycoprotein by newly synthesized dihydropyridine analogues in a human cell line[J].Cancer Res,1989,49(12):3190 -5.
[6] Burgess D J.Stem cells.Antipsychotic to anticancer agent?[J].Nat Rev Cancer,2012,12(7):452-3.
[7] Sachlos E,Risueo R M,Laronde S,et al.Identification of drugs including a dopamine receptor antagonist that selectively target cancer stem cells[J].Cell,2012,149(6):1284-97.
[8] Byun H J,Lee J H,Kim B R,et al.Anti-angiogenic effects of thioridazine involving the FAK-mTOR pathway[J].Microvasc Res,2012,84(3):227-34.
[9] Rho S B,Kim B R,Kang S.A gene signature-based approach identifies thioridazine as an inhibitor of phosphatidylinositol-3′-kinase (PI3K)/AKT pathway in ovarian cancer cells[J].Gynecol Oncol,2011,120(1):121-7.
[10]Gómez-Fernández J C.Functions of the C-terminal domains of apoptosis-related proteins of the Bcl-2 family[J].Chem Phys Lipids,2014,183:77-90.
[11]Anilkumar U,Prehn J H.Anti-apoptotic BCL-2 family proteins in acute neural injury[J].Front Cell Neurosci,2014,8:281.
[12]Ji M,Yuan L,Lv X,et al.EBP50 regulates the apoptosis of pancreatic cancer cells by decreasing the expression levels of Bcl-2[J].Exp Ther Med,2014,8(3):919-24.
Killing effect of thioridazine on the proliferation of breast cancer cells MDA-MB-231 and MCF-7
Tong Sihao,Wang Yi,Gong Li,et al
(Dept of Oncology,The Third Affiliated Hospital of Anhui Medical University,Hefei 230061)
AbstractObjectives To investigate the anti-proliferative and apoptosis-inducing effects and the possible molecular mechanisms of thioridazine on breast cancer cell lines MDA-MB-231 and MCF-7.Methods The anti-proliferative effects of thioridazine on MDA-MB-231 and MCF-7 cells were measured with MTT and the values of IC50were calculated.Flow cytometry was used to measure the cell cycle arresting and apoptosis.Caspase-3 activity assay kit was
performed to detect Caspase-3 activity levels.The expression changes of the Bcl-2 and Bax were detected by western blot.Results After treated with thioridazine for 24 h,MDA-MB-231 and MCF-7 cells were significantly inhibited by the drug extracts.The values of IC50were respectively 18 μmol/L and 22 μmol/L.Flow cytometry showed cells’G0/G1phase arrest along with an increase of apoptosis and intracellular Caspase-3 activity with the increase of thioridazine concentration.Western blot showed concentration-dependant decrease in Bcl-2 and increase in Bax proteins.Each experimental group compared with the control group,the differences were statistically significant(P<0.01).Conclusion Thioridazine has obvious cytotoxic effect on breast cancer cells MDA-MB-231 and MCF-7.It obviously induces breast cancer cells G0/G1phase arresting and apoptosis,accompanied by up-regulation of Caspase-3 activity.The mechanism may be related to the down-regulation of Bcl-2 and up-regulation of Bax.
Key wordsbreast cancer;thioridazine;cell cycle;apoptosis;Caspase-3;Bcl-2;Bax
作者簡(jiǎn)介:童斯浩,男,碩士研究生;鮑揚(yáng)漪,女,教授,主任醫(yī)師,碩士生導(dǎo)師,責(zé)任作者,E-mail:761760565@qq.com
基金項(xiàng)目:合肥市科技計(jì)劃項(xiàng)目[編號(hào):合科(2013)183-28]
文獻(xiàn)標(biāo)志碼A
文章編號(hào)1000-1492(2015)04-0452-07
中圖分類號(hào)R 737.9;R 971.41