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ALK在非小細胞肺癌中的表達

郝彥勇1，李旭丹2，郭黎黎1，許仙花1*， 鄒玉鳳1

(1.吉林省腫瘤醫(yī)院，吉林 長春130012；2.長春市婦產(chǎn)醫(yī)院)

間變性淋巴瘤激酶(ALK)于1994年首先發(fā)現(xiàn)于間變性大細胞淋巴瘤中；EML4-ALK融合基因于2007年首次發(fā)現(xiàn)，是新興的生物標記物和治療靶標[1]。我們檢測了106例經(jīng)手術(shù)切除的非小細胞肺癌組織標本，觀察并分析ALK融合基因的表達情況以及陽性病例的臨床病理特征。

1材料與方法

1.1材料隨機抽取吉林省腫瘤醫(yī)院2010年至2013年間經(jīng)手術(shù)切除的非小細胞肺癌106例，年齡41-77歲，平均年齡58.8歲。腫瘤組織常規(guī)取材，經(jīng)10%中性福爾馬林液充分固定，石蠟包埋后，4 μm切片，用于免疫組化及FISH染色。

1.2試劑抗ALK(D5F3)兔單克隆抗體試劑，兔單克隆陰性對照Ig(Rabbit Monoclonal Negative Control Ig),OptiView DAB IHC檢測試劑盒，OptiView 擴增試劑盒，均購自羅氏診斷產(chǎn)品(上海)有限公司。Vysis ALK雙色分離探針試劑盒。

1.3　實驗方法

1.3.1HE常規(guī)切片染色，觀察。

1.3.2免疫組化的方法檢測ALK蛋白的表達。使用BenchMark XT自動切片染色儀，每輪實驗設(shè)陽性對照一張，每例標本設(shè)陰性對照一張。

1.3.3對于陽性病例，用FISH的方法復(fù)檢，按照ALK探針試劑盒說明操作，熒光顯微鏡下觀察。

1.3.4結(jié)果判讀 ①組織學診斷標準：參照2004版世界衛(wèi)生組織編寫的《肺、胸膜、胸腺及心臟腫瘤病理學和遺傳學》診斷標準以及國際肺癌研究學會/美國胸科學會/歐洲呼吸學會(IASLC/ATS/ERS)于2011年2月公布的肺腺癌國際多學科分類標準[2]。②免疫組化判讀標準：參照《VENTANA anti-ALK(D5F3)評分解讀指南》，任意比例的腫瘤細胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)強的顆粒狀著色既判斷為陽性，否則為陰性。③FISH判讀標準：>15%的腫瘤細胞內(nèi)出現(xiàn)分離信號(同一腫瘤細胞核內(nèi)出現(xiàn)紅、綠信號分離，分離距離大于兩個信號直徑；或出現(xiàn)單獨的紅色信號)為陽性[3,4]。

2結(jié)果

106例患者中，年齡41-77歲，平均58.8歲；男性58例，女性48例；有吸煙史者61例，無吸煙史者45例；腫瘤平均最大徑3.4 cm；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者66例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者40例；腺癌73例，鱗狀細胞癌33例，詳細臨床病理特征見(表1)。其中，ALK陽性表達5例(圖1、2)，陽性率4.71%，其臨床病理特征見(表2)。所有陽性病例均經(jīng)FISH檢測，符合率100%。

表1　106例非小細胞肺癌的臨床病理特征

表2　5例ALK陽性非小細胞肺癌臨床病理特征

圖1　ALK陽性表達

3討論

肺癌是死亡率最高的惡性腫瘤之一，常規(guī)的手術(shù)、放療、化療等治療方法效果仍然有限[5]。近年來，靶向治療已經(jīng)成為肺癌治療領(lǐng)域的新的熱點。有研究表明，ALK酪氨酸激酶抑制劑在治療非小細胞肺癌方面，已取得了重大進展[6]。因此，準確地檢測ALK并研究總結(jié)其臨床病理特征，具有重要意義[7]。

為盡量避免腫瘤異質(zhì)性等原因造成的誤差，本組實驗全部采用手術(shù)后標本。通過分析，可以發(fā)現(xiàn)ALK陽性患者：①平均年齡低于全組平均年齡；②女性、不吸煙者占優(yōu)勢；③組織學類型以腺癌為主，其中，以腺泡狀為主的腺癌略占優(yōu)勢；④腫瘤最大徑明顯大于全組平均值；⑤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率明顯高于全組平均值；⑥腫瘤發(fā)病部位無明顯特征；⑦VENTANA免疫組化法檢測與FISH方法檢測，有較高的符合率。

文獻報道，ALK陽性患者以女性，年輕，不吸煙，腺癌為主要特征；這與本組實驗結(jié)果一致，但在年齡的確切區(qū)分上，尚需進一步研究[6]。有些報道認為在腺癌類型中，以粘液腺癌占優(yōu)勢，有些報道認為實性型為主的腺癌占優(yōu)勢，本組實驗顯示以腺泡狀為主的腺癌略占優(yōu)勢，但其與粘液產(chǎn)物的關(guān)系，尚需進一步研究。另外，本實驗還發(fā)現(xiàn)，腫瘤最大徑以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否，有可能是ALK陽性患者的潛在特征，需要擴大樣本量進一步證實。

綜上所述，ALK陽性患者以女性，年輕，不吸煙，腺癌為特征，VENTANA免疫組化法是可靠的篩查手段，同時，為了避免過度治療，提高療效，節(jié)約醫(yī)療成本，對陽性病例行FISH檢測驗證也是十分必要的。

參考文獻：

[1]Soda M,Choi YL,Enomoto M,et al.Identification of the transforming EML4-ALK fusion gene in non-small-cell lung cancer[J].Nature,2007,448:561.

[2]Travis WD,Brambilla E,Noguchi M,et al.International association for the study of lung cancer/american thoracic society/european respiratory society international multidisciplinary classification of lung adenocarcinoma[J].J Thorac Oncol,2011,6:244.

[3]Paik JH,Choe G,Kim H，et al.Screening of Anaplastic Lymphoma Kinase Rearrangement by Immunohistochemistry in Non-small Cell Lung Cancer:Correlation with Fluorescence In Situ Hybridization[J].J Thorac Oncol,2011,6(3):466.

[4]Shaw AT,Yeap BY,Mino-Kenudson M，et al.Clinical features and outcome of patients with non-small-cell lung cancer who harbor EML4-ALK[J].J Clin Oncol ,2009,27:4247.

[5]Jemal A,Siegel R,Ward E，et al.Cancer statistics,2008[J].CA Cancer J Clin ,2008,58:71.

[6]Salido M,Pijuan L,Martinez-Aviles L et al.Increased ALK gene copy number and amplification are frequent in non-small cell lung cancer[J].J Thorac Oncol,2011,6:21.

[7]Takahashi T,Sonobe M,Kobayashi M，et al.Clinicopathologic features of non-small-cell lung cancer with EML4-ALK fusion gene[J].Ann Surg Oncol,2010,17:889.

(收稿日期：2014-06-07)

文章編號：1007-4287(2015)05-0833-03

*通訊作者