奶牛妊娠的實(shí)驗(yàn)室診斷方法

那仁巴特

(新疆博樂市小營盤畜牧獸醫(yī)工作站833400)

孕期的動(dòng)物因胎盤和胎兒的影響，母體的新陳代謝會(huì)出現(xiàn)改變，其體內(nèi)的血、尿、乳成分產(chǎn)生了較大的改變，因此可以通過對(duì)這些成分的變化檢測來確定其是否妊娠，可以作為診斷的依據(jù)。早期妊娠診斷中，進(jìn)行了很多的探索，可是卻沒有找到比較完美的實(shí)驗(yàn)室診斷方法，比較可靠優(yōu)秀的妊娠診斷需要包含下列的要求：①在配種后一個(gè)發(fā)情周期之內(nèi)顯示出診斷結(jié)果。②妊娠診斷的診斷準(zhǔn)確率應(yīng)在85%以上。③對(duì)母體和胎兒安全無害。④方法簡便、經(jīng)濟(jì)實(shí)用。實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行動(dòng)物妊娠診斷的方式有很多，本文主要是對(duì)其中使用較多，效果較好的一些方法進(jìn)行了闡述，并對(duì)其應(yīng)用前景進(jìn)行介紹。

1　牛乳孕酮診斷法

因?yàn)槿焉铮瑒?dòng)物的血液、乳中會(huì)有較高的孕酮濃度，在配種后18～24天時(shí)牛妊娠的早期，其體內(nèi)會(huì)有內(nèi)分泌改變，對(duì)妊娠早期奶牛的孕酮進(jìn)行測量，可以確定是否發(fā)生了妊娠，根據(jù)臨床研究顯示，奶牛早期妊娠的最佳診斷時(shí)間就是在配種后23天對(duì)其孕酮情況進(jìn)行分析。

孕酮-ELISA(P-ELISA)診斷法：P-ELISA診斷法利用抗原(孕酮)、酶標(biāo)抗原 (酶標(biāo)記孕酮)與抗體(孕酮抗體)的飽和競爭性結(jié)合反應(yīng)原理，來監(jiān)測乳樣中孕酮濃度的高低，依據(jù)反應(yīng)系統(tǒng)中所產(chǎn)生的顏色(藍(lán)、黃和粉紅)深淺程度，用肉眼定性孕酮在乳樣中的濃度范圍，從而達(dá)到妊娠診斷的目的。荷蘭等國已生產(chǎn)出相應(yīng)的商品性P-ELISA診斷試劑盒，但我國尚無此類型的商品試劑盒上市，此方法早期妊娠診斷的準(zhǔn)確率為84．5%，成本較高。

孕酮乳膠凝集抑制試驗(yàn)：①診斷原理：孕酮乳膠凝集抑制試驗(yàn)(PLAIT)是一種利用孕酮單克隆抗體和由孕酮包被的膠珠進(jìn)行乳汁孕酮快速定性測定的免疫學(xué)方法。其診斷原理是將孕酮包被在特化的乳膠珠上，使奶樣中的游離孕酮和膠珠上的孕酮競爭與單克隆抗體上的有限位點(diǎn)相結(jié)合，以此來定性顯示乳樣中孕酮水平高低。②診斷方法：混合乳樣、孕酮克隆抗體、孕酮包被乳膠珠，混合物可以在玻片上發(fā)生作用，與溶液產(chǎn)生乳汁薄膜。乳樣的孕酮含量比較高時(shí)，游離孕酮和孕酮抗體之間會(huì)發(fā)生反應(yīng)，在玻板小室形成乳膜，如果孕酮含量低，那么就會(huì)有顆粒乳膜產(chǎn)生，這是因?yàn)槿槟z凝集的原因。該診斷方式在各檢驗(yàn)室都能夠完成，因?yàn)槠錄]有復(fù)雜昂貴設(shè)備的要求，使用方便，成本比較低，其使用也比較廣泛，是比較常用的一種檢測方式。

2　早孕因子檢測法

妊娠期的母體中會(huì)有早孕因子(EPF)，該因子屬于免疫抑制因子，可以讓胎兒避免免疫排斥，能夠存活于母體內(nèi)，因此該因子也是作為早孕檢測的一種重要指標(biāo)。早孕因子一般是在交配后6～48小時(shí)出現(xiàn)，可以通過玫瑰花環(huán)抑制試驗(yàn)來進(jìn)行檢測，該方法能夠?yàn)樵缙谌焉镌\斷以及受精檢查提供依據(jù)?，F(xiàn)在有很多的動(dòng)物都可以檢測到早孕因子，像是人、豬、羊等，而且早孕因子不僅僅是作為妊娠檢查指標(biāo)，在不孕癥診斷、胚胎移植中有著一定的作用。

哺乳動(dòng)物的遺傳信息一半來自父親，一半來自母親，來自父親那一半屬于母體外來物，可是母體在妊娠期卻并沒有對(duì)胎兒產(chǎn)生排斥的情況。有一些關(guān)于該類情況的研究表明，母體可以對(duì)這些為本體外來物進(jìn)行忍受是因?yàn)樵谀阁w妊娠后，自身的免疫力合防御機(jī)能會(huì)減弱，此外，早孕因子會(huì)在受精后的幾個(gè)小時(shí)內(nèi)產(chǎn)生對(duì)母體細(xì)胞免疫的抑制物，這樣就避免了胚胎受到母體防御機(jī)制的攻擊，因此胚胎在母體內(nèi)的存貨和發(fā)育都需要依靠早孕因子。

現(xiàn)在，早孕因子的檢測還只能采取玫瑰花環(huán)抑制試驗(yàn)來進(jìn)行檢測，該方法具有比較高的靈敏度，其對(duì)設(shè)備的要求也并不高，可是因?yàn)樾枰^多的時(shí)間，以及存在一定的變異性，還有就是特異性不佳，這些因素導(dǎo)致了其無法在生產(chǎn)中大范圍的使用。能夠?qū)ふ业娇旖?、特異性?qiáng)的早孕因子檢測方法。

3　膠體金法

該種方法是目前對(duì)牛妊娠快速診斷的一種方法，快速、低廉、準(zhǔn)確，因此在生產(chǎn)中使用也是比較多的，該種診斷使用的試紙和人妊娠使用的檢測試紙比較相似。

我國對(duì)于該種試紙還在研發(fā)過程，國外有相關(guān)的產(chǎn)品出現(xiàn)，可是由于奶牛每年都在懷孕和泌乳，因此其體內(nèi)的絨毛膜促性腺激素(HCG)會(huì)長期存。

國外的相關(guān)檢測試紙，也無法單純使用肉眼來進(jìn)行判斷，還需要有儀器設(shè)備的幫助，將儀器和擠奶機(jī)連接，進(jìn)行擠奶的時(shí)候，同時(shí)進(jìn)行診斷。