王拴旺，李永平，王樹林

1青海省武警總隊(duì)醫(yī)院，青海 西寧 810000；2青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院

膽囊炎是一種比較常見的腹部外科疾病，是由各種原因引起的淤滯膽汁被腸道細(xì)菌逆行感染后引起的膽囊組織炎性病變。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)目前約有一億多膽囊炎及其并發(fā)癥患者，約占總?cè)丝诘?%~10%，膽囊炎已成為影響我國(guó)國(guó)民健康的第二大腹部外科疾?。?］。由于青藏高原人們的生活和飲食習(xí)慣等因素，導(dǎo)致其膽囊炎發(fā)病率高于全國(guó)平均水平。五味獐牙菜湯是藏醫(yī)經(jīng)典方劑中治療膽囊炎、黃疸型肝炎首選藥方之一，由印度獐牙菜、榜嘎、力嘎都、寬筋藤、小檗皮組成，收載于《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·藏藥》第1冊(cè)［2］，歷代醫(yī)家用其治療膽囊炎、黃疸型肝炎，療效確切。本研究通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究探討該藥的藥效學(xué)及部分作用機(jī)制，旨在為五味獐牙菜湯的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 新西蘭家兔，雌雄各半，體質(zhì)量(2.2±0.2)kg，由青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 1)五味獐牙菜湯按原方比例在實(shí)驗(yàn)室自提，配制成濃度為3 g（生藥）/mL的溶液，4℃冰箱保存；2)消炎利膽片(廣東省博羅先鋒藥業(yè)集團(tuán)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：011104)。

1.3 主要試劑 IL-1β酶標(biāo)試劑盒 (進(jìn)口分裝，上海森雄科技實(shí)業(yè)有限公司提供）；PGE2酶標(biāo)試劑盒(進(jìn)口分裝，上海森雄科技實(shí)業(yè)有限公司）；致病菌株選用埃希氏大腸桿菌（青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院微生物教研室提供），以生理鹽水配制成濃度大約為2×109／mL菌液。

1.4 主要儀器 全自動(dòng)酶標(biāo)儀(BIO-ROD公司)及洗板機(jī)；RE-52A真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠提供)；電子分析天平(奧豪斯國(guó)際貿(mào)易上海有限公司提供)；TDL 50B臺(tái)式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠提供)。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法

1.5.1 動(dòng)物分組 動(dòng)物購(gòu)回適應(yīng)性喂養(yǎng)2天后隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、五味獐牙菜湯低劑量組、五味獐牙菜湯中劑量組、五味獐牙菜湯高劑量組、消炎利膽片組(陽(yáng)性對(duì)照組)6組，每組10只。

1.5.2 造模方法 依據(jù)文獻(xiàn)［3-5］加以改進(jìn)，家兔用3%戊巴比妥鈉溶液注射麻醉，仰位固定，備皮后按手術(shù)常規(guī)進(jìn)行無(wú)菌消毒，腹部正中切口，將肝臟翻轉(zhuǎn)出腹腔，暴露膽囊。對(duì)空白對(duì)照組家兔抽出膽汁，不注射菌液，結(jié)扎針孔，逐層縫合肌層及皮膚，傷口表面消毒后，常規(guī)喂養(yǎng)。其余各組手術(shù)過(guò)程同空白對(duì)照組，但抽出膽汁后，向膽囊內(nèi)緩慢注入0.3mL菌液，結(jié)扎針孔，余同空白對(duì)照組。手術(shù)前后測(cè)量家兔肛溫和體質(zhì)量，以后每天測(cè)量1次。

1.5.3 給藥方法 于術(shù)后第2天開始各組動(dòng)物灌胃給藥或給生理鹽水，每天1次，連續(xù)15天。

1.6 膽汁收集方法［6］最后1次灌胃給藥后間隔30分鐘，用3%戊巴比妥鈉溶液進(jìn)行耳緣靜脈注射麻醉，麻醉后背位固定于手術(shù)臺(tái)，開腹，分離出呈白色的韌性膽管，下穿2根絲線，將乳頭部扎緊，用眼科剪在膽管上向肝臟方向剪出“V”形切口，再在膽管中向肝臟方向插入外徑1mm的塑料管，用絲線扎緊，蓋上紗布。手術(shù)完畢后先穩(wěn)定20分鐘，再每隔30分鐘收集膽汁一次，分別收集30、60、90分鐘家兔的膽汁且與空白對(duì)照組比較。

1.7 血清IL-1β、PGE2檢測(cè) 膽汁引流結(jié)束后，腹主動(dòng)脈取血，分別做血清IL-Iβ、PGE2檢測(cè)。采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)方法(enzyme-l inked immunosorbent assay，ELISA)，具體流程按試劑盒檢測(cè)程序進(jìn)行。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，計(jì)量資料以(χ±s)表示，采用單因素方差分析，組間多重比較采用LSD-t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 五味獐牙菜湯對(duì)家兔膽汁流量的影響 與模型組比較，五味獐牙菜湯高、中、低3個(gè)劑量組和消炎利膽片組均有明顯利膽作用(P＜0.01)，見表1。

表1 各組家兔膽汁流量變化情況(χ±s)mL

2.2 五味獐牙菜湯對(duì)家兔血清IL-1β、PGE2的影響 與空白組相比，模型對(duì)照組IL-1β、PGE2顯著增高(P＜0.001)；各治療組 IL-1β、PGE2顯著低于模型對(duì)照組(P＜0.01)，見表2。

表2 五味獐牙菜湯對(duì)家兔血清IL-1β、PGE2的影響

3 討論

中醫(yī)將膽囊炎歸為“膽脹”“脅痛”和“黃疸”等范疇，認(rèn)為由肝膽失于疏泄，濕熱內(nèi)生而成，治療上遵循“痛則不通，通則不痛”的原則，強(qiáng)調(diào)疏通治法［7-9］。五味獐牙菜湯以疏肝利膽為主，配伍清熱利濕之品，以達(dá)清利肝膽濕熱之目的。該藥組方精練，用藥嚴(yán)謹(jǐn)，配伍科學(xué)，獨(dú)具特色。方中印度獐牙菜是藏藥蒂達(dá)的主要來(lái)源之一，被藏醫(yī)尊為蒂達(dá)之上品，在經(jīng)典藏醫(yī)藥著作《月王藥診》《四部醫(yī)典》和《晶珠本草》中均有詳細(xì)記載，是藏醫(yī)治療肝膽疾病的首選藥物之一，味苦，性涼，清肝利膽，退諸熱；榜嘎味苦，性涼，有小毒，清熱解毒利濕。主治肝炎、膽囊炎、肺炎、感冒發(fā)熱、咽喉炎、胃腸炎；力嘎都(狹葉紅景天)味澀，性溫，益氣活血，通脈平喘；寬筋藤味苦，性涼，清熱除濕，祛風(fēng)通絡(luò)；小檗皮味苦，性寒，清熱燥濕、瀉火解毒，治疫癘、陳熱病、黃水病。5藥共奏清熱解毒、利濕退黃的作用，用于膽囊炎、黃疸型肝炎的治療。

臨床上，膽囊炎病人均有不同程度的膽汁淤積現(xiàn)象。正常膽汁由于各種原因淤積于膽囊體部不得排泄，常會(huì)造成膽汁的主要成分發(fā)生改變，使膽固醇和膽紅素含量升高，而膽汁酸含量降低。膽固醇含量的升高和膽汁酸含量的降低又會(huì)使膽汁變得粘稠，以致凝集固化，甚至形成結(jié)石，進(jìn)一步堵塞膽管，一方面使膽汁流通更加不暢，另一方面又會(huì)加重感染，造成其他并發(fā)癥的發(fā)生。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，五味獐牙菜湯散各劑量組均可增加家兔的膽汁流量，提示五味獐牙菜湯在促進(jìn)家兔膽汁分泌方面具有良好效果，具有較好的利膽作用。

如何消除炎癥反應(yīng)是治療膽囊炎的第一要?jiǎng)?wù)，炎癥反應(yīng)貫穿了膽囊炎發(fā)病的始終，是最直接的致病原因。主要炎癥因子IL-1β、PGE2的含量可反映炎癥反應(yīng)的輕重程度，因此，測(cè)定主要炎癥因子的含量可以直觀了解藥物是否具有消炎效果。研究結(jié)果表明五味獐牙菜湯治療膽囊炎的作用機(jī)制可能與其能夠降低炎癥組織中的主要炎癥因子的含量有關(guān)。

［1］施維錦.膽道外科學(xué)［M］.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1997：69.

［2］ 中國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)藏藥：第一冊(cè)［M］.北京：中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部，1995：279.

［3］ 郭鷂.人類疾病的動(dòng)物模型［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1982：302-305.

［4］ 邸琳,劉新宇,趙濤.大腸桿菌致家兔膽囊炎的動(dòng)物模型研究［J］.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，27(2):159-160.

［5］ 闞紅衛(wèi),魏安祥.膽囊炎病因及其動(dòng)物模型研究進(jìn)展［J］.中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2008，13(8):957-960.

［6］ 陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)［M］.2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：452-455.

[7] 楊維建,李娟，汪佳明，等.慢性膽囊炎中醫(yī)治療研究進(jìn)展[J].西部中醫(yī)藥,2011,24(12):95-97.

[8] 成旭.疏肝利膽湯治療慢性結(jié)石性膽囊炎30例臨床觀察[J].西部中醫(yī)藥,2013,26(6):66-68.

[9] 徐慶山,牛術(shù)仙,杜忠海.調(diào)脾疏膽湯治療慢性膽囊炎52例臨床觀察[J].河北中醫(yī),2011,33(1):45.