袁麗娟

（連云港中醫(yī)藥高等職業(yè)技術(shù)學(xué)校 江蘇連云港 222007）

清肺止喘合劑由魚腥草、連翹、板藍(lán)根、黃芩、炙麻黃、甘草、桔梗七味藥組方通過(guò)水提取工藝制成合劑，具有清熱解毒、化痰止咳的功效，本品對(duì)肺熱所致的支氣管炎、肺炎見(jiàn)咳嗽痰多等癥,具有較好的臨床療效，臨床多應(yīng)用與兒童咳嗽。本實(shí)驗(yàn)在原方劑基礎(chǔ)上，將影響水提取工藝的主要因素加水量、浸泡時(shí)間、煎煮次數(shù)及時(shí)間為考察因素，方中黃芩為唇形科植物黃芩的干燥根, 對(duì)金黃色葡萄球菌、肺炎球菌、溶血性鏈球菌等多種細(xì)菌有抗菌作用[1], 其有效成分為黃芩苷。以方中主要活性成分黃芩苷含量及得膏率為考察指標(biāo)，按正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表設(shè)計(jì)L9(34)試驗(yàn)優(yōu)選最佳工藝。

一、儀器、試劑與試藥

1.儀器：美國(guó)Waters 1525 高效液相色譜儀；UV 檢測(cè) 器（HanbonLichrospher C18 250×4.5mm 5μm）； 電子天平（SECURA5102-1CN）；KQ2200E 型醫(yī)用超聲清洗器(昆山舒美超聲儀器有限公司)；HH-2 數(shù)顯恒溫水浴鍋 (北京中西遠(yuǎn)大科技有限公司)；SZ-93 自動(dòng)雙重純水蒸餾器。

2.實(shí)驗(yàn)用藥材和對(duì)照品：實(shí)驗(yàn)用黃芩苷對(duì)照品采購(gòu)于中國(guó)生物制品檢定所(批號(hào)：110715-200815)魚腥草、連翹、板藍(lán)根、黃芩、炙麻黃、甘草、桔梗由連云港三禾興藥店采購(gòu)，經(jīng)我校中藥資源教研室鑒定符合2010版藥典標(biāo)準(zhǔn)。

3.實(shí)驗(yàn)用試劑：實(shí)驗(yàn)用試劑乙腈、磷酸、乙醇等均購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，純化水（自制）。

二、方法與結(jié)果

1.正交試驗(yàn)優(yōu)選最佳提取工藝

將魚腥草、連翹、板藍(lán)根、黃芩、炙麻黃、甘草、桔梗七味藥材按處方比例稱量混合好，通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)影響提取的主要因素包括四方面：水量、浸泡時(shí)間、提取時(shí)間以及提取次數(shù)。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)以加水量、浸泡時(shí)間、提取次數(shù)以及提取時(shí)間四個(gè)因素為考察因素，每因素各選三個(gè)水平，見(jiàn)表1，進(jìn)行L9(34)正交試驗(yàn)。

本次實(shí)驗(yàn)以黃芩苷為主要考察指標(biāo)，將9 組實(shí)驗(yàn)樣品分別測(cè)定黃芩苷的含量，所得結(jié)果進(jìn)行方差分析。試驗(yàn)方法及結(jié)果如下。

表1 提取因素水平表

2.樣品制備方法

按處方量稱取魚腥草、連翹、板藍(lán)根、黃芩、炙麻黃、甘草、桔梗七位藥材9 份，將實(shí)驗(yàn)所得的正交樣品液混合過(guò)濾后進(jìn)行濃縮，9 份濃縮液定容到1000ml 容量瓶中，即得樣品溶液，備用進(jìn)行黃芩苷、干浸膏率測(cè)定。試驗(yàn)結(jié)果，見(jiàn)表2。方差分析結(jié)果，見(jiàn)表3.

3. 對(duì)魚腥草、連翹、板藍(lán)根、黃芩、炙麻黃、甘草、桔梗提取液中的黃芩苷進(jìn)行含量測(cè)定

供試品溶液參照2010 版中國(guó)藥典黃芩項(xiàng)下含量測(cè)定[2]。

（1）黃芩苷的含量測(cè)定

①色譜條件

色 譜 柱 為HanbonLichrospher C18 250×4.5mm 5μm； 柱 溫：25 ℃， 以 甲 醇- 水- 磷 酸 水 溶 液（43 ∶57:0.2）； 流 速：1.0mL/ 分 鐘； 檢 測(cè) 波 長(zhǎng)280nm；理論塔板數(shù)不低于4000[3]。

②對(duì)照品溶液的制備

精密稱定黃芩苷對(duì)照品6.0200mg 置于10 mL 棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲(chǔ)備液，再精密量取1 mL 置于10 mL 容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得黃芩苷為0.0602g·L-1的對(duì)照品溶液。

③供試品溶液的制備

精密量取清肺止喘合劑提取液25 mL 置于100mL 容量瓶中，加乙醇至含醇量為70%，超聲處理 20 min，放置至室溫，然后加70%乙醇定容至刻度，搖勻，靜置，過(guò)濾，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液2 mL 置10 mL 容量瓶中，加甲醇定容至刻度。用0.45 μm 膜過(guò)濾，作為供試品溶液[4]。

④線性關(guān)系考察 分別精密吸取黃芩苷對(duì)照品溶液2μL、4μL、6μL、8μL、12μL、16μL、20μL， 注入液相色譜儀，以上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以峰面積( Y) 與對(duì)照品體積( X)進(jìn)行線性回歸，得黃芩苷的回歸方程為Y = 2745.4X + 15.32( R2= 0.9995)，線性范圍為0.1304 ～1.2060μg; 結(jié)果表明，黃芩苷在相應(yīng)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

⑤樣品測(cè)定 分別精密吸取對(duì)照品溶液、1 ～9 號(hào)供試品溶液，在上述色譜條件下一次進(jìn)樣10μL，記錄峰面積，含量測(cè)定結(jié)果。

4.干膏質(zhì)量的計(jì)算

精密量取供試品溶液50 mL 于已干燥至恒質(zhì)量的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，再于105 ℃烘箱中干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速稱質(zhì)量，記錄干浸膏的質(zhì)量，計(jì)算干膏率。

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

表2 L9(34)正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 水提工藝正交試驗(yàn)方差分析

注：F0.05（2，2）=19 , F0.01（2，2）=99

綜合黃芩苷，方差分析結(jié)果，兼顧生產(chǎn)實(shí)際，確定最佳水提工藝條件為A2B2C3D1，即藥材無(wú)需浸泡，每次加10 倍量的水回流提取3 次，每次1.5h。

四、 討論

肺熱咳嗽或由外邪襲肺，蘊(yùn)郁化熱或飲食不節(jié)，蘊(yùn)積化熱，導(dǎo)致肺內(nèi)郁熱，煉液為痰，痰盛生熱，肺失宣肅，故而咳嗽頻作，痰難咯出。清肺止喘合劑對(duì)肺熱咳嗽效果極佳，作為醫(yī)院制劑在臨床已經(jīng)使用20 年，在臨床應(yīng)用中取得了滿意療效。清肺止喘合劑應(yīng)用復(fù)方制劑達(dá)到標(biāo)本兼治的作用。本方采用正交試驗(yàn)法，優(yōu)選清肺止喘合劑制水提工藝，以黃芩苷含量為指標(biāo)，分別用HPLC 法進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果進(jìn)行方差分析，最終優(yōu)選出A2B2C3D1的制備工藝。

[1] 遲戈夫,丁麗,常麗敏.目前國(guó)內(nèi)黃芩藥理研究進(jìn)展[J].內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版) , 2005,20(2):207.

[2] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010:283,97.

[3] 戴航,侯小濤,程世賢.正交試驗(yàn)優(yōu)選復(fù)方百部止咳顆粒中黃芩苷的提取工藝[J]世界中西醫(yī)結(jié)合雜志,2008,3(3):139.

[4] 趙明偉，孫耀志，高松等. 黃芩湯提取工藝研究[J]中醫(yī)學(xué)報(bào),2013,12(28):187.