何賢海

（貴州省德江縣農(nóng)牧科技局動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州德江 565200）

禽流感血清抗體和卵黃抗體的比較研究

何賢海

（貴州省德江縣農(nóng)牧科技局動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州德江 565200）

禽流感是一種人畜共患的急性、烈性傳染病，感染家禽死亡率非常高，對(duì)養(yǎng)殖業(yè)造成的經(jīng)濟(jì)損失難以估量。常規(guī)監(jiān)測(cè)禽流感疫苗免疫效果的方法是檢測(cè)禽流感血清抗體，但存在采血過程費(fèi)時(shí)費(fèi)力、容易引起家禽應(yīng)激反應(yīng)等問題。大量試驗(yàn)證明，禽流感卵黃抗體效價(jià)與血清抗體效價(jià)基本一致，且具有操作簡(jiǎn)單的優(yōu)點(diǎn)，為禽流感的抗體檢測(cè)提供了新的選擇。

禽流感 血清抗體 卵黃抗體 比較研究

禽流感（AI）是由A型流感病毒引起的一種人畜共患的急性、烈性傳染病，禽類一旦感染，輕者可引起禽類產(chǎn)蛋量急劇降低，嚴(yán)重者可導(dǎo)致禽類突然死亡，且死亡率非常高[1]，是近年來在家禽養(yǎng)殖業(yè)中造成嚴(yán)重危害的傳染病之一。如果接觸到感染禽流感病毒的禽及其排泄物、分泌物、雞胚、種蛋和精液，或者是接觸到受到污染的飼料、水、墊草等媒介，禽流感就能經(jīng)呼吸道、消化道傳播，傳播速度非常迅速。水禽和候鳥也是禽流感的主要傳播者，傳播面積巨大。一旦禽流感暴發(fā)，不僅會(huì)給養(yǎng)殖業(yè)帶來災(zāi)難性的危害，造成難以估量的經(jīng)濟(jì)損失，甚至?xí){到人類的生命安全。因此，日常中做好高致病性禽流感的監(jiān)測(cè)工作，其為疫病防控起到了重要作用。

1 禽流感血清抗體檢測(cè)法

目前，在家禽養(yǎng)殖過程中防控禽流感病毒流行的主要方法是對(duì)家禽進(jìn)行禽流感疫苗接種。接種后，為了能夠及時(shí)掌握疫苗的免疫效果、了解雛雞母源性抗體水平的高低以便建立科學(xué)的免疫計(jì)劃，確定是否實(shí)施強(qiáng)化免疫等，常規(guī)的監(jiān)測(cè)方法是檢測(cè)免疫家禽血清中的免疫抗體水平。但是這種方法的弊端在于，在采血過程中容易使家禽受到驚嚇，引起應(yīng)激反應(yīng)，使產(chǎn)蛋雞的產(chǎn)量急劇下降，甚至導(dǎo)致家禽死亡，給養(yǎng)殖戶造成不必要的經(jīng)濟(jì)損失，而且采血過程也比較麻煩，采血中如果稍微不注意造成血液污染或者溶血等情況發(fā)生，會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

2 禽流感卵黃抗體檢測(cè)法

以特異性抗原免疫母雞后，母雞體內(nèi)產(chǎn)生相對(duì)應(yīng)的特異性抗體，這種抗體除了存在于血清中，也存在于禽蛋的卵黃中，我們稱之為卵黃抗體（Yolk antibody，IgY）。

2.1 卵黃抗體檢測(cè)的可行性

早在20世紀(jì)80年代，我國就有利用卵黃樣本替代血清樣本進(jìn)行新城疫免疫抗體效價(jià)監(jiān)測(cè)的做法[2]，而且也逐漸延伸應(yīng)用到傳染性法氏囊、減蛋綜合征、傳染性喉氣管炎等禽病的防治中。近年來，國內(nèi)針對(duì)禽流感血清抗體和卵黃抗體的監(jiān)測(cè)效果也進(jìn)行了大量的研究討論。付興周對(duì)80只150日齡海蘭蛋雞進(jìn)行禽流感疫苗免疫后，采用β—微量法在30天內(nèi)多次測(cè)定血清及蛋黃中AI 的血凝抑制（HI）抗體，檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，免疫5天后，血清中開始檢測(cè)出HI抗體，到免疫后的第19天，抗體效價(jià)達(dá)到最高峰，而蛋黃中在免疫后的第7天可以檢測(cè)出HI抗體，之后抗體水平逐漸上升，至免疫后19～21天達(dá)到最高值，而且與血清中的HI抗體水平接近，差異不顯著[3]；呂運(yùn)蓮等的試驗(yàn)顯示，禽流感血清抗體和卵黃抗體效價(jià)分別為6.55和6.75，表明血清抗體效價(jià)與卵黃抗體效價(jià)基本一致[4]。這些試驗(yàn)都證明了用卵黃抗體代替血清抗體檢測(cè)效價(jià)是可行的。

2.2 卵黃抗體的特點(diǎn)

卵黃抗體的優(yōu)點(diǎn)有很多。第1，卵黃抗體的產(chǎn)量很高。產(chǎn)蛋母雞經(jīng)特異性抗原免疫后，可以產(chǎn)生持久性應(yīng)答反應(yīng)，抗體效價(jià)可維持?jǐn)?shù)月之久；第2，卵黃抗體耐酸、耐堿、耐熱，理化性質(zhì)非常穩(wěn)定；第3，卵黃抗體免疫測(cè)定中的干擾小，IgY不會(huì)和免疫球蛋白IgA和IgG結(jié)合，可避免這些因素所造成假陽性或假陰性結(jié)果[5]；第四，簡(jiǎn)單方便，從卵黃中檢測(cè)IgY比從動(dòng)物血清中檢測(cè)抗體更加方便，也免去了免疫動(dòng)物采血的痛苦。

2.3 卵黃抗體測(cè)定的局限性

雖然大量試驗(yàn)都證明用卵黃抗體代替血清抗體進(jìn)行禽流感疫苗效價(jià)檢測(cè)是可行的，但是這種方法仍然有一定的局限性。由于卵黃的形成需要9～10 d的時(shí)間，所以卵黃抗體與血清抗體的檢測(cè)結(jié)果相比有一定的滯后性，在抗體上升期間不能用卵黃代替血清進(jìn)行HI抗體監(jiān)測(cè)，所以不適用于發(fā)生AI疫情時(shí)的檢測(cè)，只適用于日常的疫情監(jiān)測(cè)。

3 結(jié)束語

運(yùn)用雞蛋卵黃抗體檢測(cè)法，能把因檢測(cè)抽血造成的應(yīng)激反應(yīng)、產(chǎn)蛋率下降等不利影響降到最低，且方法操作簡(jiǎn)單易行，檢測(cè)結(jié)果與血清抗體檢測(cè)結(jié)果基本一致，是一種值得日常疫情監(jiān)測(cè)中大面積推廣應(yīng)用的方法。

[1] 姚海潮，曾江勇，張成福.淺談禽流感的危害及防控[J].西藏科技，2008，（6）：54-56.

[2] 李向東，左興惠，劉文亮.不同日期所產(chǎn)雞卵與母雞血清中雞新誠疫抗體水平的比較[J].家畜傳染病，1988，（30）：12-13.

[3] 付興周.蛋雞血清及其蛋黃中禽流感病毒抗體的相關(guān)性[J].養(yǎng)禽與禽病防治，2005，（5）：16-17.

[4] 呂運(yùn)蓮，趙晏平，程朝友，周繼國.蛋雞血清抗體與卵黃抗體效價(jià)對(duì)比試驗(yàn)[J].當(dāng)代畜牧，2013，（9）：47-48.

[5] 韓麗麗.卵黃抗體的應(yīng)用研究進(jìn)展[J].科技視界，2012，（30）：85-86.

表1 RPHA法和AG法對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果

從表1顯示，山羊痘待檢樣品RPHA法陽性率80%，AGP法陽性率僅50%，試驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)AGP法陽性樣品，RPHA法一定是陽性。病毒培養(yǎng)液檢測(cè)結(jié)果，RPHA法陽性率100%，而AGP法陽性率為0。說明RPHA法敏感性明顯高于AGP法。

3 討論與分析

3.1本研究采用兔抗山羊痘病毒IgG致敏紅細(xì)胞建立的反向間接血凝試驗(yàn)，對(duì)山羊痘病毒抗原具有特異性和敏感性，與其他動(dòng)物病毒抗原不發(fā)生交叉反應(yīng)，比AGP法敏感，且致敏紅細(xì)胞的血凝性穩(wěn)定。本研究建立的方法可用于山羊痘的診斷和流行病學(xué)檢測(cè)，是一種靈敏、操作簡(jiǎn)單、快速的檢測(cè)方法。

3.2紅細(xì)胞的醛化固定和致敏方法較多。本試驗(yàn)采用了戊二醛醛化，結(jié)合鞣酸化處理，使紅細(xì)胞更具有穩(wěn)定性更敏感，消除了綿羊個(gè)體之間的差異而影響試驗(yàn)的重復(fù)性。