S100A12在強(qiáng)直性脊柱炎患者血清中的表達(dá)和臨床意義

劉歡1，楊曉平2， 楊曉凌1*

(1.上海市長寧區(qū)光華中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，上海200052；2.第二軍醫(yī)大學(xué)附屬上海長征醫(yī)院 風(fēng)濕免疫科)

強(qiáng)直性脊柱炎是一種以中軸關(guān)節(jié)慢性炎癥反應(yīng)為主要特征的全身性疾病[1]，在我國發(fā)病率約為0.26%，主要癥狀是反復(fù)發(fā)作的頑固性腰痛、腰骶部僵硬感，晚期可發(fā)生脊柱強(qiáng)直、畸形甚至嚴(yán)重的功能障礙，強(qiáng)直性脊柱炎起病比較隱匿，病程較長，具有很高的誤診率[2]，由于其發(fā)病機(jī)制尚不明確，目前臨床上尚缺乏特效性的藥物，因此早期明確診斷對于強(qiáng)直性脊柱炎的治療具有重要的臨床意義，本文通過測定強(qiáng)直性脊柱炎患者血清中S100A12蛋白表達(dá)水平的變化，以期為臨床上強(qiáng)直性脊柱炎的早期診斷及治療提供指導(dǎo)。

1對象與方法

1.1研究對象

選取2010年2月至2013年10月在我院接受治療的強(qiáng)直性脊柱炎患者32例，其中男19例，女13例，年齡22-49歲，平均體重指數(shù)22.1±3.9，病程1-19天。對照組為我院體檢健康者32例，兩組之間一般資料均無顯著差異(P均>0.05)。

本研究均經(jīng)患者知情和同意，該試驗方案均經(jīng)過我院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2疾病活動性和生存質(zhì)量的評估

使用強(qiáng)直性脊柱炎疾病活動指數(shù)(Bath Ankylosing Spondylitis Disease Activity Index ，BASDAI)進(jìn)行疾病活動性的評估，強(qiáng)直性脊柱炎功能指數(shù)(Bath Ankylosing Spondylitis Functional Index,BASFI)法進(jìn)行患者運動功能的評估，使用強(qiáng)直性脊柱炎的生活質(zhì)量問卷調(diào)查法(Ankylosing Spondylitis Quality of Life，ASQoL)進(jìn)行患者生存質(zhì)量的評估，具體方法參考相關(guān)文獻(xiàn)報道[3]。

1.3方法

兩組患者均于清晨空腹抽取肘靜脈血10 ml于肝素抗凝管中，3 000 r/min離心10 min，分離血清于-80℃冰箱中保存待檢。患者血清中S100A12蛋白的檢測采用western blot法測定三組對象血清中的S100A12蛋白的表達(dá)，取蛋白樣品35微克，電泳后轉(zhuǎn)膜，5%的脫脂奶粉封閉1 h，GAPDH和S100A12抗體用5%牛奶稀釋(1∶200)，4℃過夜，TBST洗膜，5%的牛奶稀釋的辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗羊二抗，洗膜后，按照ECL說明書，1∶1配置發(fā)光工作液，凝膠成像儀成像，Image J軟件進(jìn)行灰度分析。血清中ESR和CRP表達(dá)量檢測采用免疫比濁法測定C反應(yīng)蛋白(CRP)與魏氏法測定血沉(ESR)。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

2結(jié)果

2.1血清中S100A12的蛋白水平變化

與正常對照組相比(圖1和表1)，強(qiáng)直性脊柱炎患者血清中S100A12蛋白表達(dá)水平明顯升高，兩組相比有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。

圖1　western blot檢測S100A12的蛋白表達(dá)水平

正常(32例)強(qiáng)直性脊柱炎患者(32例)P值S100A12(S100A12/GAPDH)0.55±0.290.82±0.41*0.003ESR(mm/h)10.91±6.0222.52±12.35*<0.001CRP(mg/dl)0.45±0.212.12±0.32*<0.001

*與正常組相比P<0.05;

2.3血清中S100A12、ESR和CRP的表達(dá)及與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系

與正常對照組相比(表2)，強(qiáng)直性脊柱炎患者血清中的CRP和ESR水平明顯增加(P<0.05);S100A12的表達(dá)水平與CRP和ESR的水平無明顯相關(guān)性(P>0.05)，與BASDAI、BASFI和ASQoL無顯著相關(guān)性(P>0.05)。

表3　臨床實驗室檢查和病理參數(shù)之間的相關(guān)性分析

*P<0.05

3討論

S100A12是一種具有手型EF結(jié)構(gòu)的鈣結(jié)合蛋白，主要由中性粒細(xì)胞合成和分泌，最早是在牛肺組織液中被發(fā)現(xiàn)，S100A12由92個氨基酸組成，其相對分子量大小為10.575 KD，以二聚體及六聚體形式存在[4]。研究表明S100A12是晚期糖基化終末產(chǎn)物受體RAGE最穩(wěn)定的典型配體，S100A12與RAGE結(jié)合后激活MAPK和NF-κB信號通路，導(dǎo)致大量炎性因子TNF-α，IL-1β和IL-6的產(chǎn)生[5]，強(qiáng)直性脊柱炎患者的骶髂關(guān)節(jié)及周圍關(guān)節(jié)滑膜在局部產(chǎn)生的大量細(xì)胞因子，通過直接或間接途徑促進(jìn)破骨細(xì)胞的分化和成熟，增強(qiáng)破骨細(xì)胞的功能，參與了骨質(zhì)破壞，它們都是延緩或阻斷強(qiáng)直性脊柱炎骨質(zhì)侵蝕作用的治療靶點[6]，此外，研究發(fā)現(xiàn)，TNF-α、IL-1β和IL-6在強(qiáng)直性脊柱炎患者血清中的表達(dá)水平明顯增加，目前臨床上針對TNF-α等炎性因子的靶樣抑制已成為治療強(qiáng)直性脊柱炎新興的治療手段[7]，提示阻斷炎癥因子的產(chǎn)生對于強(qiáng)直性脊柱炎的治療具有重要意義。

最近研究表明S100A12不僅在川崎病[9]、在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎[10]等自身性免疫疾病中表達(dá)增加，還在糖尿病血管并發(fā)癥、炎癥性腸病以及哮喘等一系列免疫相關(guān)性疾病患者病變部位也存在異常表達(dá)。研究還發(fā)現(xiàn)S100A12的異常表達(dá)不僅局限于病變部位，在腫瘤性疾病、神經(jīng)變性性疾病和代謝障礙等疾病患者的血清中的也存在異常表達(dá)，這為通過血清學(xué)檢查來判斷患者的病情變化提供了重大便利。綜合以上文獻(xiàn)報道，我們在本研究中通過檢測強(qiáng)直性脊柱炎患者血清中S100A12的表達(dá)，并與患者疾病活動程度和生活質(zhì)量做一個相關(guān)性的分析，本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正常對照組相比，強(qiáng)直性脊柱炎患者的ESR和CRP水平顯著增加，S100A12在強(qiáng)直性脊柱炎患者的血清中表達(dá)也明顯升高，但是其表達(dá)量與患者疾病的活動程度和生活質(zhì)量無相關(guān)性，由于本組研究中病例量較少，因此結(jié)果可能與實際情況存在一定誤差，尚不足以證實其與臨床病理特征的真實關(guān)系，今后需要進(jìn)一步行大樣本、多中心的研究來進(jìn)一步探討S100A12異常表達(dá)的臨床意義。

綜上所述，S100A12在強(qiáng)直性脊柱炎患者的血清中存在異常表達(dá)，可能在強(qiáng)直性脊柱炎疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要的作用，未來需要進(jìn)一步行體內(nèi)和體外實驗研究S100A12作為強(qiáng)直性脊柱炎治療靶點的可能性。

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收稿日期：(2014-03-22)

作者簡介：劉歡(1978-)，女，江蘇人，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：風(fēng)濕病學(xué)；楊曉凌(1969-)，女，上海人，本科，副主任醫(yī)師， 研究方向：風(fēng)濕病學(xué)。

文章編號：1007-4287(2015)03-0466-02

通訊作者*