LC-MS/MS同時測定降壓類中成藥中3種非法添加化學物質

★張勛1池文杰2金鳴2林羽1*(1.福建中醫(yī)藥大學藥學院福州 350122；2.福建省藥品檢驗所福州 350001)

摘要：目的:建立LC-MS/MS方法測定降壓類中成藥中非法添加氫氯噻嗪、尼群地平和尼莫地平3種化學物質。方法:采用液相色譜-三重四級桿串聯(lián)質譜法，多反應監(jiān)測模式(MRM)對降壓類中成藥中非法添加的3種化學物質進行定量、定性分析。結果:建立了同時測定降壓類中成藥非法添加3種化學物質的方法，檢測限均小于0.05 ng。結論:所建立的方法簡便、快速、準確，可作為降壓類中成藥中非法添加尼莫地平、尼群地平和氫氯噻嗪的快速篩查并定量的方法。

關鍵詞：LC-MS/MS；氫氯噻嗪;尼群地平;尼莫地平；降壓藥

高血壓是常見的心血管疾病，患病率高。使用毒副作用小的中藥復方制劑簡化治療方案，備受廣大患者的歡迎。但目前國家食品藥品監(jiān)督管理局尚未頒布降壓類中成藥非法添加化學物質有效甄別方法的標準，一些違法廠家避開檢驗標準，針對性地在中成藥中添加功效相似的抗高血壓物質，危害患者的身心健康，因此對該類非法添加現(xiàn)象的檢測技術進行研究十分必要。

本文以降壓類中成藥為研究對象，選取療效明顯、應用廣泛、價格便宜的氫氯噻嗪、尼群地平和尼莫地平作為檢測物質，建立了同時測定這3種物質的方法，以保證臨床用藥安全。

1材料與儀器

1.1材料甲醇、乙腈(德國默克公司，色譜純)； 尼莫地平對照品(供含測用，中國藥品生物制品檢定所，批號：100270-200002)；尼群地平對照品(供含測用，中國藥品生物制品檢定所，批號：100585-200602)；氫氯噻嗪對照品(供含測用，中國藥品生物制品檢定所，批號：100309-200702)；實驗用降壓類中成藥樣品來源于2009年福建省藥品檢驗所全國評價性抽樣品種，共735批，涉及26個品種，其中3個品種處方中明確含有氫氯噻嗪。品種信息如表1所示。

表1　26個品種信息

注：*表示處方中含有氫氯噻嗪。

1.2儀器Aglient 1200 Series-6410 Triple Quad高效液相色譜質譜聯(lián)用儀(安捷倫公司)；電子天平XS205DU(上海梅特勒公司)；電子天平AL204-IC(上海梅特勒公司)；Millipore 超純水機(法國Milllipore 公司)；KQ-300型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；離心機(上海安亭科學儀器廠)。

2方法與結果

2.1色譜條件色譜柱：Welch XB-C18分析柱(4.6mm×250mm，5μm)；柱溫：30℃；流動相：乙腈-水(70∶30)；流速：0.5 mL/min；進樣量：5μL。

2.2質譜條件電離方式：ESI負離子檢測模式；掃描模式:多反應監(jiān)測(MRM)；毛細管電壓：4000 V；氣體流速:6 L/min；霧化器壓力:30 psi;其他質譜條件參數(shù)詳見表2。

2.3對照品溶液的配制精密稱取氫氯噻嗪對照品5.0mg、尼莫地平對照品10.0mg和尼群地平對照品12.0mg,置于25 mL 棕色容量瓶中，加乙腈溶解，稀釋至刻度，搖勻，配制成混合溶液，使用時用乙腈稀釋成不同濃度的標準工作溶液。

2.4供試品溶液的配制片劑、丸劑，取一次服用劑量，研細，精密稱定；膠囊劑，取一次服用劑量，傾出內容物，研細，并剪碎囊殼，精密稱定；將樣品粉末置于50 mL棕色量瓶中，加入45 mL乙腈超聲10min，放冷至室溫，乙腈定容至刻度，搖勻；離心機離心15 min(4000 r/min)；精密吸取上清液100 μL至250 mL棕色容量瓶中，乙腈稀釋至刻度，0.2 μm 濾膜濾過，即得。

表2　質譜MRM參數(shù)

注：＊為定量用離子。

2.5方法學考察

2.5.1線性關系考察精密吸取對照品混合液置棕色容量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻。按 2.1項和2.2項下條件進行檢測，繪制各物質定量離子的峰面積Y對其質量濃度的標準曲線,結果如表3所示。

2.5.2精密度實驗配制對照品混合溶液按2.1和2.2項下條件重復連續(xù)進樣6次，測定三個成分峰面積，測得的氫氯噻嗪、尼群地平和尼莫地平的RSD分別為1.6%，1.59%、2.26% 。

表3　3種物質的線性方程、線性范圍及相關系數(shù)

2.5.3穩(wěn)定性實驗取對照品混合溶液放置0,4,10,12,18,24h，按2.1和2.2項下條件測定峰面積，氫氯噻嗪、尼群地平和尼莫地平的RSD分別為1.87%、1.76%、1.77%，結果表明三種對照品溶液24 h內穩(wěn)定性良好。

2.5.4加樣回收實驗在樣品(不含所測成分)中精密加入對照品混合溶液5 mL，平行6份，按2.4項下處理后，進樣分析，氫氯噻嗪、尼群地平和尼莫地平平均回收率分別為99.05%、99.92%、98.95% ，RSD分別為1.07%、1.11%、1.89%。

2.5.5檢測限和定量限取對照品混合溶液，以不同比例稀釋，按2.1和2.2項下條件測定，氫氯噻嗪、尼群地平和尼莫地平最低檢測限分別為0.0045,0.04,0.0168ng，最低定量限分別為0.009,0.068,0.0504ng。

2.6對照品溶液分析精密吸取混合對照品溶液和供試品溶液，按2.1和2.2項下條件進樣，記錄總離子流圖,三者在乙腈—水(70∶30)的流動相條件下得到良好的分離。對照品溶液的總離子流圖及提取離子流圖如下圖1所示。

2.7供試品溶液分析對樣品進行分析，發(fā)現(xiàn)25批次處方中含氫氯噻嗪樣品均檢出含氫氯噻嗪，并對其定量，其他樣品均未檢出含有氫氯噻嗪、尼群地平和尼莫地平。

3討論

3.1質譜條件的優(yōu)化分別制備單一對照品溶液，以0.5 mL/min流速直接注入離子源，在全掃描方式下選擇三個對照的電離模式。[M+Na]+不穩(wěn)定，不適合用于定量用離子，選擇負離子模式。優(yōu)化后質譜條件如表2所示。各成分優(yōu)化質譜條件后質譜圖如圖2所示。

3.2色譜條件的優(yōu)化實驗中，曾嘗試使用甲醇-水作為流動相，三個組分均可得到分離，發(fā)現(xiàn)用乙腈—水作為流動相，三個組分的峰形好，而且響應值高，故選擇乙腈—水。在樣品提取溶劑中，考察無水乙醇、甲醇和乙腈提取效率，結果發(fā)現(xiàn)用甲醇和無水

圖1　對照品總離子及提取離子流圖

編號名稱標示量檢出量(mg/片)1珍菊降壓片-12珍菊降壓片-23珍菊降壓片-34珍菊降壓片-45珍菊降壓片-56珍菊降壓片-67珍菊降壓片-78珍菊降壓片-89珍菊降壓片-910珍菊降壓片-1011珍菊降壓片-1112珍菊降壓片-1213珍菊降壓片-1314珍菊降壓片-1415珍菊降壓片-1516脈君安片-117脈君安片-218脈君安片-319脈君安片-420脈君安片-521脈君安片-622脈君安片-723脈君安片-824降壓避風片-125降壓避風片-25mg/片1.5mg/片2.5mg/片5.975.845.204.494.183.833.713.673.623.583.543.212.942.902.831.671.581.391.370.940.820.810.702.672.30

當進樣量過大時，氫氯噻嗪色譜峰出現(xiàn)叉峰現(xiàn)象，故將進樣量定為5μL。

圖2　優(yōu)化質譜條件后質譜圖

4小結

在收集樣品中，珍菊降壓片和脈君安片處方明確含有氫氯噻嗪，標示量分別為5 mg/片和 1.25mg/片，由于2010版《中華人民共和國藥典》中沒有檢測氫氯噻嗪項目，有些廠家避開處方標準，少投料，有些批次的標示量達不到標準要求，產(chǎn)品質量難以保證。本文建立了同時檢測氫氯噻嗪、尼群地平和尼莫地平的LC-MS/MS法，通過保留時間、母離子和子離子對目標成分進行定量和定性分析，該方法簡便、靈敏、穩(wěn)定，適用范圍廣。除處方標識中含有氫氯噻嗪樣品檢出含有化學物質外，其余均未檢出含有非法添加的化學藥物，筆者認為抽樣過程中具有較大盲目性，在日后的抽檢過程中，可以采用本文建立的LC-MS/MS分析方法進行針對性抽樣，節(jié)省實驗資源消耗。

Simultaneous Determination of 3 Chemicals Illegally Added into Anti-hypertensive Chinese Medicines by LC-MS/MS

LIN Yu1,ZHANG Xun1, CHI Wen-jie2, JIN Ming2

1.PharmacyCollegeofFujianUniversityofTraditionalChineseMedicine,Fuzhou350122，China;

2.FujianProvincialInstituteforDrugControl,Fuzhou350001,China.

Abstract:To establish a liquid chromatography-tandem mass chromatography method for screening hydrochlorothiazide, nitrendipine and nimodipine in Traditional Chinese Patent Medicines. Methods: The target compounds were analyzed by LC-MS/MS-ESI-MRM. Results: Established a method for determination of 3 compounds illegally added into Traditional Chinese Patent Medicines simultaneously and the detection limits were less than 0.05 ng. Conclusion: The method is simple, rapid and accurate and it could be used for rapidly screening and quantitatively analyzing hydrochlorothiazide, nitrendipine and nimodipine in Traditional Chinese Patent Medicines.

Key words:LC-MS/MS; hydrochlorothiazide; nitrendipine; nimodipine；hypotensor

收稿日期：(2015-02-06)編輯：曾文雪

中圖分類號：R286.0

文獻標識碼：A

通信作者：*林羽(1966—)，主任藥師。研究方向：中藥質量標準。E-mail:yulam@163.com。