許 瑾,杭珊珊,馬明星，沈 楹，陳 姜，錢沁瑜，黃 嬛*

(1.嘉興學(xué)院醫(yī)學(xué)院,浙江嘉興 314001;2.華東理工大學(xué)，上海 200237)

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蘆筍保健茶活性成分動(dòng)態(tài)溶出分析研究

許 瑾1,杭珊珊1,馬明星2，沈 楹1，陳 姜1，錢沁瑜1，黃 嬛1*

(1.嘉興學(xué)院醫(yī)學(xué)院,浙江嘉興 314001;2.華東理工大學(xué)，上海 200237)

摘要[目的]提取蘆筍中總黃酮并分析蘆筍保健茶活性成分的動(dòng)態(tài)溶出情況，促進(jìn)蘆筍茶的推廣與發(fā)展。[方法]以新鮮蘆筍為原料，采用超聲乙醇提取法提取蘆筍總黃酮并測(cè)定它們?cè)谔J筍不同部位的含量。制作蘆筍袋泡茶，從分子水平對(duì)蘆筍袋泡茶活性成分的溶出進(jìn)行動(dòng)態(tài)分析。通過(guò)設(shè)定不同浸泡時(shí)間、不同溫度條件以及不同蘆筍袋泡茶投料量，測(cè)定浸出物中黃酮類成分的含量，并通過(guò)正交試驗(yàn)來(lái)確定蘆筍茶的最佳沖泡條件。[結(jié)果]在蘆筍的不同部位總黃酮含量有差異，從蘆筍頂端到根部逐漸遞減；蘆筍袋泡茶的最佳沖泡條件為蘆筍袋泡茶投料量4.0 g，浸泡水溫90 ℃，浸泡時(shí)間25 min。[結(jié)論]研究表明，今后可根據(jù)所需要的成分對(duì)蘆筍進(jìn)行合理的利用；同時(shí)可為蘆筍茶的科學(xué)沖泡及蘆筍類飲品的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞蘆筍；蘆筍袋泡茶；總黃酮；沖泡工藝

蘆筍(AsparagusofficinalisL.)為百合科天門冬屬的多年生草本植物，學(xué)名石刁柏，又名文山竹、龍須菜、細(xì)百葉部、索羅羅[1]。研究發(fā)現(xiàn)，蘆筍含有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗衰老、抗疲勞、降血脂、保肝解毒等特殊生物學(xué)功能的活性成分[2]。

蘆筍的活性成分主要有3類：第1類為皂苷，第2類為多糖類，第3類為黃酮類化合物；此外，蘆筍還含有氨基酸、脂肪酸、活性酶和微量元素等多種活性成分[3]。研究表明，蘆筍中含有大量的黃酮類化合物，具有很高的營(yíng)養(yǎng)保健價(jià)值[4]，且具有明顯的抗腫瘤活性和降血壓、降血脂、增進(jìn)冠狀動(dòng)脈血流量、軟化血管和防治冠心病、心絞痛等作用。蘆筍中總黃酮含量是決定其藥用價(jià)值高低的重要指標(biāo)[5]。蘆筍中的黃酮類成分主要有：蘆丁[6]、槲皮素、香櫞素、山柰素等[7]。

蘆筍茶是一種全新概念的蔬菜茶,利用新鮮蘆筍嫩葉、芽頭為原料, 經(jīng)清洗、整理、分切、殺青、烘制等工藝加工制作而成的蘆筍茶, 具有抗癌、防癌、降血壓、降血脂、增強(qiáng)體質(zhì)等功效,并能提高人體免疫力。蘆筍茶經(jīng)脫苦、提香、保綠, 用開水沖泡后, 具有蘆筍特有的清香味, 其色、香、味俱全。

筆者以蘆筍為研究對(duì)象，采用超聲乙醇提取法提取蘆筍總黃酮，并制作蘆筍保健茶，從分子水平對(duì)蘆筍保健茶活性成分的溶出動(dòng)態(tài)進(jìn)行分析，以期為蘆筍茶的科學(xué)沖泡及蘆筍的開發(fā)與利用提供理論依據(jù)，并對(duì)養(yǎng)生保健有一定的實(shí)用指導(dǎo)意義，進(jìn)一步促進(jìn)我國(guó)擴(kuò)大天然藥物的資源及創(chuàng)新藥物的研究。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 原料及試劑。新鮮蘆筍，30%乙醇溶液，4%氫氧化鈉溶液，5%亞硝酸鈉溶液，10%硝酸鋁溶液，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)食品藥品鑒定研究院)等。

1.1.2 主要儀器。UV-2401PC紫外分光光度儀，日本島津；LH-08A臺(tái)式連續(xù)投料式中藥粉碎機(jī)；H.H.S 24-4B電熱恒溫水浴鍋，上海醫(yī)療器械五廠。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)材料的前處理。將新鮮蘆筍洗凈，用刀分段，分別切成食用部分蘆頭段、食用部分中段、食用部分下段、下腳料綠色部分、下腳料白色部分。將分段后的蘆筍置烘箱中干燥處理。將干燥后的不同部位蘆筍用粉碎機(jī)粉碎處理，過(guò)13目篩,裝入廣口瓶備用。

1.2.2 總黃酮的提取及含量測(cè)定。

1.2.2.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。精密稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品10 mg，用30%乙醇定容至50 ml(得到0.2 mg/ml標(biāo)準(zhǔn)試液)，分別吸取0、1、2、3、4、5、6于25 ml容量瓶中，每組加入5%亞硝酸鈉0.75 ml，靜置6 min后，加入10%硝酸鋁0.75 ml，靜置6 min后，加入4%氫氧化鈉10 ml，用30%乙醇定容至25 ml，搖勻后放置15 min。以空白試劑(30%乙醇)作為對(duì)照，用紫外分光光度計(jì)(UV-2401PC)在波長(zhǎng)510 nm處測(cè)吸光度。以質(zhì)量濃度(mg/ml)為橫坐標(biāo)，吸光度(A) 為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.2.2 蘆筍總黃酮的提取方法驗(yàn)證選擇。在預(yù)試驗(yàn)中分別采用了超聲輔助熱水提法和超聲輔助醇提法提取蘆筍總黃酮。

超聲輔助熱水提法：取5 g蘆筍粉末(分別為下腳料的綠色段和下腳料的白色段各3份)加入25 ml水(料液比1∶5 g/ml)，在50 ℃溫度下超聲(150 W)熱水輔助提取45 min[8]。

超聲輔助醇提法：取10 g蘆筍粉末(分別為下腳料的綠色段和下腳料的白色段各2份)，用300 ml 70%乙醇(料液比1∶30 g/ml)在70 ℃下超聲(300 W)提取45 min，抽濾得濾液[9]。

將超聲輔助熱水提取的溶液用蒸餾水定容至500 ml，取5 ml至25 ml容量瓶中，加入5%亞硝酸鈉0.75 ml，搖勻靜置6 min后，加入10%硝酸鋁0.75 ml，搖勻靜置6 min后，加入40%氫氧化鈉10 ml，再用30%乙醇定容至25 ml，搖勻放置15 min后，用紫外分光光度計(jì)(UV-2401PC)在波長(zhǎng)510 nm下測(cè)吸收度，并將所測(cè)數(shù)據(jù)代入蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總黃酮得率。將超聲輔助醇提取液分別取各組對(duì)應(yīng)樣品5 ml加入到25 ml容量瓶中，加入5%亞硝酸鈉0.75 ml，搖勻靜置6 min后，加入10%硝酸鋁0.75 ml，搖勻靜置6 min后，加入40%氫氧化鈉10 ml，用30%乙醇定容至25 ml，搖勻靜置15 min后，在波長(zhǎng)510 nm處測(cè)定紫外吸收度，并將所測(cè)數(shù)據(jù)代入蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總黃酮得率。

1.2.2.3 蘆筍不同部位總黃酮的提取及含量測(cè)定。取10 g蘆筍粉末(分別取食用中部和食用下部各2份及下腳料綠色段和下腳料白色段各2份)。用300 ml 70%乙醇(料液比1∶30 g/ml)在70 ℃下超聲(300 W)提取45 min，抽濾得濾液。精密量取各組提取液1 ml于25 ml容量瓶中，加5%亞硝酸鈉0.75 ml，搖勻靜置6 min后，加10%硝酸鋁0.75 ml，搖勻靜置6 min后加入4%氫氧化鈉10 ml，再用30%乙醇定容至25 ml，搖勻，放置15 min后，在波長(zhǎng)510 nm處測(cè)定紫外吸收度。將所測(cè)數(shù)據(jù)代入蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總黃酮得率。

1.2.3 蘆筍袋泡茶單因素試驗(yàn)。

1.2.3.1 投料量對(duì)黃酮得率的影響。在考察投料量影響因素時(shí)，不僅需要考慮黃酮得率，還需考慮蘆筍袋泡茶的口感、茶湯香味。

1.2.3.2不同提取時(shí)間對(duì)黃酮得率的影響。以90 ℃的純化水250 ml，投料量4 g，在90 ℃恒溫水浴條件下，分別浸提5、10、15、20、25、30 min。取熱水提取的溶液5 ml加入到25 ml容量瓶中，加入5%亞硝酸鈉0.75 ml，搖勻靜置6 min后，加入10%硝酸鋁0.75 ml，搖勻靜置6 min后，加入4%氫氧化鈉10 ml，用30%乙醇定容至25 ml，搖勻靜置15 min后，用紫外分光光度計(jì)在波長(zhǎng)510 nm下測(cè)吸收度，并將所測(cè)數(shù)據(jù)代入蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總黃酮得率。

1.2.3.3 不同提取溫度對(duì)黃酮得率的影響。以250 ml純化水,分別在 40、50、60、70、80、90 ℃下進(jìn)行恒溫水浴浸提20 min，取熱水提取的溶液5 ml加入到25 ml容量瓶中，加入5%亞硝酸鈉0.75 ml，搖勻靜置6 min后，加入10%硝酸鋁0.75 ml，搖勻靜置6 min后，加入4%氫氧化鈉10 ml，用30%乙醇定容至25 ml，搖勻靜置15 min后，用紫外分光光度計(jì)在波長(zhǎng)510 nm下測(cè)吸收度，并將所測(cè)數(shù)據(jù)代入蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總黃酮得率。

1.2.4確定蘆筍袋泡茶的最佳沖泡條件的正交試驗(yàn)。在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選擇提取時(shí)間、提取溫度、投料量考察因素，以測(cè)得的蘆筍樣品中總黃酮含量為考察因素，每個(gè)因素選擇3個(gè)水平，選用L9(33)正交表對(duì)蘆筍袋泡茶的最佳沖泡條件進(jìn)行研究，如表1，按照正交表的條件進(jìn)行提取。

表1　 總黃酮提取正交試驗(yàn)因素水平

2結(jié)果與分析

2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制由表2數(shù)據(jù)進(jìn)行蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，見圖1，得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程y=11.681x+0.014 28,R=0.999。

表2　波長(zhǎng)510 nm處測(cè)定不同濃度蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品紫外吸收度

圖1　蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2蘆筍總黃酮的提取方法驗(yàn)證選擇 超聲輔助熱水提法所測(cè)數(shù)據(jù)如表3、表4所示，超聲輔助醇提法所測(cè)數(shù)據(jù)如表5所示。

表3波長(zhǎng)510 nm處超聲輔助熱水提取測(cè)定蘆筍下腳料綠色段總黃酮紫外吸收度

組別吸光度值重復(fù)1重復(fù)2重復(fù)3平均值濃度計(jì)算值mg/ml黃酮得率mg/g第1組0.04190.04140.04070.04130.026313.15第2組0.02710.02700.02630.02680.01246.20第3組0.02760.02700.02670.02710.01276.35

比較超聲輔助熱水提取法和超聲輔助醇提法試驗(yàn)組中最終總黃酮得率可知，相比較而言超聲輔助醇提法提取蘆筍總黃酮得率顯著高于超聲輔助熱水提取法。因此，決定采用超聲輔助醇提取法提取蘆筍總黃酮方法進(jìn)行含量測(cè)定。

表4　波長(zhǎng)510 nm處超聲輔助熱水提取測(cè)定蘆筍下腳料白色段總黃酮紫外吸收度

表5　波長(zhǎng)510 nm處超聲輔助醇提取測(cè)定蘆筍總黃酮紫外吸收度

2.3蘆筍不同部位總黃酮成分的差異比較根據(jù)表6、7數(shù)據(jù)可知，白色根部的總黃酮含量分別是30.44、30.16 mg/g，平均值30.30 mg/g；莖的綠色部分總黃酮含量分別是21.90、22.19 mg/g，平均值22.05 mg/g；食用中部總黃酮含量分別是92.43、88.69 mg/g，平均值90.56 mg/g；食用下部總黃酮含量分別是30.80、26.83 mg/g，平均值30.30 mg/g。

根據(jù)試驗(yàn)數(shù)據(jù)可知，蘆筍食用中部總黃酮含量最高，依次是食用下部、白色根部、莖的綠色部分；并且可知食用下部和白色根部及莖的綠色部分含量比較接近，表明在蘆筍的不同部位，總黃酮主要聚集在蘆筍生理部位的上端。

表6　波長(zhǎng)510 nm處超聲輔助醇提取測(cè)定蘆筍總黃酮紫外吸收度

表7　波長(zhǎng)510 nm處超聲輔助醇提取測(cè)定蘆筍總黃酮紫外吸收度

2.4蘆筍袋泡茶單因素試驗(yàn)及正交試驗(yàn)

2.4.1 蘆筍袋泡茶單因素試驗(yàn)。

2.4.1.1投料量對(duì)黃酮得率的影響。在考察投料量時(shí)，綜合考慮，在純化用水量250 ml條件下，選擇蘆筍袋泡茶的投料量范圍為4～5 g。

2.4.1.2 不同提取時(shí)間對(duì)黃酮得率的影響。由圖2可知，在5～20 min時(shí)黃酮得率隨提取時(shí)間的延長(zhǎng)而明顯提高，當(dāng)浸提時(shí)間在20 min以上時(shí)，黃酮得率降低，故確定浸提時(shí)間為20 min。

2.4.1.3不同提取溫度對(duì)黃酮得率的影響。 由圖3可知，在溫度50～90 ℃，隨著溫度的升高，黃酮得率增加，但溫度太高(大于90 ℃) 時(shí)，黃酮得率反而下降。這是由于溫度太高致使黃酮類化合物結(jié)構(gòu)被破壞。

2.4.2 蘆筍袋泡茶正交試驗(yàn)。由正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及極差分析結(jié)果表明，3種因素對(duì)浸提效果影響大小依次為提取溫度、提取時(shí)間、投料量,最佳浸提條件為A2B3C1,即在90℃、投料

圖2　不同提取時(shí)間對(duì)黃酮得率的影響

圖3　 不同提取溫度對(duì)黃酮得率的影響

4.0 g的條件下提取25 min。對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行極差分析得因素A(提取溫度)影響顯著，因素B(提取時(shí)間)較顯著，因素C(投料)不顯著。有一定影響因素作用的主次順序?yàn)樘崛囟取⑻崛r(shí)間、投料量，與極差分析的結(jié)果一致。按照上述最佳工藝條件對(duì)蘆筍中黃酮類化合物進(jìn)行提取,提取率為4.842 mg/g。

3 結(jié)論

該試驗(yàn)對(duì)蘆筍不同部位總黃酮含量的測(cè)定，可知在蘆筍的不同部位總黃酮主要是在蘆筍頂端含量較多，這一結(jié)果表明了在今后人們利用蘆筍時(shí)，可根據(jù)所需要對(duì)蘆筍進(jìn)行合理的利用。

通過(guò)該試驗(yàn)可以從直觀上了解到蘆筍袋泡茶藥用價(jià)值隨時(shí)間、溫度等因素的相關(guān)變化。通過(guò)此研究將會(huì)有利于推進(jìn)蘆筍種植業(yè)的發(fā)展，鼓勵(lì)人們多飲用蘆筍茶，促進(jìn)蘆筍相關(guān)食品加工業(yè)的發(fā)展，實(shí)現(xiàn)全民健康的目的，推動(dòng)腫瘤醫(yī)學(xué)的新進(jìn)展，為蘆筍產(chǎn)業(yè)及其天然資源開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

表8　 蘆筍總黃酮提取工藝正交試驗(yàn)結(jié)果分析

參考文獻(xiàn)

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Analysis and Research of Asparagus Health Tea Active Ingredient Dynamic Dissolution

XU Jin1, HANG Shan-shan1, MA Ming-xing2, HUANG Xuan1*et al (1.College of Medicine,Jiaxing University, Jiaxing, Zhejiang 314001; 2. East China University of Science and Technology, Shanghai 200237)

Abstract[Objective] To extract total flavonoids fromAsparagusofficinalisL.and analyze the dynamic dissolution of the active components of asparagus health tea, and promote the promotion and development of asparagus tea. [Method] Using fresh asparagus as raw material, the total flavonoids ofAsparagusofficinalisL.was extracted by ultrasonic ethanol extraction and the content of them in different parts of asparagus was determined. The dynamic analysis was made on dissolution of active components of asparagus teabag from the molecular level. By setting different soaking time, temperature and dosage of asparagus teabag, the content of flavonoids in the extract was determined, and the optimum conditions of asparagus tea brewing were obtained through orthogonal test. [Result] The total flavonoid content in different parts of asparagus difference from the top to the roots of asparagus gradually decreasing, the best conditions of asparagus tea brewing is asparagus teabag feeding amount of 4.0 g, soaking temperature 90 ℃, soaking time 25 min. [Conclusion] The research shows that the reasonable utilization of asparagus can be carried out in the future, and it can provide theoretical basis for the development and utilization of asparagus tea.

Key wordsAsparagus; Asparagus teabag; Total flavonoids; Brewing technology

收稿日期2015-11-26

作者簡(jiǎn)介許瑾(1993-)，女，安徽黃山人，本科生，專業(yè)：藥學(xué)。*通訊作者，教授，碩士，從事天然藥物、制劑新技術(shù)的研究開發(fā)。

基金項(xiàng)目2014年度嘉興學(xué)院校級(jí)重點(diǎn)SRT計(jì)劃項(xiàng)目(851714069)。

中圖分類號(hào)S 509.9

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A

文章編號(hào)0517-6611(2015)36-114-03