御寒暖胃膏穴位貼敷對胃癌前病變大鼠胃黏膜的影響*

★謝宇鋒1*第一作者：謝宇鋒(1983—)，主治醫(yī)師。研究方向：針灸治療疼痛及脾胃相關(guān)病癥。E-mail：714732618@qq.com。馮軍1*通信作者：馮軍(1962—)，主任中醫(yī)師。研究方向：針灸治療疼痛及脾胃相關(guān)病癥。E-mail：szfdzyfj@163.com。楊宗保2王晨光3劉瓊3陳赟1羅建良1王曙輝1楊麗霞1(1.深圳市福田中醫(yī)院針灸推拿科廣東 深圳 518000；2.廈門大學(xué)醫(yī)學(xué)院福建 廈門 361005；3.江西中醫(yī)藥大學(xué)灸學(xué)院2012級碩士研究生南昌 330004)

摘要：目的：研究御寒暖胃膏貼敷胃經(jīng)穴對慢性萎縮性胃炎癌前病變大鼠胃黏膜的影響，探討御寒暖胃膏貼敷胃經(jīng)穴對慢性萎縮性胃炎癌前病變大鼠胃黏膜損傷修復(fù)的作用機(jī)制。方法：大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、御寒暖胃膏貼敷胃經(jīng)穴組、御寒暖胃膏貼敷對照點(diǎn)組、藥物對照組，采用綜合干預(yù)方法復(fù)制慢性萎縮性胃炎癌前病變大鼠模型，肉眼下觀察大鼠胃黏膜損傷指數(shù)，光鏡下觀察胃黏膜組織的病理變化，彩色多普勒觀察胃黏膜的血流量。結(jié)果：與模型組比較，御寒暖胃膏貼敷胃經(jīng)穴組和藥物對照組大鼠胃黏膜損傷指數(shù)值均顯著降低(P<0.05)，胃黏膜組織的病理損傷得到明顯修復(fù)，胃黏膜血流量均顯著升高(P<0.05)；御寒暖胃膏貼敷對照點(diǎn)組大鼠胃黏膜損傷指數(shù)值未見明顯降低(P>0.05)，胃黏膜組織的病理損傷未得到明顯修復(fù)，胃黏膜血流量未見顯著升高(P>0.05)。結(jié)論：御寒暖胃膏貼敷胃經(jīng)穴可以促進(jìn)慢性萎縮性胃炎癌前病變大鼠胃黏膜損傷的修復(fù)，增加胃黏膜的血流量，并且存在經(jīng)脈-臟腑特異相關(guān)性。

關(guān)鍵詞：慢性萎縮性胃炎；癌前病變；胃黏膜損傷；御寒暖胃膏；穴位貼敷

慢性萎縮性胃炎(chronic atrophic gastritis，CAG)是臨床常見的慢性消化系統(tǒng)疾病，以胃黏膜上皮和腺體萎縮、黏膜變薄或伴有腸腺化生、不典型增生為特征。1978年WHO將CAG列為胃癌的癌前病變，是胃癌發(fā)生發(fā)展過程中的必經(jīng)階段[1]。本課題組在前期使用中醫(yī)外治法經(jīng)典著作《理瀹駢文》所記載的“御寒暖胃膏”貼敷胃經(jīng)穴足三里、中脘治療慢性萎縮性胃炎患者，對改善患者的臨床癥狀具有較好的效果，為進(jìn)一步明確御寒暖胃膏貼敷胃經(jīng)穴對慢性萎縮性胃炎的作用，并闡述其可能的作用機(jī)制，為臨床開展御寒暖胃膏貼敷胃經(jīng)穴治療慢性萎縮性胃炎提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，本課題組開展了以下實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)過程及結(jié)果具體介紹如下。

1材料

1.1實(shí)驗(yàn)動物合格SD大鼠50只，雄性，清潔級，8周齡，體重200～250g，購于湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動物有限公司,許可證號：SCXK(湘) 2009-0004。大鼠飼養(yǎng)于墊鋸木屑的飼料籠中，每籠10只，控制室溫22℃，相對濕度50%，采用自然光暗周期，自由飲水，檢疫3周后分組實(shí)驗(yàn)。

1.2試劑與儀器

1.2.1試劑與藥品御寒暖胃膏藥物組成：生姜160份，凡士林48份，乳香3份，沒藥3份，川椒6份。所有中藥均購自深圳市福田區(qū)中醫(yī)院中藥房，并且于深圳市福田區(qū)中醫(yī)院中藥煎藥房制成膏藥；維酶素片(河北環(huán)海藥業(yè)有限公司，批號：20120214)；N-甲基-N`-硝基-N-亞硝基胍(MNNG)(日本東京化成株式會社)。

1.2.2儀器計量天平(TP-200D，200g×0.001g，e=0.01g，湘儀天平儀器設(shè)備有限公司)，電磁爐(蘇泊爾，C21-SDHJ05)，冷凍干燥機(jī)(LGJ-10多歧管壓蓋型，北京松源)，熒光倒置顯微鏡(TE-2000U型，日本尼康公司)，圖像采集系統(tǒng)(Retiga SRV型，奧林巴斯公司)，冷凍臺式高速離心機(jī)(德國 Heraeus(賀力氏)，產(chǎn)品編號：30-TY7107)，低溫冰箱(美國thermo fisher revco，產(chǎn)品編號：808964-1601)，純水儀(德國賽多利司，產(chǎn)品編號：AriumR611VF)。

2方法

2.1實(shí)驗(yàn)分組將50只大鼠按體重排序，然后按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為5組：正常組、模型組、御寒暖胃膏貼敷胃經(jīng)穴組、御寒暖胃膏貼敷對照點(diǎn)組、藥物對照組，每組10只。

2.2藥品制備

2.2.1御寒暖胃膏的制備(1)膏藥的組成：生姜800g，凡士林240g，乳香15g，沒藥15g，川椒30g。

(2)膏藥的制備方法：①研磨藥粉：將乳香、沒藥、川椒分別研碎成粉末，過100目篩，使用天平稱取上述藥品的粉末備用。②制備姜汁：將生姜洗干凈后在室溫下晾干過夜，用榨汁機(jī)將生姜榨成汁，并用濾網(wǎng)濾去汁中的姜渣，然后將濾得的生姜汁倒入燒杯中，用酒精燈加熱至沸騰。③溶化藥物：將備好的凡士林放入燒杯中，用酒精燈加熱至完全融化，然后加入乳香、沒藥，并不斷用玻棒攪拌至乳香、沒藥融化為止，然后加入制備好的姜汁，并不斷攪拌至均勻后熄火。④冷卻撒藥：熄火后繼續(xù)用玻棒向一個方向攪拌，待膏藥溫度降至60攝氏度后，往膏中按比例撒布川椒粉末并繼續(xù)攪拌，待藥粉與膏藥均勻混合后冷卻備用。

2.2.2維酶素灌胃液的制備將維酶素藥片整片放入玻璃研磨皿中研磨成粉，按比例加入純凈水，將藥物配成21.6mg/mL的溶液(人的維酶素給藥劑量是2.4g/d，人與大鼠的換算系數(shù)0.018，則大鼠的劑量為216mg/kg，根據(jù)大鼠體重?fù)Q算灌胃量)，然后按照大鼠的體重，按1mL/100g的用量予以灌胃，1次/日。

2.2.3MNNG溶液的制備MNNG溶液每周先用純凈水配成1g/L濃度的儲存液，避光4℃保存，用時將其配成150μg/mL的飲用液，并置于光屏蔽瓶中讓大鼠自由飲用。

2.2.42%水楊酸鈉溶液的制備使用天秤稱取水楊酸鈉和純凈水，按1∶48的比例配成2%的水楊酸鈉溶液，以備造模使用。

2.2.530%乙醇溶液的制備用天秤稱取無水乙醇和純凈水，按3∶7的比例配成30%的乙醇溶液，以備造模使用。

2.3模型復(fù)制方法按照嚴(yán)茂祥[2]報道的綜合造模方法，將SD大鼠分組后，除正常對照組外，其余4組大鼠采取嚴(yán)茂祥的綜合方法復(fù)制CAG癌前病變動物模型，為期20周。A.在飲水中加入MNNG溶液進(jìn)行造模，讓大鼠自由飲用，正常組自由飲用自來水；B.2%水楊酸鈉溶液灌胃：單日一次，按10mL/kg的劑量給大鼠灌胃，灌胃前后禁食禁水1h；C.30%酒精溶液灌胃，雙日一次，按10mL/kg的劑量給大鼠灌胃，灌胃前后禁食禁水1h；D.對造模動物每日均用專用夾子夾尾一次，使其保持激怒、爭斗狀態(tài)，持續(xù)1h；E.饑飽失常法：2d足量喂食，1d停食，循環(huán)實(shí)施。

2.4干預(yù)方法

2.4.1正常組喂飼標(biāo)準(zhǔn)飼料，不予任何處理。

2.4.2模型組第21周開始，每天捆綁1h，并予膠布貼敷肚皮及雙下肢，每只每天按1mL/100g的用量經(jīng)口灌服純凈水。

2.4.3御寒暖胃膏貼敷胃經(jīng)穴、對照點(diǎn)組A.選穴與取穴：胃經(jīng)穴分別選取足三里與梁門，對照點(diǎn)組選取足三里旁開位于足太陽經(jīng)與足少陽經(jīng)之間的對照點(diǎn)，以及梁門穴旁開位于足厥陰肝經(jīng)之外0.5cm的對照點(diǎn)；B.貼敷方法：第21周開始，每天將各組大鼠捆縛于鼠板,將膏藥涂于所選部位上，直徑為0.3cm，厚度為0.2cm，外用醫(yī)用膠布固定，每日1h。C.每只每天按1mL/100g的用量經(jīng)口灌服純凈水。

2.4.4藥物對照組維酶素溶液，按21.6mg/kg的藥量給藥，1次/d，每天捆綁1h，并予膠布貼敷肚皮及雙下肢。

2.5標(biāo)本采集所有動物實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，稱取大鼠體重，禁食不禁水24h，2%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，取胃，沿胃大彎剪開，生理水沖洗干凈后，先觀察、記錄胃黏膜的損傷指數(shù)，然后放入4%的甲醛固定，給予標(biāo)號，待行胃黏膜上皮形態(tài)學(xué)觀察。

2.6觀測指標(biāo)與方法

2.6.1胃黏膜的損傷指數(shù)采用Guth指數(shù)評定法評定：按Guth法[3]計算黏膜損傷指數(shù)。全胃各病灶的長度按下面標(biāo)準(zhǔn)評分后的和為損傷指數(shù)。損傷<1mm(包括糜爛、出血點(diǎn)) 為1分,1mm<損傷<2mm為2分,依次類推。損傷寬度>2mm者,指數(shù)加倍。

2.6.2胃黏膜的病理形態(tài)學(xué)在上4組動物的胃體部切取5mm×7mm 大小的胃組織,用10% 福爾馬林固定液固定1周后,常規(guī)石蠟包埋切片,HE染色,光鏡下觀察。

2.7統(tǒng)計學(xué)方法所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較若滿足正態(tài)分布且方差齊時采用單因素方差分析，組間不全相同時采用LSD進(jìn)行兩兩比較，方差不齊選擇Tamhane T2法進(jìn)行方差檢驗(yàn)和兩兩比較，若不滿足正態(tài)性時采用秩和檢驗(yàn)，采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。

3結(jié)果

3.1各組胃黏膜損傷指數(shù)的變化情況由表1可知，與正常組相比，模型組的胃黏膜損傷指數(shù)明顯升高，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。與模型組相比，御寒暖胃膏貼敷胃經(jīng)穴組、藥物對照組的胃黏膜損傷指數(shù)降低，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，說明御寒暖胃膏貼敷胃經(jīng)穴和維酶素片均能有效降低慢性萎縮性胃炎癌前病變大鼠胃黏膜的損傷指數(shù)；御寒暖胃膏貼敷對照點(diǎn)組的胃黏膜損傷指數(shù)未見明顯改變，其差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，說明御寒暖胃膏降低慢性萎縮性胃炎癌前病變大鼠胃黏膜損傷指數(shù)的作用與穴位的特異性有關(guān)。且御寒暖胃膏貼敷胃經(jīng)穴組的胃黏膜損傷指數(shù)較藥物對照點(diǎn)組明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，說明御寒暖胃膏貼敷胃經(jīng)穴對降低慢性萎縮性胃炎癌前病變大鼠胃黏膜損傷指數(shù)的作用更加明顯。

±s，n=10)

注：與正常組相比，模型組的胃黏膜損傷指數(shù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(*P<0.05)；與模型組相比，御寒暖胃膏貼敷胃經(jīng)穴組的胃黏膜損傷指數(shù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(★P<0.05)，藥物對照組的胃黏膜損傷指數(shù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(★P<0.05)；與模型組相比，御寒暖胃膏貼敷對照點(diǎn)組的胃黏膜損傷指數(shù)差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(▲P>0.05)。

BPU

注：與正常組比較，#P<0.05；與模型組比較，△P<0.05，☆P>0.05。

3.2各組胃黏膜組織病理學(xué)的變化情況圖1-8光鏡觀察結(jié)果顯示：正常組大鼠各層胃組織結(jié)構(gòu)完整，上皮細(xì)胞及腺體排列整齊，大小形狀均勻一致，細(xì)胞呈單層柱狀排列，胞質(zhì)透明/空泡狀，腺上皮與腺管分界清楚，固有腺及黏膜無擴(kuò)張瘀血，黏膜肌層無增生，未見病理性核分裂象(圖1-2);模型組大鼠黏膜層腺管結(jié)構(gòu)明顯紊亂，腺管形態(tài)及大小不整，有囊狀擴(kuò)張的腺管，細(xì)胞核大小不等，在高倍鏡下細(xì)胞核比例增大、濃染或疏松網(wǎng)狀，核仁明顯；核呈桿狀或類圓形，排列參差不齊，可見核分裂象(圖3-4)；御寒暖胃膏貼敷胃經(jīng)穴組大鼠黏膜生長較模型組有所好轉(zhuǎn)，其黏膜厚度與皺壁有所恢復(fù)，黏膜未見明顯水腫、萎縮、炎癥，腺體排列較整齊，腺體囊狀擴(kuò)張較少，未見明顯萎縮，高倍鏡下細(xì)胞核大小較均勻，排列整齊，未見病理性核分裂象(圖5-6);御寒暖胃膏貼敷對照點(diǎn)組的黏膜層明顯萎縮變薄，固有層及黏膜下層可見較多淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞及單核細(xì)胞浸潤，黏膜肌層增厚，纖維組織明顯增生，黏膜層腺體萎縮明顯，腺管形態(tài)及大小不整，細(xì)胞核大小不等，在高倍鏡下細(xì)胞核比例增大、濃染，核仁明顯，排列參差不齊，可見病理性核分裂象(圖7-8);藥物對照組大鼠黏膜生長良好，其黏膜厚度與皺壁接近正常組，黏膜未見明顯水腫、萎縮、炎癥，腺體排列較整齊，腺體擴(kuò)張數(shù)目較少，未見明顯萎縮，高倍鏡下細(xì)胞排列整齊，未見病理性核分裂象(圖9-10)。

圖1　正常組(×100)　　　　圖2　正常組(×400)

圖3　模型組(×100)　　　　 圖4　模型組(×400)

圖5　胃經(jīng)穴組(×100)　　 圖6　 胃經(jīng)穴組(×400)

圖7　 對照點(diǎn)組(×100)　　 圖8　 對照點(diǎn)組(×400)

圖9　 藥物對照組(×100)　圖10　藥物對照組(×400)

3.3各組胃黏膜血流量的變化情況由表2可知，與正常組相比，模型組的大鼠胃黏膜血流量明顯減少，御寒暖胃膏貼敷胃經(jīng)穴組、藥物對照組大鼠胃黏膜血流量皆明顯增加，其中御寒暖胃膏貼敷胃經(jīng)穴組大鼠胃黏膜血流量增加最為顯著；與模型組比較，御寒暖胃膏貼敷對照點(diǎn)組大鼠胃黏膜血流量未見明顯增加。

4討論

慢性萎縮性胃炎作為胃癌的癌前病變，其病因是非常復(fù)雜的，目前現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究仍認(rèn)為其發(fā)病是一個多因素作用、緩慢發(fā)展的過程[4-6]，因此，其防治也缺乏明確的藥物作用靶點(diǎn)和準(zhǔn)確的時間窗，給本病的防治造成了很大的障礙。但從本病的病理改變來看，胃黏膜的損傷是貫穿其發(fā)病全過程的病理變化，所以本課題組選取了胃黏膜損傷指數(shù)、組織病理學(xué)和胃黏膜血流量作為觀察御寒暖胃膏貼敷胃經(jīng)穴干預(yù)慢性萎縮性胃炎癌前病變大鼠的評價指標(biāo)，具有可行性和現(xiàn)實(shí)意義。

本課題研究發(fā)現(xiàn)，御寒暖胃膏貼敷胃經(jīng)穴不僅能降低慢性萎縮性胃炎癌前病變大鼠胃黏膜的損傷指數(shù)，而且可以逆轉(zhuǎn)其胃黏膜腺體的萎縮、異型增生，減少炎癥滲出，從而阻斷了慢性萎縮性胃炎癌前病變大鼠向胃癌進(jìn)一步發(fā)展。且這個作用可能與御寒暖胃膏貼敷胃經(jīng)穴能夠有效增加慢性萎縮性胃炎癌前病變大鼠胃黏膜的血流量有關(guān)。

中醫(yī)學(xué)并無CAG癌前病變的病名，結(jié)合其臨床表現(xiàn)，應(yīng)屬中醫(yī)學(xué)的“胃脘痛”“痞滿”“噯氣”“嘈雜”等范疇?！鹅`樞·經(jīng)脈》謂：“足陽明之脈，是動則病，食則嘔，胃脘痛?！北静〔∫蛑饕c飲食不節(jié)、情志失司、素體虛弱、用藥不當(dāng)?shù)纫蛩赜嘘P(guān)。其病機(jī)為本虛標(biāo)實(shí)、虛實(shí)夾雜，本虛為脾胃虛弱，邪實(shí)重在氣滯血瘀，病位在胃，涉及脾、腎、肝；血瘀是本病發(fā)生的重要致病因素，因此，本病的中醫(yī)治療應(yīng)在溫中健脾、益氣和胃的基礎(chǔ)上佐以活血化瘀。穴位敷貼療法由來已久，清代中草藥外治專家吳師機(jī)在其所著的《理瀹駢文》中大力推崇和發(fā)展了這一外治法，該書在下篇膏方中記載：“御寒暖胃膏，主治：胃傷，不思飲食，胸腹脹痛，嘔噦惡心，噫氣吞酸，怠惰嗜臥，并治腰背冷痛。用法：糝花椒貼中脘處，藥物：生姜汁熬牛膠化開，以乳香、沒藥、黃丹收?！北痉降陌Y候與CAG的臨床表現(xiàn)十分吻合，其不僅具有溫中和胃之意，更有活血祛瘀之功效，故與CAG的治法相吻合，故選該方作為本項(xiàng)目穴位貼敷的治療用方。

現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，足陽明經(jīng)穴對與胃相關(guān)的中樞及外周神經(jīng)電生理、胃運(yùn)動、胃分泌等均有明顯調(diào)整作用[7-8]，因此，足陽明胃經(jīng)為治療胃相關(guān)疾病的首選經(jīng)脈，而足三里則為足陽明胃經(jīng)的合穴，也是下合穴，素有“合治內(nèi)腑”之說，且《四總穴歌》中記載：“肚腹三里留。”故足三里也是治療胃相關(guān)疾病的首選穴位；而梁門，則為局部取穴用于治療胃脘痛。一上一下，遙相呼應(yīng)，該配穴方法體現(xiàn)了針灸配穴中的上下配穴法，也為治療胃病的黃金配穴。

穴位貼敷，也就是藥物貼敷于穴位，其具有以下優(yōu)點(diǎn)：一方面可被腧穴所在部位皮膚直接吸收，進(jìn)入血絡(luò)經(jīng)脈，輸布全身，以發(fā)揮其藥理作用；另一方面，也可通過藥物對腧穴的刺激，調(diào)節(jié)經(jīng)絡(luò)系統(tǒng)的功能，達(dá)到防治疾病的目的[9]。

綜上所述，御寒暖胃膏貼敷胃經(jīng)穴對慢性萎縮性胃炎癌前病變的干預(yù)作用明確，該方法值得臨床推廣應(yīng)用。但因?yàn)槠渥饔猛緩娇赡茌^為復(fù)雜，所以亟需進(jìn)一步探討其作用機(jī)制，從而為古方新用提供更加科學(xué)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

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(收稿日期：2015-01-12)編輯：萬崇毅

*基金項(xiàng)目：深圳市科技研發(fā)資金項(xiàng)目(JCYJ20130401105615482)。

中圖分類號：R285.5

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A