張彥青

（衡水學(xué)院化工學(xué)院 河北衡水 053000）

引言：胭脂紅(Ponceau 4R)是在我國(guó)乃至全世界用量最大、使用最廣泛的單偶氮類人工合成食用色素。我國(guó)衛(wèi)生部規(guī)定，食品及飲料中最大食用量為0.05 g/kg[1]。目前最常用的檢測(cè)胭脂紅的方法有高效液相色譜法(HPLC)、極譜法、分光光度法、高效毛細(xì)管電泳法（HPCE）等[2-6]。熒光分析法相對(duì)于其他的測(cè)定方法靈敏度高，選擇性好，試樣用量少。相對(duì)于傳統(tǒng)方法，分析過(guò)程簡(jiǎn)單、省時(shí)且易于推廣。是一種高效且精確的分析方法。

一、實(shí)驗(yàn)部分

1.主要儀器和試劑

日立F-4500 熒光分析儀；FA2204B 電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；TU-1901 雙光束紫外可見分光光度計(jì); 胭脂紅(天津多福源實(shí)業(yè)有限公司)

2.實(shí)驗(yàn)方法

在 10 mL 比色管中，加入一定量的胭脂紅標(biāo)準(zhǔn)溶液（或胭脂紅樣品液），用二次蒸餾水定容，搖勻，在激發(fā)波長(zhǎng)為301.0 nm、掃描速度為1200nm/min、激發(fā)單元狹縫為10.0nm，發(fā)射單元狹縫為5.0nm、光電管電壓為700V、響應(yīng)速度為2.0s，在 200 ～600 nm 波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)定上述待測(cè)液的熒光發(fā)射光譜。根據(jù)442.0 nm 波長(zhǎng)處的熒光強(qiáng)度進(jìn)行定量分析。

二、結(jié)果與討論

1.確定激發(fā)波長(zhǎng)范圍

按照測(cè)定方法2.2.2，掃描10μg/mL 胭脂紅標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸收譜圖，結(jié)果如圖1 所示。

圖1 10μg/mL 胭脂紅標(biāo)準(zhǔn)溶液吸收譜圖

由圖1 可知：10μg/mL 胭脂紅標(biāo)準(zhǔn)溶液在330nm 附近有明顯吸收，由此可確定其最佳激發(fā)波長(zhǎng)在330nm 附近。

2.確定最佳激發(fā)波長(zhǎng)

于1 支10 mL 的比色管中準(zhǔn)確移取0.1mL 胭脂紅標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用二次蒸餾水定容，搖勻，配成10μg/mL 胭脂紅標(biāo)準(zhǔn)溶液。選用1 cm石英比色皿，掃描各個(gè)激發(fā)波長(zhǎng)（330.0nm附近）下的熒光譜圖，見圖2，

圖2 不同激發(fā)波長(zhǎng)下胭脂紅熒光光譜圖

由圖2 可知：在280.0-330.0nm 激發(fā)光照射下，10μg/mL胭脂紅標(biāo)準(zhǔn)溶液在440.0nm左右可以產(chǎn)生明顯的熒光峰。且隨著激發(fā)波長(zhǎng)的增大，熒光相對(duì)強(qiáng)度先增大后減小，且在301.0 激發(fā)光照射下熒光相對(duì)強(qiáng)度達(dá)到最大，由此即可確定胭脂紅的最佳激發(fā)波長(zhǎng)為301.0nm。

3.最佳發(fā)射波長(zhǎng)的確定

掃描胭脂紅標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光譜圖，掃描結(jié)果如圖3：

圖3 激發(fā)波長(zhǎng)為301.0nm 熒光光譜圖

由圖3 可知：當(dāng)激發(fā)波長(zhǎng)為301.0nm 時(shí)，胭脂紅的發(fā)射波長(zhǎng)為442.0nm。

4. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

表1 胭脂紅標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度C 與熒光強(qiáng)度的關(guān)系

以熒光強(qiáng)度F 對(duì)胭脂紅標(biāo)準(zhǔn)液濃度C 作直線，如圖4 所示。其線性擬合方程及相關(guān)系數(shù)為：F= 17.86525+ 17.09652c，r = 0.9979，線性范圍為0.1～ 13.0μg/mL。

圖4 胭脂紅標(biāo)準(zhǔn)曲線

5.樣品含量測(cè)定

從樣品一原液中取5mL 于100mL 容量瓶中，用二次蒸餾水定容，搖勻。并將此溶液標(biāo)記為樣品一稀釋溶液。再分別于6 支10 mL 的比色管中準(zhǔn)確移取1.0mL 樣品一稀釋溶液，用二次蒸餾水定容，搖勻，配成樣品一溶液。測(cè)定其熒光強(qiáng)度。根據(jù)線性回歸方程計(jì)算出待測(cè)液中胭脂紅的濃度，再換算成飲料原液中胭脂紅的含量。結(jié)果見表2。

表2 果汁飲料中胭脂紅含量的測(cè)定(n=6)

6.回收率實(shí)驗(yàn)

對(duì)3 種含胭脂紅的飲料測(cè)定結(jié)果進(jìn)行計(jì)算，回收率在93.07% ～105.48%之間。結(jié)果見表3 所示：

表3 胭脂紅樣品回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

[1]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,1997.

[2]WANG Hong-mei,GUO Wei, WANG Ji-peng, et aL( 王 紅 梅, 郭偉,王繼鵬,等).Food Research and DeveLopment( 食品研究與開發(fā) ),2007,28(6):106.

[3]Fernando G H, Francisco G C, Josefa E.JournaL of Chromatography A,2005,1078(1):83.

[4]王彥吉,宋增福.光譜分析與色譜分析[M].北京:北京大學(xué)出版社.

[5]劉利亞,張衛(wèi)國(guó),王婭芳.液相色譜法測(cè)定飲料中胭脂紅的質(zhì)量控制.貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)[J].2010,35(2):154-156.

[6]羅曼妮,陳悅銘,陳樹東,李婷等.高效液相色譜法測(cè)定糖水染色櫻桃罐頭中胭脂紅、誘惑紅、赤蘚紅的含量[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2014,(8):270-272.