游國葉，熊大維，李會(huì)娜

(1.信陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院，信陽 464000; 2.杭州民生藥業(yè)有限公司，杭州 311100)

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HPLC法測(cè)定泡囊中蛇床子素的含量

游國葉1，熊大維1，李會(huì)娜2

(1.信陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院，信陽 464000; 2.杭州民生藥業(yè)有限公司，杭州 311100)

目的：建立HPLC法測(cè)定非離子型表面活性劑泡囊中蛇床子素的含量。方法：采用Luna C18(250 mm×4.6 mm, 5 μm)色譜柱，以甲醇-水(85∶15)為流動(dòng)相，流速1.0 ml/min， 320 nm處檢測(cè)。結(jié)果：蛇床子素在濃度0.4～50 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為A=93 807C+18 201(r=0.999 9)，平均回收率為98.09%，RSD為0.03%。結(jié)論：本法快速、準(zhǔn)確，結(jié)果可靠，重現(xiàn)性好，適于蛇床子素制劑的質(zhì)量控制。

蛇床子素，非離子表面活性劑泡囊，含量測(cè)定，HPLC

蛇床子素(osthole或osthol)是從傘形科植物蛇床的干燥成熟果實(shí)蛇床子中提取的一種強(qiáng)脂溶性化合物，又稱作甲氧基歐芹酚，其易溶于堿溶液及某些有機(jī)溶劑如甲醇、乙醇、氯仿等，不溶于水，口服生物利用度差，臨床具有抗菌、抗病毒、抗變態(tài)及補(bǔ)腎壯陽性激素樣作用，還可用于抗心律失常、哮喘的治療，對(duì)多種實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤有明顯的抑制活性[1，2]。泡囊組成和結(jié)構(gòu)類似于脂質(zhì)體，主要由非離子型表面活性劑組成，藥物不易泄漏，比脂質(zhì)體穩(wěn)定，具有多種優(yōu)勢(shì)，其載體材料不含磷脂，避免了磷脂的氧化降解[3]。近年來非離子表面活性劑泡囊包封技術(shù)已經(jīng)成為化學(xué)、藥學(xué)和生命科學(xué)研究領(lǐng)域中的熱點(diǎn)課題之一。本試驗(yàn)采用HPLC法測(cè)定蛇床子素非離子表面活性劑泡囊中蛇床子素的含量，結(jié)果可靠，適于該制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器和試藥

BP211D型半微量電子天平、Waters2695高效液相色譜儀，Waters2996紫外檢測(cè)器 (美國Waters公司)；100 μl進(jìn)樣針(江蘇漢邦科技有限公司)。 蛇床子素原料藥(上海純優(yōu)生物科技有限公司，批號(hào)P0086)，蛇床子素對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)110822-201308)，甲醇為分析純。

2 試驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Luna C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-水(85∶15)；流速：1.0 ml/min；檢測(cè)波長：320 nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：20 μl[4]。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液制備 取蛇床子素對(duì)照品適量，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，準(zhǔn)確配制濃度為200 μg/ml的蛇床子素對(duì)照品貯備液，備用。精密量取對(duì)照品貯備液0.5 ml置于10 ml量瓶中，流動(dòng)相定容至刻度，搖勻，即得10 μg/ml的蛇床子素對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液制備 按既定處方工藝制備本品，取本品(含蛇床子素泡囊混懸液)1 ml于100 ml的量瓶中，流動(dòng)相定容，即得10 μg/ml的供試品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液 另按處方量取不含藥的泡囊混懸液1 ml于100 ml的量瓶中，流動(dòng)相定容，得相當(dāng)于含10 μg/ml的陰性對(duì)照液蛇床子素空白泡囊。

2.3 干擾試驗(yàn) 分別取對(duì)照品、供試品和陰性樣品溶液20 μl按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，色譜圖見圖1。試驗(yàn)可見在該色譜條件下，蛇床子素能達(dá)到基線分離且峰形穩(wěn)定，保留時(shí)間約為8.5 min，非離子表面活性劑泡囊輔料及破乳劑不干擾蛇床子素的測(cè)定。

1.蛇床子素

2.4 蛇床子素標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取蛇床子素對(duì)照品適量，以流動(dòng)相定容至刻度，準(zhǔn)確配制200 μg/ml的貯備液。分別精密吸取貯備液0.02、0.05、0.1、0.5、1、1.5和2.5 ml置10 ml量瓶中，以甲醇定容至刻度，搖勻，得濃度分別為0.4、1、2、10、20、30和50 μg/ml的系列溶液，進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積A對(duì)濃度C作線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：A=93 807C+18 201(r=0.999 9)，即蛇床子素在濃度0.4～50 μg/ml范圍內(nèi)，峰面積與測(cè)定濃度呈良好的線性關(guān)系。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取本品(批號(hào)為20130304)的樣品共6份，按照“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液的方法制備，依照“2.1”項(xiàng)下色譜條件分析，測(cè)定每份樣品溶液中蛇床子素含量。結(jié)果顯示樣品中蛇床子素濃度含量平均為9.86 μg/ml，RSD為1.7 %。表明供試品溶液重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取重復(fù)性試驗(yàn)中的1份樣品，分別在0、4、8、12、16、20和24 h按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分析，測(cè)得供試品溶液中蛇床子素濃度，RSD為0.99%。結(jié)果表明，供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 精密度試驗(yàn) 精密量取蛇床子素儲(chǔ)備液適量配制濃度分別為2、20和50 μg/ml的RES溶液3份，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，每份樣品每隔4 h測(cè)定1次，共測(cè)5次；每份樣品每日測(cè)1次，連續(xù)測(cè)定5 d。分別計(jì)算RES的日內(nèi)及日間精密度。精密度試驗(yàn)結(jié)果可知，精密度良好。見表1。

表1 蛇床子素精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.8 回收率測(cè)定 精密量取100 mg含量為99.9%的蛇床子素9份, 分別置于量瓶中，分別加入50、100和200 μg/ml對(duì)照品溶液10 ml，各3份，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定,計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為98．09%，RSD為0.03%，表明用HPLC測(cè)定蛇床子素的含量準(zhǔn)確度良好，見表2。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 蛇床子素非離子表面活性劑泡囊含量測(cè)定 按照制備方法平行制備3批含藥制劑(批號(hào)20130304、20130305、20130306)，分別精密吸取蛇床子素非離子表面活性劑泡囊1 ml置50 ml量瓶中，以流動(dòng)相定容至刻度，搖勻，過濾，進(jìn)樣分析，記錄色譜圖并將峰面積帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線中計(jì)算主藥含量，結(jié)果見表3。

表3 蛇床子素泡囊含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 討論

3.1 流動(dòng)相的選擇 通過文獻(xiàn)查閱和反復(fù)預(yù)試驗(yàn)，在紫外掃描的基礎(chǔ)上確定了主藥的測(cè)定波長。對(duì)不同比例的甲醇- 水、乙腈- 水進(jìn)行預(yù)試驗(yàn), 結(jié)合所得色譜圖及實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有條件，最終根據(jù)既保證藥峰與雜質(zhì)峰分離度及理論塔板數(shù)符合《中國藥典》規(guī)定又保證經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的原則，選擇了甲醇-水(85∶15)為流動(dòng)相，室溫條件下測(cè)定非離子表面活性劑泡囊中蛇床子素的體外含量分析方法，以HPLC測(cè)定蛇床子素的含量，試驗(yàn)條件下線性關(guān)系良好，精密度、回收率均符合《中國藥典》規(guī)定，重現(xiàn)性好，方法學(xué)考查表明此法可用來進(jìn)行含蛇床子素制劑的含量測(cè)定。

3.2 波長的選擇 在文獻(xiàn)查閱基礎(chǔ)上，取處方量蛇床子素標(biāo)準(zhǔn)品和不含藥的空白輔料混合物，分別置于25 ml量瓶中，流動(dòng)相溶解定容，備用。以流動(dòng)相為空白，分別取上兩溶液進(jìn)行紫外掃描，由試驗(yàn)可知在320 nm處標(biāo)準(zhǔn)品有最大吸收峰，不含藥的空白輔料混合液無吸收，故選擇320 nm為最佳波長。

1 張澤君，張欣.蛇床子素化學(xué)成分及藥理學(xué)研究進(jìn)展[J].黑龍江醫(yī)藥，2011,24(2):275-276

2 劉慧英,杜曉丹.骨筋丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高[J].黑龍江醫(yī)藥，2013,26(2):310-312

3 張林華，何穎娜，馬桂磊，等.葉酸靶向紫杉醇聚合物納米泡囊的制備及其抗腫瘤活性的研究[J].中國藥學(xué)雜志，2010,45(22):1742-1748

4 陸春寧，梁藝堅(jiān)，曹耘，等. HPLC測(cè)定花蛇解癢膠囊中蛇床子素的含量[J]. 中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013,19(12):98-100

Determination of Osthole in Nonionic Surfactant Vesicles by HPLC

You Guoye1, Xiong Dawei1, Li Huina2

(1. School of Pharmacy in Xinyang Vocational and Technical College Xinyang,Xinyang 464000； 2. Hangzhou Minsheng Pharmaceutical Co Ltd, Hangzhou 311100)

Objective： To establish an HPLC method for the determination of osthole in nonionic surfactant vesicles. Methods： A Luna C18(250 mm×4.6 mm，5 μm) column was used as stationary phase,and methanol-water (85∶15) as mobile phase with a flow rate of 1.0 ml/min. The wavelength was set at 320 nm. Results: The linear range of osthole was 0.4～50 μg/ml, the regression equation was expressed byA=93 807C+18 201 (r=0.999 9), the average recovery was 98.09%,and RSD 0.03%. Conclusion： this method is rapid, accurate, reliable, reproducible, suitable for the quality control of osthole preparation.

osthole，nonionic surfactant vesicles，determination，HPLC

2014-02-17

R927.2

A

1006-5687(2015)01-0019-03