趙聰 楊森 彭為 王強

（遂寧市中心醫(yī)院口腔科，四川 遂寧 629000）

粘液表皮樣癌臨床上又稱為粘液表皮樣腫瘤，其在涎腺腫瘤中占5%～10%［1－3］。有研究根據(jù)粘液表皮樣癌的臨床特征以及組織學(xué)特征，將其分為良性及惡性兩類，WHO 也曾使用粘液表皮樣瘤的名稱，但之后許多學(xué)者認為這種命名分類并不恰當(dāng)，認為此腫瘤全部表現(xiàn)為惡性，應(yīng)稱其為粘液表皮樣癌。且根據(jù)癌細胞分化程度的高低以及生物學(xué)行為，將其分為低度惡性以及高度惡性粘液表皮樣癌。WHO 組織在1990年進行修訂的涎腺腫瘤的命名以及分類中已使用該種分類方式［4－6］。粘液表皮樣癌來源于腺管的上皮細胞。本文研究TSP－1基因在口腔粘液表皮樣癌中的表達及可能的生物學(xué)作用與分子機制，現(xiàn)報告如下。

1 資料和方法

1.1 臨床資料 選擇我院2010年3月至2014年3月收治的376 例口腔粘液表皮樣癌患者進行研究。其中男210例，女166例。年齡在20～68歲之間，平均年齡為（41.2±3.4）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)為：①原發(fā)于口腔，并非其他部位的轉(zhuǎn)移或者是復(fù)發(fā)型粘表患者。②在我院進行診治之前未進行任何相關(guān)治療，或在其他醫(yī)院經(jīng)過不徹底的手術(shù)治療后3 個月內(nèi)。③確診為口腔粘液表皮樣癌。④資料較為完善者。

1.2 研究方法 檢測口腔粘液表皮樣癌組織中TSP－1基因的表達：①經(jīng)過脫蠟，水化處理。將組織制成切片，在恒溫箱內(nèi)60攝氏度下處理20min，之后將切片置于二甲苯內(nèi)浸泡10min，將二甲苯更換后再次處理兩次，置于無水乙醇內(nèi)30s，此操作重復(fù)3次。②PBS液將其清洗3次。使用PBS調(diào)配出5%的雙氧水，在室溫條件下放置10min，使用PBS清洗3次。進行抗原修復(fù)處理。將切片經(jīng)過冷卻處理后，使用PBS清洗3次。③在其中加入正常的小牛血清型封閉液體，室溫處理10min，除去多余液體。④加入Ⅰ抗50μl，在4℃的冰箱中放置一夜。⑤將切片在室溫下放置30min，PBS清洗3次。加入生物素化Ⅱ抗，在室溫下靜置20min。使用PBS 清洗3 次。⑥顯色處理，脫水、封片之后鏡檢。實施MVD 測試，按照試劑盒的說明書實施操作，CD31使用高溫進行抗原修復(fù)，呈現(xiàn)棕色單個或內(nèi)皮細胞群的患者都將作為1個血管計數(shù)，但肌層較厚以及管腔面積大于8 個紅細胞直徑的血管不計入。在200倍的視野下實施血管計數(shù)，美例標(biāo)本計數(shù)5個視野，取其平均值。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件分析，數(shù)據(jù)比較用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 口腔粘液表皮樣癌中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移資料 口腔粘液表皮樣癌高度惡性62例中有26例伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移率為41.9%；中度惡性169例中有23 例伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移率為13.6%；低度惡性145例中有3 例伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移率為2.1%。所有376例觀察病例中伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的總例數(shù)為52例。不同部位腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有所不同，轉(zhuǎn)移率大于20%的腫瘤部位有頜下腺、舌下腺、磨牙后區(qū)、頰部、頜骨區(qū)，見表1。

2.2 口腔粘液表皮樣癌中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分區(qū)情況 對52例伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者研究發(fā)現(xiàn)，同一側(cè)Ⅰ區(qū)，Ⅱ區(qū)，Ⅲ區(qū)，Ⅳ區(qū)以及Ⅴ區(qū)的淋巴結(jié)陽性率分別為14／52（27.2%），17／52（33.7%），5／52（14.1%），（1／52）1.92%以及（1／52）1.92%。高度惡性明顯多于低度惡性情況，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

2.3 對所有患者的臨床隨訪情況 對376 例中的323例患者隨訪12個月，其中高度惡性組62例隨訪59例，中度惡性組169例隨訪144例，低度惡性組145例隨訪120例及各組復(fù)發(fā)、遠處轉(zhuǎn)移和死亡情況，見表2。

表1 口腔粘液表皮樣癌中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移資料［n（×10－2）］Table 1 Data of the mucoepidermoid tumor on lymph node metastasis

表2 患者臨床隨訪情況［n（×10－2）］Table 2 The conditions of patient＇s clinical follow－up

2.4 TSP－1基因表達和MVD 間的關(guān)系 TSP－1陽性組的MVD 是（18.4±4.9），陰性組是（29.8±6.3），組間比較有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

表3 TSP－1表達和MVD之間的關(guān)系（n，）Table 3 The relationship between TSP－1and MVD

表3 TSP－1表達和MVD之間的關(guān)系（n，）Table 3 The relationship between TSP－1and MVD

3 討論

粘液表皮樣癌的主要成分包括粘液樣細胞以及表皮樣細胞，粘液表皮樣癌源自腺管的上皮細胞［7－9］。70%以上可在腮腺癌患者中表現(xiàn)。小涎腺者常見于腭部，其他部位（如磨牙后區(qū)和頰部，及上、下唇等部位）則較少出現(xiàn)。此病可發(fā)生于任何年齡，以30～50歲者為多見，且女性多于男性。高分化者常呈無痛性腫塊，生長緩慢，腫瘤大小不等，邊界可清或不清，質(zhì)地中等偏硬，表面可呈結(jié)節(jié)狀。粘液表皮樣癌的臨床表現(xiàn)與臨床分化程度關(guān)系密切，高分化型占多數(shù)，一般為無痛性腫塊，生長較慢，病程較長，腫瘤體積大小不一，邊界清楚，質(zhì)偏硬，活動，表面光滑或呈結(jié)節(jié)狀，可為囊性，亦可為實性。發(fā)生于腭部或磨牙后區(qū)者，可見腫塊在粘膜下呈淡藍色或暗紫色，粘膜光滑，質(zhì)地軟，穿刺可抽出少量血性紫黑色液體。本病暫無有效的預(yù)防方法，早發(fā)現(xiàn)早治療是預(yù)防的關(guān)鍵［10，11］。

粘液表皮樣癌高分化者和混合瘤較為相似，呈現(xiàn)圓形，腫瘤較小，直徑多為2～到3厘米，少數(shù)超過5厘米。部分存在被膜，但多數(shù)不完整，甚至完全無被膜。剖面呈現(xiàn)出灰白色或者淺粉色，偶見分葉，可有數(shù)量不一致的小囊，內(nèi)含粘液。低分化者完全缺少包膜，界限不清，侵及鄰近組織。切面呈灰白色，不分葉，質(zhì)地較為均勻，可見散在小囊以及半透明小灶。粘液表皮樣癌鏡下可見粘液樣細胞和表皮樣細胞以及中間細胞。粘液樣細胞分化成熟時呈現(xiàn)出杯狀或柱狀，表皮樣細胞類似口腔粘膜的復(fù)層鱗狀上皮，可見細胞的間橋。中間細胞呈現(xiàn)出立方形，體積較小，大小一致，胞漿較少，類似上皮基底細胞。中間細胞可向粘液樣細胞以及表皮樣細胞不斷演變。高分化者，粘液樣細胞以及表皮樣細胞較多，中間細胞較少，瘤細胞會形成不規(guī)則的片狀，但是常會形成大小不一致的囊腔，囊壁襯里常粘液細胞。粘液樣的細胞會覆蓋在表皮樣細胞上，也可夾雜在表皮樣細胞之間。較大的囊腔會存在乳頭突入，腔內(nèi)存在紅染的粘液。低分化者主要表現(xiàn)為表皮樣細胞以及中間細胞，而粘液樣細胞較少，瘤細胞間變明顯，可見核分裂，實質(zhì)性上皮團塊多，囊腔少，并可見腫瘤向周圍組織侵犯［12，13］。

TSP－1基因在處于低分化的腫瘤組織中的表達幾率顯著小于高分化的組織，處于低分化的腫瘤組織的微血管的密度以及細胞進行增殖的活性均高于高分化的組織。無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或者是遠處淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，TSP－1基因的表達情況顯著大于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或遠處轉(zhuǎn)移者。隨著患者腫瘤分化程度的不斷下降，TSP－1基因表達會不斷減小，致使患者體內(nèi)腫瘤細胞的增殖活性以及血管的生成能力有所差異。有研究者將TSP－1基因肽段轉(zhuǎn)染到乳腺癌MDA－MB－231細胞株內(nèi)，使得TSP－1基因肽段處于過表達，經(jīng)過轉(zhuǎn)染之后的腫瘤細胞的生長率，在患者體內(nèi)的致瘤性以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著下降。TSP－1 基因作用在人的肝癌細胞株HCCLM3 三天之后，細胞的生長受到顯著抑制，然而通過功能性的抗體將CD36、CD47以及TSP－1基因相互結(jié)合的過程阻斷之后，抑制率明顯降低，并且CD36對細胞生長的抑制率阻斷效果最差。CD36作為TSP－1基因?qū)?nèi)皮細胞遷移以及抗血管新生進行抑制的關(guān)鍵受體，TSP－1 基因和內(nèi)皮細胞上的CD36受體相互結(jié)合后，能接觸到外圍細胞發(fā)生凋亡的途徑。3TRS與TSP－1 基因?qū)?nèi)皮細胞遷移相關(guān)濃度進行抑制類似，3TSR 減少內(nèi)源性以及血管內(nèi)皮生長因子進行誘導(dǎo)的c－丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測的活性，并且通過VEGF 的表達進而誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞的凋亡。TSP－1基因的羧基末端4N1K 的多肽會對毛細血管內(nèi)皮細胞相應(yīng)管道的形成產(chǎn)生阻礙，具體的作用功能表現(xiàn)在4N1K 會抑制成簇的黏附激酶以及bFGF實施誘導(dǎo)的磷脂酶C－γ的酪氨酸的相關(guān)的磷酸化，也會抑制bFGF 進行誘導(dǎo)的角膜血管的再生。在人體內(nèi)，腺相關(guān)的病毒載體表達出的3TSR 以及內(nèi)皮抑素具有較為明顯的抑制血管生成的作用。TSP－1 基因?qū)?nèi)皮細胞的增殖存在一定的抑制作用，TSP－1基因?qū)?nèi)皮細胞以及基質(zhì)纖連蛋白的粘附作用進行阻礙，使得內(nèi)皮細胞局灶黏著斑喪失，進而阻礙內(nèi)皮細胞的增殖，該作用是由TSP－1的N 末端肝素結(jié)合區(qū)進行介導(dǎo)。有研 究發(fā)現(xiàn)［14，15］，TSP－1基因 以及3TSR 在10－10mol／L時就可以使得一氧化氮對細胞的黏附功能的阻礙作用較為明顯，一氧化氮對細胞內(nèi)部的cGMP的積聚功能也被明顯阻礙。除此之外，TSP－1基因能夠通過競爭性的阻礙bFGF－2和內(nèi)皮細胞相互結(jié)合位點的抑制其所受刺激的內(nèi)皮細胞的增殖。

4 結(jié)論

TSP－1基因在處于低分化的腫瘤組織中的表達幾率顯著小于高分化的組織，處于低分化的腫瘤組織的微血管的密度以及細胞進行增殖的活性都高于高分化的組織，TSP－1基因能夠抑制患者血管的再生。

［1］程永靜，孫曉麟，李桂葉，等.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血小板反應(yīng)蛋白－1水平與疾病活動指標(biāo)的相關(guān)性分析［J］.中華老年醫(yī)學(xué)雜志，2014，33（6）：606－609.

［2］Chen Li，Wang Chen，Wang Xu，et al.A reappraisal of the relationship between metatarsus adductus and hallux valgus［J］.中華醫(yī)學(xué)雜志（英文版），2014，127（11）：2067－2072.

［3］馬寧，成興波，韓俊霞，等.2型糖尿病微血管病變患者血清血小板反應(yīng)蛋白－1 水平的變化及臨床意義［J］.中國糖尿病雜志，2014，22（7）：645－648.

［4］李多，周新華，呂平欣，等.肺粘液表皮樣癌的CT 影像表現(xiàn)［J］.醫(yī)學(xué)影像學(xué)雜志，2013，23（4）：539－541.

［5］宋穎韜，周曉燕，孫長生，等.錯配修復(fù)蛋白hMSH2、hMLH1在涎腺粘液表皮樣癌中的表達［J］.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展，2014，14（10）：1839－1843.

［6］張惠，向素芳，鄧立強，等.涎腺粘液表皮樣癌的超聲表現(xiàn)及病理學(xué)基礎(chǔ)［J］.四川醫(yī)學(xué)，2014，1（9）：1235－1236.

［7］韓冰，王麗京，王靜，等.Slit－Robo信號對粘液表皮樣癌細胞增殖作用的影響［J］.南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2012，32（1）：37－39.

［8］黃江燕，鄒貴勉，鄭藝花，等.IgA 腎病患者外周血單核細胞TSP－1表達及意義［J］.國際泌尿系統(tǒng)雜，2014，34（1）：46－48.

［9］程永靜，孫曉麟，李桂葉，等.硬皮病患者血小板反應(yīng)蛋白的表達［J］.中國臨床保健雜志，2013，16（2）：122－123.

［10］邱振偉，溫端改，侯建全，等.TSP－1在腎透明細胞癌與外周血中的表達及臨床意義［J］.中國血液流變學(xué)雜志，2012，22（2）：205－208.

［11］范勝強，徐廣明，姜萌，等.TSP－1、TGF－β和PPAR－γ在腦膠質(zhì)瘤中的表達及其與微血管密度的關(guān)系［J］.山東大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2012，50（2）：53－56.

［12］Beatriz，Martínez－Poveda，Javier A，et al.The brominated compound aeroplysinin－1inhibits proliferation and the expression of key pro－inflammatory molecules in human endothelial and monocyte cells［J］.PloS one，2013，8（1）：203－204.

［13］Arumugam R，Jayakumar，Xiao Y，et al.Decreased astrocytic thrombospondin－1secretion after chronic ammonia treatment reduces the level of synaptic proteins：in vitro and in vivo studies［J］.Journal of neurochemistry，2014，131（3）：333－347.

［14］王忠富，侯毅斌，李建生，等.78例腮腺腫瘤的CT 圖像特點及診斷價值［J］.醫(yī)學(xué)信息，2014，1（29）：37－38.

［15］張欣平，李光明，郭翠華，等.放療聯(lián)合卡培他濱治療老年食管癌［J］.西部醫(yī)學(xué)，2014，26（7）：865－868.