★　張晗羚　華碧春　(福建中醫(yī)藥大學藥學院　福州 350122)

山豆根急性毒性實驗研究

★張晗羚華碧春(福建中醫(yī)藥大學藥學院福州 350122)

摘要：目的:實驗研究山豆根水煎液對小鼠的急性毒性，為山豆根的臨床安全與合理用藥提供實驗依據(jù)。方法:采用灌胃給藥的方式，按照經(jīng)典急性毒性實驗方法測定山豆根水煎液的小鼠口服半數(shù)致死量(LD50)值，觀察小鼠中毒癥狀，記錄小鼠的累計死亡數(shù)和體重變化。結果:小鼠口服山豆根水煎液的LD50及95%可信限為47.918(45.192～50.665)g·kg-1，主要毒性癥狀為閉眼、怠動、腹式呼吸等。結論:小鼠一次性口服大劑量山豆根水煎液可造成急性中毒，中毒表現(xiàn)主要為肝臟的損傷。

關鍵詞：山豆根；水煎液；急性毒性

山豆根為豆科屬植物越南槐SophoratonkinensisGagnep.的干燥根和根莖[1]。苦，寒，有毒。歸肺、胃經(jīng)。具有清熱解毒，利咽消腫之功效。主治火毒蘊結、咽喉腫痛、牙齦腫痛、口舌生瘡及肺熱咳嗽等癥?！肚笳姹静荨穼⑵渥u為“治療咽喉腫痛第一要藥”。本品始載于《開寶本草》：“解諸藥毒，止痛，消瘡腫毒，急黃發(fā)熱，咳嗽，殺小蟲?！庇置麨閺V豆根、南豆根、北豆根、苦豆根等，主要分布在我國東北、華北和西北等地。由于自古以來中藥同名異物現(xiàn)象的普遍存在，山豆根與防己科植物蝙蝠葛MenispermumdauricumDC.的干燥根莖——北豆根的混淆用藥加劇了人們對于山豆根毒性的誤解，許多醫(yī)家畏其毒而不敢用，限制了山豆根良好藥效的發(fā)揮。近年來中藥的不良反應受到了社會各界的廣泛關注，山豆根的臨床不良反應報道屢見不鮮，但實驗研究報道仍不多見。現(xiàn)本文對小鼠單次灌服山豆根水煎液后出現(xiàn)的急性毒性反應做了初步研究，以期為山豆根的毒性評價和臨床安全用藥提供參考。

1動物、材料與儀器

1.1動物健康KM小鼠(合格號SCXK(滬)2012-0002)，雌雄各半，SPF級，體重(20±2)g，由上海斯萊克動物中心提供，動物飼養(yǎng)在福建中醫(yī)藥大學動物實驗中心SPF級飼養(yǎng)室，實驗期間自由飲水、攝食，室內(nèi)溫度恒定在21℃～24℃，濕度恒定于40%～60%，通風良好。

1.2藥材山豆根藥材，產(chǎn)地廣西，批號20130315，購置于福州回春藥業(yè)有限公司，經(jīng)福建中醫(yī)藥大學藥學院楊成梓教授鑒定系為豆科屬植物越南槐SophoratonkinensisGagnep.的干燥根和根莖。

1.3儀器電子天平FA2004N(上海)；離心機80-2B(上海安亭科學儀器廠)；旋轉蒸發(fā)儀RE-52(上海亞榮生化儀器廠)；循環(huán)水真空泵SHB-III(鄭州長城科工貿(mào)有限公司)；水浴鍋(上海錦屏科學儀器公司)。

2實驗方法

2.1山豆根藥材的制備取山豆根藥材100g，加10倍量水(1 000mL)浸泡60min，武火煮沸后文火煎煮30min，紗布過濾倒出濾液；濾渣再加5倍量水(500mL)煎煮，武火煮沸后文火煎煮30min，合并兩次濾液，3000r·min-1，離心20min，倒出上清液，旋轉蒸發(fā)儀濃縮至生藥量2.0g·mL-1，4℃保存，備用。

2.2山豆根水煎液半數(shù)致死量(LD50)測定根據(jù)預實驗結果，山豆根水煎液可測出小鼠口服LD50值，LD0=40g·kg-1，LD100=60g·kg-1。按照改良寇氏法計算組間r=0.9。正式實驗分設5個劑量組，劑量分別為60g·kg-1、54g·kg-1、48.6g·kg-1、43.74g·kg-1、39.37g·kg-1。

取KM小鼠60只，雌雄各半，按體重隨機分成6組(空白對照組和5個劑量組)。小鼠禁食不禁水12h后，按最大灌胃量40mL·kg-1體積灌胃給藥1次，空白組灌胃等體積的蒸餾水。各組給藥2h后恢復給食，正常飼養(yǎng)，觀察14d；給藥30min內(nèi)，連續(xù)觀察；30min～2h，每10min觀察1次；2h～4h，每30min觀察1次；4h～8h，每1h觀察1次；8h～24h，每4h觀察1次；24h之后，每天觀察1次。觀察內(nèi)容為小鼠進食、飲水、毛色、精神、呼吸等一般情況及中毒和死亡情況。觀察期間每日記錄小鼠的體重，死亡小鼠解剖肉眼觀察各臟器有無異常變化。

2.3統(tǒng)計學方法采用Bliss軟件計算山豆根水煎液的LD50。

3結果

3.1山豆根水煎液半數(shù)致死量(LD50)山豆根水煎液灌胃小鼠25min后出現(xiàn)小鼠抽搐，繼而死亡。多數(shù)小鼠的死亡集中在12h內(nèi)，各組小鼠的死亡率分別為100%、80%、60%、30%、0%(表1)，灌胃后不同時間小鼠的累計死亡數(shù)見圖1。死亡動物解剖時肉眼可見少部分肝臟存在散在淤血點。根據(jù)各組死亡數(shù)計算LD50值為47.918g·kg-1，95%可信限為45.192～50.665g·kg-1。

回歸方程y(Probit)=-8.977+0.187log(D)

半數(shù)致死量LD50=47.918g·kg-1

LD50(Feiller)校正95%可信限=45.192～50.665g·kg-1

LD5=39.139g·kg-1

LD95=56.698g·kg-1

表1　山豆根水煎液半數(shù)致死量

圖1　山豆根水煎液小鼠急毒(LD50)實驗時間-累計死亡曲線

3.2山豆根水煎液致小鼠急性毒性癥狀山豆根水煎液灌胃1min后小鼠出現(xiàn)雙目閉合、怠動、豎毛等毒性反應，毒性癥狀的發(fā)生率及發(fā)生時間呈現(xiàn)一定的劑量相關性。毒性癥狀在給藥后48h內(nèi)基本消失。小鼠灌胃山豆根水煎液急性毒性癥狀見表2。

表2　山豆根水煎液小鼠急性毒性癥狀

3.3山豆根水煎液急毒(LD50)實驗存活動物體重變化60g·kg-1劑量組動物全部死亡，最后一只死亡時間在第7d，存活期間每日稱重，體重呈現(xiàn)下降趨勢。其余各組動物體重增長緩慢。低劑量組增長趨勢高于高劑量組。給藥后第4d各給藥組小鼠體重逐漸恢復正常增長(圖2)。

圖2　山豆根水煎液急毒(LD50)存活實驗動物體重變化

4討論

山豆根為臨床常用藥，現(xiàn)代中西醫(yī)結合臨床將山豆根用于治療咽喉腫痛、牙齦腫痛、抗腫瘤和抗心律失常等癥。但山豆根的不良反應真實存在且不容忽視，臨床報道中以胃腸道反應和神經(jīng)毒性反應引起的損害為主，兩者經(jīng)常伴行。據(jù)不完全統(tǒng)計分析，山豆根所引起的消化系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)的不良反應占其總不良反應的32.21%和31.46%。根據(jù)呂莉莉等[2]通過對山豆根臨床藥理和有效成分的深入研究后發(fā)現(xiàn)，山豆根主要活性成分為生物堿，所占比例為0.93%，包括苦參堿、氧化苦參堿和槐果堿等。Lan Tang等[3]通過UPLC發(fā)現(xiàn)，山豆根的藥效主要是山豆根中其他物質(zhì)轉化為苦參堿和氧化苦參堿而發(fā)揮作用。但苦參堿和氧化苦參堿對中樞神經(jīng)系統(tǒng)有初期呈興奮，繼以麻痹的作用，因此苦參堿和氧化苦參堿既是活性成分也是毒性成分[4]。本文通過灌胃山豆根水煎液五個劑量組觀察小鼠急性毒性發(fā)現(xiàn)：山豆根水煎液的半數(shù)致死量(LD50)為47.918g·kg-1，出現(xiàn)的主要急性毒性癥狀有倦怠、呼吸急促、閉眼、豎毛等。藥物性不良反應一直是藥物安全性評價研究的重點，尤其是近年來中藥的藥物性不良反應更是引起了一番熱議。為了加強臨床的安全合理用藥，除了按照傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論中的配伍理論和藥性理論減毒增效外，對其毒性進行實驗研究，了解山豆根的毒性特點是非常必要的。根據(jù)中藥配伍中的“七情配伍”理論，配伍減毒是有效降低其毒性的最常用方法之一。目前報道的山豆根配伍單味藥減毒增效比例前五的主要為甘草(4.9%)、桔梗(3.4%)、玄參(2.4%)、薄荷(2.2%)、黃芩(2.0%)[5]。根據(jù)中藥藥性理論，甘味藥能補、能和、能緩，即具有補益、和中、調(diào)和藥性的作用。如張仲景用藥，常用甘草與麻黃、附子、烏頭等力峻或有毒之品同用；在諸多配伍甘草以降低藥物毒性或峻烈之性的方劑中最具代表性的為四逆湯和調(diào)胃承氣湯[6]。鄭洪波[7]也有報道，山豆根配伍甘草可減輕毒性，甚至可作為山豆根中毒后急救措施之一。華碧春[8]認為要預防山豆根的不良反應，要嚴格掌握用法用量，煎煮時間不宜過長，或用研末沖服。山豆根可引起肝毒性，本實驗通過解剖死亡小鼠肉眼觀察也證實了這一點。根據(jù)盛云華[9]所研究山豆根水煎液致小鼠急性肝毒性的時-效、量-效關系及病理形態(tài)學變化顯示，給藥1 h即出現(xiàn)肝小葉周圍性胞質(zhì)疏松；2 h出現(xiàn)多個單細胞壞死及空泡變形；6 h后肝細胞核固縮，細胞腫大氣球樣變性；肝指數(shù)顯著升高，肝臟組織損傷在24 h最嚴重；72 h后損傷減輕。本次實驗結果顯示山豆根單次大劑量給藥會加重肝臟負擔，造成肝臟的病理組織損傷，且呈現(xiàn)一定的時量效關系。

本文結果顯示：單次大劑量服用山豆根可引起小鼠肝臟急性損傷，長期服用是否會產(chǎn)生蓄積損傷及損傷是否可逆和減輕肝損傷的機制都還有待于進一步研究，因此臨床上運用山豆根應把握好用藥劑量，并進一步加強山豆根質(zhì)量控制研究，保證臨床的安全有效。

參考文獻

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2011:25-26.

[2]呂莉莉,謝元璋,孫蓉.基于功效和物質(zhì)基礎的山豆根毒性研究進展[J].中國藥物警戒,2011,8(2):105-107.

[3]Tang L, Dong L, Peng X, et al. Pharmacokinetic characterization of oxymatrine and matrine in rats after oral administration of radix Sophorae tonkinensis extract and oxymatrine by sensitive and robust UPLC-MS/MS method[J].Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis,2013,83:179-185.

[4]鄭麗娜,孫虎,謝元璋,等.山豆根化學成分與功效、毒性相互關系的研究進展[J].食品與藥品,2011,13(5):205-209.

[5]李進,王均寧,孟麗萍.基于方劑組成統(tǒng)計分析的山豆根減毒增效配伍規(guī)律探討[J].中華中醫(yī)藥雜志,2014,29(9):2 993-2 996.

[6]潘英偉,陳衛(wèi)平,奚麗君.甘草減毒作用的應用與機理分析[J].南京中醫(yī)藥大學學報,2008,24(6):428-430.

[7]鄭洪波,王呂成,楊旭紅,等.山豆根中毒致共濟失調(diào)和視力下降1例報告及文獻回顧[J].華西醫(yī)學,2007,22(3):590.

[8]華碧春.中醫(yī)臨床安全與合理用藥[M].香港:香港萬里出版機構出版,2009:167-169.

[9]盛云華,李峰杰,周綺,等.山豆根對小鼠急性肝毒性及其病理形態(tài)學研究[J].中國實驗方劑學雜志,2010,16(6):144-146.

歡迎投稿!歡迎訂閱!

Study on Acute Toxicity of Radix et Rhizome Sophorae Tonkinensis

ZHANG Han-ling ，HUA Bi-chun

CollegeofPharmacy,FujianUniversityofTraditionalChineseMedicine,Fuzhou350122,China

Abstract:Objective： To study the acute toxicity of water extract of Radix et Rhizoma Sophorae Tonkinensis (RRST) in mice to provide experimental data for safe use in clinal. Methods :With the method of lavage for medicine, the LD50of water extract of RRST were tested by the classical methods of acute toxicity. Observed the symptoms of the acute toxic including the number of death animals and the weight-changes of live mice. Results:The LD50(95% cconfidence interval) of water extract of RRST was 47.918(45.192～50.665)g·kg-1in mice. The main acute tixical symptoms were eyes closed, lazied, shortness of breath and so on. Conclusion:Mice taking high-dose water decoction of RRST one-time can cause acute toxicity and poisoning mainly for liver damage.

Key words:Radix et Rhizome Sophorae Tonkinensis; Water Extract; Acute Toxicity

收稿日期：(2015-01-09)編輯：王河寶

中圖分類號：R285.5

文獻標識碼：B