李承明

改進(jìn)RP-HPLC法測(cè)定牛黃及安宮牛黃丸中的游離膽紅素以保證牛黃類藥材及安宮牛黃丸的質(zhì)量與用藥安全

李承明

目的 探究改進(jìn)RP-HPLC法測(cè)定牛黃及安宮牛黃丸中的游離膽紅素以保證牛黃類藥材及安宮牛黃丸的質(zhì)量與用藥安全。方法 樣品用二氯甲烷提取, 用HPLC法測(cè)定游離膽紅素的含量。考察牛黃及安宮牛黃丸中不同分散介質(zhì)如碳酸鈣和硅藻土對(duì)游離膽紅素測(cè)定的影響。色譜條件, C18色譜柱, 檢測(cè)波長(zhǎng)分別為Kromasil 100, (5 μm, 0.46 cm×15 cm), 450 nm。以乙腈-1%冰醋酸(95：5)為流動(dòng)相。結(jié)果 膽紅素在0.3055～30.55 μg/ml范圍內(nèi)線性良好, 加樣回收率最高。結(jié)論 對(duì)于牛黃及安宮牛黃丸,采用碳酸鈣作為分散介質(zhì)的測(cè)定結(jié)果優(yōu)于硅藻土等介質(zhì)。值得臨床推廣使用。

RP-HPLC法；安宮牛黃丸；游離膽紅素；碳酸鈣；介質(zhì)

脊索動(dòng)物門哺乳綱?？苿?dòng)物牛干燥的膽結(jié)石, 牛黃完整者多呈卵形, 質(zhì)輕, 表面金黃至黃褐色, 細(xì)膩而有光澤［1］。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為牛黃氣清香, 味微苦而后甜, 性涼?？捎糜诮鉄帷⒔舛?、定驚。內(nèi)服治高熱神志昏迷、小兒驚風(fēng)、抽搐等癥,外用治、口瘡癰腫、療毒癥。由于天然牛黃很珍貴, 國(guó)際上的價(jià)格要高于黃金, 現(xiàn)在大部分使用的是人工牛黃［2］。人工牛黃中游離膽紅素含量如果偏高則會(huì)引起神經(jīng)毒性反應(yīng), 危機(jī)生命。因此, 檢測(cè)牛黃及安宮牛黃丸中游離膽紅素的含量對(duì)藥品的質(zhì)量至關(guān)重要。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取安宮牛黃丸作為檢測(cè)材料, 該藥品具有清熱解毒、鎮(zhèn)驚開竅等功效?？捎糜跓岵?、邪入心包、高熱驚厥, 神志譫語(yǔ)；中風(fēng)昏迷及腦炎、腦膜炎、中毒性腦病,腦出血、敗血癥見上述證候者。該藥的化學(xué)成分有牛黃、水牛角濃縮粉、麝香、珍珠、朱砂、雄黃、黃連、黃芩、梔子、郁金、冰片。

1.2 方法 采用RP-HPLC法測(cè)定安宮牛黃丸。樣品用二氯甲烷提取, 用HPLC法測(cè)定游離膽紅素的含量?？疾炫｜S及安宮牛黃丸中不同分散介質(zhì)如碳酸鈣和硅藻土對(duì)游離膽紅素測(cè)定的影響。色譜條件, C18色譜柱, 檢測(cè)波長(zhǎng)分別為Kromasil 100, (5 μm, 0.46 cm×15 cm), 450 nm。以乙腈-1%冰醋酸(95：5)為流動(dòng)相。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s)表示, 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

游離膽紅素在0.3055～30.55 μg/ml范圍內(nèi)線性良好, 加樣回收率在95%～100%。對(duì)于安宮牛黃丸, 采用碳酸鈣作為分散介質(zhì)的測(cè)定結(jié)果優(yōu)于硅藻土等介質(zhì)。采用碳酸鈣替代硅藻土作為牛黃類藥材及安宮牛黃丸樣品中游離膽紅素分析的分散介質(zhì), RP-HPLC方法準(zhǔn)確度高, 操作簡(jiǎn)便易行。

3 討論

牛黃又叫西黃, 是脊椎動(dòng)物?？婆５哪懩医Y(jié)石。干燥的

牛黃呈卵圓形或橢圓形, 或其他不規(guī)則形狀, 外表淡黃褐色,或金黃色, 平滑光澤, 質(zhì)輕而脆, 容易破碎, 在碎斷面可以看出它是由薄層重迭積累而形成的。性味苦、甘、涼, 入心肝經(jīng)。解毒化碳定驚。具有清熱、解毒、鎮(zhèn)驚等功效, 適用于急性熱病的高熱、手足抽搐痙攣、昏迷不醒等癥；又可用于熱癤、疔瘡、咽喉腫痛、口瘡等癥。目前, 市場(chǎng)上多采用人工牛黃,而人工牛黃由牛膽粉、膽酸、豬去氧膽酸、?；撬?、膽紅素、膽固醇、微量元素等加工制成［3］。人工牛黃中游離膽紅素若過(guò)高會(huì)引起神經(jīng)毒作用。游離膽紅素是指血液中紅細(xì)胞的降解產(chǎn)物血紅素沒(méi)有在肝臟與葡糖醛酸結(jié)合生成葡糖醛酸膽紅素。正常情況下游離膽紅素濃度極低, 少于1%。當(dāng)游離膽紅素超過(guò)一定濃度時(shí)它可以通過(guò)血腦屏障進(jìn)入中樞神經(jīng)細(xì)胞引起核黃疸。核黃疸在嬰幼兒則表現(xiàn)為嗜睡、拒奶、反應(yīng)差、呻吟、尖叫, 病情進(jìn)一步加重者凝視, 頭向后仰、角弓反張、抽搐、呼吸不規(guī)則, 出現(xiàn)病理性呼吸［4］。因此, 測(cè)定藥品中游離膽紅素的含量十分重要, 本實(shí)驗(yàn)采用的RP-HPLC法簡(jiǎn)單易行, 準(zhǔn)確性高［5］。用HPLC法測(cè)定游離膽紅素的含量。同時(shí)考察牛黃及安宮牛黃丸中不同分散介質(zhì)如碳酸鈣和硅藻土對(duì)游離膽紅素測(cè)定的影響。色譜條件為Kromasil 100-C18色譜柱(5 μm, 0.46 cm×15 cm), 以乙腈-1%冰醋酸(95：5)為流動(dòng)相, 檢測(cè)波長(zhǎng)為450 nm。結(jié)果膽紅素在0.3055～30.55 μg/ml范圍內(nèi)線性良好, 加樣回收率在95%～105%。結(jié)果表明對(duì)于牛黃及安宮牛黃丸, 采用碳酸鈣作為分散介質(zhì)的測(cè)定結(jié)果優(yōu)于硅藻土等介質(zhì)。值得臨床推廣使用。

［1］ 王春來(lái).牛黃及其代用品概述.實(shí)用中醫(yī)藥雜志, 2010, 26(10): 732.

［2］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民兵和國(guó)藥典(一部).2010版.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社, 2010:66, 162.

［3］ 楊展瀾, 孫穎, 田文, 等.紅外光滑法研究膽紅索在溶液中的結(jié)構(gòu).光譜學(xué)于光譜分析, 2000, 20(5):635-637.

［4］ 李愛玲, 趙建英, 壽文虹.現(xiàn)行藥品標(biāo)準(zhǔn)中亟待規(guī)范的一些問(wèn)題.中國(guó)藥業(yè).2010(10):6.

［5］ 倪曉霓.我國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)管理中存在的問(wèn)題及建議.齊魯藥事, 2010, 29(7):387-388.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.05.202

2014-07-18］

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