阮林+黃煥森+金文香+許陽(yáng)英+朱卓麗+李莉+連肖強(qiáng)

[摘要] 目的 探討漢防己甲素對(duì)急性切口痛大鼠模型的鎮(zhèn)痛作用。 方法 選擇急性切口痛模型作為研究對(duì)象，將SD雄性大鼠30只隨機(jī)分為急性疼痛組和漢防己甲素組，在術(shù)前1 d至術(shù)后6 d分別進(jìn)行疼痛累積評(píng)分、熱和機(jī)械痛閾測(cè)定。 結(jié)果 從切開(kāi)后2 h～6 d急性疼痛模型組的熱縮足反射潛伏期均顯著低于基礎(chǔ)值，但漢防己甲素組只有術(shù)后2 h～3 d熱縮足反射潛伏期顯著低于基礎(chǔ)值（P<0.05），而且漢防己甲素組的熱縮足反射潛伏期從切開(kāi)后2 h～6 d均顯著高于急性疼痛模型組（P<0.05）。急性疼痛模型組和漢防己甲素組的50%縮足閾值在術(shù)后2 h～6 d均顯著低于基礎(chǔ)值（P<0.05），兩組間基礎(chǔ)閾值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但從切開(kāi)后2 h～5 d，漢防己甲素組的50%縮足閾值顯著高于急性疼痛模型組（P<0.05），術(shù)后6 d差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。急性疼痛模型組及漢防己甲素組的疼痛累積評(píng)分在切開(kāi)后均較基礎(chǔ)值顯著增加（P<0.05），兩組間基礎(chǔ)值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但術(shù)后漢防己甲素組的評(píng)分低于對(duì)照組，第5、6天差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。 結(jié)論 漢防己甲素可緩解急性疼痛模型的靜息痛、熱及機(jī)械刺激的誘發(fā)痛，有希望成為新的術(shù)后鎮(zhèn)痛方法。

[關(guān)鍵詞] 漢防己甲素；鎮(zhèn)痛；急性疼痛；痛閾

[中圖分類(lèi)號(hào)] R285 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2014）12（c）-0011-04

雖然圍術(shù)期疼痛治療有較大發(fā)展，但因?yàn)閰^(qū)域阻滯學(xué)應(yīng)用受限、阿片類(lèi)藥物副作用及痛覺(jué)過(guò)敏等因素，仍有患者術(shù)后要忍受中到重度的疼痛[1-3]。術(shù)后疼痛的發(fā)生率在常見(jiàn)手術(shù)如腦科手術(shù)、胸科手術(shù)、截肢術(shù)等仍較高[4-6]，因此術(shù)后疼痛治療仍是一個(gè)研究熱點(diǎn)，有必要研究開(kāi)發(fā)新的疼痛治療藥物。漢防己甲素（Tetrandrine，Tet）是從防己科植物粉防己中提取出的一種雙芐基異喹啉類(lèi)生物堿，具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤等多種藥理作用[7-10]。由于漢防己甲素具有非常廣泛的藥理作用以及可有效抑制多種急慢性炎癥，故在疼痛治療方面具有廣闊的應(yīng)用前景。因此本項(xiàng)研究擬在足底切口痛模型大鼠注射漢防己甲素，測(cè)定大鼠的誘發(fā)及自發(fā)性疼痛行為評(píng)估漢防己甲素對(duì)術(shù)后疼痛的鎮(zhèn)痛效應(yīng)，了解其應(yīng)用于術(shù)后疼痛治療的可行性。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

成年雄性SD大鼠（8～10周，體重200～250 g），由廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)遵循廣州醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物倫理要求，每12小時(shí)標(biāo)準(zhǔn)喂食1次，隨意飲水，控制室溫為25℃左右。

1.2 實(shí)驗(yàn)分組

將30只大鼠隨機(jī)分為急性疼痛模型組和漢防己甲素組，每組15只，進(jìn)入行為學(xué)測(cè)量。急性疼痛模型組接受左足底切開(kāi)手術(shù)，切開(kāi)足底前腹腔注射生理鹽水50 μl。漢防己甲素組也接受左足底切開(kāi)手術(shù)，切開(kāi)足底前腹腔注射漢防己甲素（30 mg/kg體重，HPLC純度≥98%，上海阿拉丁試劑公司）。大鼠隨后分別接受熱痛閾、機(jī)械痛閾測(cè)定及疼痛累計(jì)評(píng)分。

1.3 模型建立

在大鼠放入透明誘導(dǎo)箱后予3%異氟醚吸入誘導(dǎo)下，入睡后取出經(jīng)鼻罩給予1.5%異氟醚吸入維持，氧流量0.3 L/min。酒精消毒大鼠左足跖面，從足跟部邊緣0.5 cm處向前作長(zhǎng)為1 cm的縱向切口，切透皮膚、筋膜及跖肌，隨后用5-0抗菌可吸收縫線(xiàn)縫合皮膚兩針，按壓止血及清潔傷口消毒，建立急性大鼠足底切口痛模型。

1.4 熱縮足反射潛伏期

利用熱刺痛儀的輻射熱源照射切口旁0.5 mm，記錄從照射開(kāi)始到熱縮足反應(yīng)的時(shí)間，間隔5 min重復(fù)3次，取平均值記錄為熱縮足反射潛伏期，通過(guò)測(cè)定后足對(duì)熱傷害刺激的回縮反應(yīng)潛伏期來(lái)評(píng)估熱痛閾。

1.5 機(jī)械痛閾測(cè)定

先使大鼠預(yù)適應(yīng)測(cè)試籠2 d后測(cè)定基礎(chǔ)值。采用up-down法和應(yīng)用10支von Frey絲（0.6～26.0 g，Stoelting 58011，美國(guó)）測(cè)定大鼠機(jī)械性縮足閾值，并計(jì)算50%縮足閾值，計(jì)算公式為50%縮足閾值=（10[Xf+kδ]）/10000，其中Xf為最后一支von Frey絲的壓力值；k為陽(yáng)性/陰性反應(yīng)組合相對(duì)應(yīng)的查表值，δ為所用刺激間的平均差值。當(dāng)基礎(chǔ)閾值>20后可在次日建立急性足底切口痛大鼠模型分別在術(shù)前1 d和術(shù)后2 h、1 d、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d接受機(jī)械痛閾測(cè)定。

1.6 疼痛累計(jì)評(píng)分

將大鼠置于底為1 cm×1 cm網(wǎng)格的透明塑料籠內(nèi)，觀察大鼠切開(kāi)足。根據(jù)切開(kāi)足承重情況給予0、1、2分：若完全負(fù)重且網(wǎng)格使傷口變白或扭曲則為0分；若傷口觸及網(wǎng)格但傷口未變白或扭曲則為1分；若足部完全離開(kāi)網(wǎng)格則為2分。給予20 min適應(yīng)期后，每次觀察時(shí)間為1 min，之后間隔5 min重復(fù)一次，連續(xù)觀察1 h，累加得出疼痛累計(jì)評(píng)分（0～24分）。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件（SPSS Inc，USA）進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，所有行為學(xué)測(cè)試結(jié)果均采用非參數(shù)檢驗(yàn)進(jìn)行分析，同一組大鼠不同測(cè)試時(shí)間點(diǎn)的數(shù)據(jù)先用Friedman ANONA檢驗(yàn)差異，然后再用配對(duì)秩和檢驗(yàn)（Wilcoxon matched pairs test）分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 漢防己甲素對(duì)急性切口痛大鼠模型熱痛閾的影響

每組術(shù)前1 d測(cè)定值為基礎(chǔ)值，從切開(kāi)后2 h～6 d急性疼痛模型組的熱縮足反射潛伏期均顯著低于基礎(chǔ)值，但漢防己甲素組只有術(shù)后2 h～3 d熱縮足反射潛伏期顯著低于基礎(chǔ)值（P<0.05），而且漢防己甲素組的熱縮足反射潛伏期從切開(kāi)后2 h～6 d均顯著高于急性疼痛模型組（P<0.05），即漢防己甲素提高了切口痛大鼠的熱痛閾（表1）。

2.2 漢防己甲素對(duì)急性切口痛大鼠模型機(jī)械痛閾的影響

急性疼痛模型組和漢防己甲素組的50%縮足閾值在術(shù)后2 h～6 d均顯著低于基礎(chǔ)值（P<0.05），兩組間基礎(chǔ)閾值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但從切開(kāi)后2 h～5 d，漢防己甲素組的50%縮足閾值顯著高于急性疼痛模型組（P<0.05），術(shù)后6 d差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），即漢防己甲素提高了切口痛大鼠的機(jī)械痛閾（表2）。

2.3 漢防己甲素對(duì)急性切口痛大鼠模型的疼痛累積評(píng)分的影響

急性疼痛模型組及漢防己甲素組的疼痛累積評(píng)分在切開(kāi)后均較基礎(chǔ)值顯著增加（P<0.05），兩組間基礎(chǔ)值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但術(shù)后漢防己甲素組的評(píng)分低于對(duì)照組，第5、6天差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），即漢防己甲素降低了切口痛大鼠的疼痛累積評(píng)分（表3）。

3 討論

術(shù)后疼痛是機(jī)體受到手術(shù)傷害刺激組織損傷后發(fā)生的包括生理、心理和行為上的一系列反應(yīng)。近年來(lái)，圍術(shù)期鎮(zhèn)痛得到麻醉和外科界的高度重視，主張將手術(shù)后疼痛作為“第五生命體征”，與血壓、心率、呼吸、體溫等生命體征同等對(duì)待并給予及時(shí)治療[10-14]。本實(shí)驗(yàn)預(yù)先建立一種大鼠急性術(shù)后疼痛模型，它是由Brennan于1996年建立的左足切口痛模型，被證明能良好地反映臨床術(shù)后疼痛[15-16]。與靜息痛相關(guān)的疼痛累積評(píng)分能反映疼痛通路的持續(xù)活動(dòng)，而熱痛閾、機(jī)械痛閾則可反映皮膚的敏感性，本研究比較了足底切口痛模型大鼠鞘內(nèi)應(yīng)用漢防己甲素與否的疼痛累積評(píng)分、熱痛閾以及機(jī)械性痛閾，發(fā)現(xiàn)漢防己甲素可同時(shí)改善靜息痛及誘發(fā)痛，提示給予漢防己甲素是一個(gè)有效的術(shù)后疼痛治療藥物。

漢防己甲素是植物防己科粉防己的主要活性成分，化學(xué)結(jié)構(gòu)為雙芐基異喹啉類(lèi)化合物，具有鎮(zhèn)痛、抗炎、降血壓、抗脂質(zhì)過(guò)氧化、逆轉(zhuǎn)心臟和血管的重塑、防止細(xì)胞受損、改善微循環(huán)及Ca2+拮抗作用[17]。既往關(guān)于漢防己甲素的研究主要是用于治療風(fēng)濕痛、關(guān)節(jié)痛、神經(jīng)痛，這些均是慢性疼痛，但漢防己甲素是否作用于急性疼痛，目前尚未見(jiàn)報(bào)道，其機(jī)制尚缺少研究。因此根據(jù)這部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果，認(rèn)為漢防己甲素也可用于急性疼痛治療，并且可用于急性圍術(shù)期疼痛，可能是與漢防己甲素的抗氧化應(yīng)激作用有關(guān)，正在進(jìn)行下一步研究。

總之，在足底切口痛模型大鼠，漢防己甲素可改善大鼠術(shù)后的疼痛行為、減輕熱刺激及機(jī)械性刺激引起的痛覺(jué)過(guò)敏，有望成為新的術(shù)后急性疼痛治療藥物之一。

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（收稿日期：2014-09-18 本文編輯：郭靜娟）