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·綜述·

血清人表皮生長因子受體2的臨床檢測價值與檢測方法研究進展

王璐1,2，沈國棟1,2，胡世蓮1

(1.安徽醫(yī)科大學附屬省立醫(yī)院、安徽省立醫(yī)院老年醫(yī)學科，合肥 230001；2.腫瘤免疫營養(yǎng)治療安徽省重點實驗室)

人表皮生長因子受體2(HER2/ErbB2/p185)蛋白是一個跨膜受體包括胞外段、跨膜區(qū)域段及胞內(nèi)的絡(luò)氨酸激酶區(qū)域段[1]。越來越多的研究發(fā)現(xiàn)HER2在乳腺癌、胃癌、卵巢癌中高表達且腫瘤組織中HER2的發(fā)現(xiàn)已成為腫瘤臨床診斷與治療的獨立指標。檢測HER2的創(chuàng)傷性組織學方法包括免疫組織化學(IHC)、熒光原位雜交(FISH)等。近期發(fā)現(xiàn)存在于血清中的HER2包外區(qū)域段可以用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測到，而且乳腺癌病人血清中HER2的水平與組織中HER2表達的水平是正相關(guān)的。此種方法已受到了FDA的認證。

1血清HER2檢測在臨床中的重要性

1.1檢測病理結(jié)果HER2陽性的早期及轉(zhuǎn)移性乳腺癌病人血清中HER2的水平對于早期乳腺癌的病人通過免疫組織化學及熒光原位雜交的方法可檢測到其中有20%~25%的病人HER2的水平高表達。但有研究發(fā)現(xiàn)對于部分初期乳腺癌的患者并不能通過免疫組織化學等組織檢測的方法檢測其HER2的水平，但卻可以通過檢測血清的方法來檢測到HER2的水平[2]。對比檢測組織中HER2的水平，檢測血清中HER2的水平不僅對病人創(chuàng)傷性小而且可以定量的檢測出HER2的水平。Fehm等[3]檢測了52位早期乳腺癌的患者血清中HER2的水平發(fā)現(xiàn)血清中HER2水平的升高暗示著病人病情有著隱匿性或顯性的轉(zhuǎn)移且與第一期的治療效果降低有關(guān)。從1989到2007年的一項研究共收集了初期乳腺癌病人883例，通過檢測其血清HER2的水平發(fā)現(xiàn)HER2在血清中的水平不僅與腫瘤的惡性程度及類固醇受體相關(guān)而且可以用來預(yù)測患者的無病生存期、總生存期和對治療的反應(yīng)程度[4]。

雖然有很多研究早期乳腺癌患者血清中HER2水平的實驗，但近期更多的實驗則側(cè)重于轉(zhuǎn)移性乳腺癌病人血清中HER2水平與臨床結(jié)果關(guān)系的研究。Hayes[5]和Fehm[6]分別在2001年和2004年證明了血清中HER2的水平可以作為轉(zhuǎn)移性乳腺癌病人臨床預(yù)后的一個獨立的因素。研究中顯示若患者基礎(chǔ)血清HER2水平超過15 μg/L則此病人總生存期和無進展生存期都將縮短，而在治療過程中HER2水平是否下降與治療效果也密切相關(guān)。

對比早期和轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者發(fā)現(xiàn)，平均18.5%早期乳腺癌患者和43%轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者血清中HER2的水平升高[7]。平均早期乳腺癌患者HER2的值為(11.9±1.6)μg/L而轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者HER2的水平為(30.5±30.8)μg/L[8]。但無論是早期還是轉(zhuǎn)移性乳腺癌其血清中HER2的水平均與臨床結(jié)果密切相關(guān)。

1.2接受化療及靶向治療的HER2病理結(jié)果為陽性的乳腺癌患者血清HER2的水平用于治療乳腺癌患者的藥物有很多種，但現(xiàn)如今在臨床上用于治療HER2高表達的乳腺癌患者出現(xiàn)了一些針對性的藥物。例如，赫賽汀是典型的針對HER2的單克隆抗體，其與HER2的胞外區(qū)域段結(jié)合可以抑制絲裂原活化蛋白激酶途徑、磷酸激酶途徑及Akt信號通路從而促進細胞的凋亡抑制細胞的增殖,與胞外段結(jié)合后可抑制HER2胞外段脫落至循環(huán)系統(tǒng)從而降低乳腺癌的侵襲性。而對于之前接受過阿霉素、紫杉醇及赫賽汀治療的病人若治療效果不佳或者產(chǎn)生了耐藥經(jīng)美國藥品監(jiān)督管理局(FDA)批準則可用拉帕替尼結(jié)合卡培他濱來治療[9]。

對138例只接受拉帕替尼單藥物治療的HER2陽性的轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者進行研究。在其治療前收集一次血清和治療后每隔4周收集1次血清共收集5次。在開始治療的第8周、第12周及之后每隔12周用實體瘤療效的評價標準對其進行評價。結(jié)果顯示治療前血清中HER2的基礎(chǔ)值是否超過15 μg/L和總反應(yīng)率相關(guān)，而在治療過程中HER2水平變化是否超過20%則與總反應(yīng)率及無病生存期相關(guān)[10]。另一對101個接受拉帕替尼治療患者的相似的研究發(fā)現(xiàn)，基礎(chǔ)血清HER2水平是否大于15 μg/L和治療過程中血清HER2水平上升或下降超過20%可以預(yù)測此病人對拉帕替尼治療的反應(yīng)程度[11]。而在對用赫賽汀治療的患者血清HER2水平的研究中也發(fā)現(xiàn)血清HER2水平與臨床指標密切相關(guān)。例如，Kostler等[12]和Esteva等[13]等發(fā)現(xiàn)血清中HER2的變化與無進展生存期有關(guān)。Fornier等[14]則發(fā)現(xiàn)血清HER2水平與治療效果和臨床預(yù)后相關(guān)。在一個將這2種藥物對比的研究中發(fā)現(xiàn)在赫賽汀治療組中有44%的病人血清HER2水平下降超過20%，6%的病人HER2水平上升超過20%。在拉帕替尼治療組中有24%的病人血清HER2下降超過20%有41%的病人血清HER2的水平上升超過20%[11]。由此實驗可推出在臨床中對于治療HER2陽性的病人赫賽汀的效果要強于拉帕替尼但拉帕替尼對赫賽汀耐藥的病人則起著顯著的作用。

除了上述2種靶向藥物外，激素治療也廣泛應(yīng)用于ER陽性的乳腺癌病人中2002的一項研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)分泌治療對ER陽性且HER2陽性的病人治療的反應(yīng)性比ER陽性且HER2陰性的病人要差[15]。且血清中HER2水平越高其治療效果越差[16]。在乳腺癌患者接受蒽環(huán)類藥物為主的治療或者紫杉醇為主的治療，血清HER2的基礎(chǔ)水平也可用來預(yù)測臨床的預(yù)后[17-18]。

1.3監(jiān)測血清HER2水平用來早期篩查及監(jiān)測癌癥的復(fù)發(fā)乳腺癌術(shù)后的患者無法通過組織學的方法對其HER2水平進行監(jiān)測，但可通過不斷檢測患者血清中HER2的水平對患者進行監(jiān)測。通過監(jiān)測發(fā)現(xiàn)血清中HER2的水平可以早于臨床診斷來預(yù)測患者癌癥的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。在1996年的通過Molina等[19]的實驗發(fā)現(xiàn)監(jiān)測HER2、CEA、和CA125可比臨床診斷時間提前4~5個月的時間來預(yù)測患者乳腺癌的復(fù)發(fā)。另一項研究則發(fā)現(xiàn)HER2和P53的變化可以提前150 d診斷患者是否患有乳腺癌[20]。而在2002年的一項研究中顯示通過單獨的檢測血清中HER2的水平則可比臨床診斷提前3~6個月的時間預(yù)測癌癥的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移[3]。且有研究證明有25%~50%的轉(zhuǎn)移性乳腺癌的病人之前用免疫組織化學的方法檢測其組織HER2的值為陰性，但通過監(jiān)測血清中的HER2水平發(fā)現(xiàn)HER2可轉(zhuǎn)為陽性。

2檢測血清HER2的方法

2.1用酶聯(lián)免疫吸附的方法檢測血清中HER2的水平現(xiàn)如今酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)是最常用的用于檢測血清中HER2值的方法，但由于其捕獲抗體及檢測抗體的不同則分為很多種。比如在Carney[7]的實驗中用到了的捕獲抗體為NB-3檢測抗體為TA-1；中國科技大學研制的試劑盒則包括A18和A21兩種抗體[21]；在一個檢測了158名早期乳腺癌血清HER2的實驗中用的ELISA試劑盒所包含的單克隆抗體分別為6G10和SV-2-61[22]。而且不同的試劑盒其選定的臨界值不同其中有以30 μg/L、20 μg/L、15 μg/L、10 μg/L、1900 HNV/mL等為臨界值。但在這么多的ELISA試劑盒中只有2種被美國FDA批準可應(yīng)用于臨床檢測血清HER2的水平，它們分別是Bayer immumol automated 和Oncogene Sciences Cambridge.MA試劑盒[23-25]。

2.2其他用于檢測血清HER2的方法Hayashi等[26]用2種方法來檢測血清中HER2的水平，一種是酶聯(lián)免疫法另一種為化學發(fā)光免疫分析法，這個實驗包括了59位接受赫賽汀治療的轉(zhuǎn)移性乳腺癌病人和137個未接受赫賽汀治療的轉(zhuǎn)移性乳腺癌病人。在檢測接受赫賽汀治療的病人中化學發(fā)光免疫分析法的靈敏度更高，但若用于檢測未接受赫賽汀治療的病人中此兩種方法則沒有區(qū)別。

現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)酶聯(lián)免疫吸附實驗及其他的免疫學測定方法的靈敏度并不能滿足對患者低濃度的標記抗原測定的需要。在2011年的報告中顯示，癌癥患者的疾病進展可以通過快速靈敏的檢測方法對血清中的腫瘤標志物進行監(jiān)控。這里所指的方法則為用高度敏感的壓電微懸梁臂傳感器(PEMS)檢測血清中低濃度的生物標記物。也首次被應(yīng)用到檢測血清中HER2的水平，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，抗HER2壓電微懸梁臂傳感器能夠測出重組和天然的大于等于2 μg/L的HER2的值[27]。同時也發(fā)現(xiàn)以FATT為基礎(chǔ)的方法也可以檢測出極低濃度的生物標記物[28]。

3結(jié)論與展望

通過對近期文獻的關(guān)注發(fā)現(xiàn)HER2基礎(chǔ)值是否大于15 μg/L和治療過程中變化是否超過20%與臨床結(jié)果有著明顯的相關(guān)性。綜合來說，基礎(chǔ)血清HER2的水平與總反應(yīng)率有關(guān)，而HER2水平變化是否大于20%則與總體反應(yīng)率和無進展生存期相關(guān)。經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)有30%~90%的轉(zhuǎn)移性乳腺癌病人血清HER2水平升高。但現(xiàn)在廣泛應(yīng)用于臨床檢測HER2的方法還是免疫組織化學和熒光原位雜交的方法，雖然這2種方法的準確性較高，但其無法用來隨時監(jiān)測患者的病情而且具有一定的創(chuàng)傷性，所以通過檢測血清中HER2的水平來判斷患者的病情將是未來臨床的發(fā)展趨勢。

大部分的實驗都是研究乳腺癌患者與血清中HER2水平變化的關(guān)系，但血清中HER2水平的升高并不僅僅在乳腺癌的患者中。通過檢測150例胃癌患者血清HER2實驗的研究中發(fā)現(xiàn)HER2在血清中的濃度范圍為4.8~180 μg/L，證實HER2對于胃癌患者來說也是一個潛在的生物指標[29]。除此之外，在非小細胞肺癌、大腸癌、口腔癌、卵巢癌、前列腺癌和頭頸部癌癥的病人中發(fā)現(xiàn)其血清中可溶性HER2的水平要比正常人高，且HER2的升高均與臨床預(yù)后有著或多或少的相關(guān)性[30-32]。血清中HER2的水平不僅僅在癌癥患者中有其特殊的意義，研究證實在心力衰竭的病人中血清HER2的水平不僅高表達，且與臨床預(yù)后呈負相關(guān)[33]。在一項納入了57位健康人、41位乳腺癌早期病變的病人和30位乳腺癌的病人的研究中發(fā)現(xiàn)可溶性的HER2不僅僅存在于病人血清中，還存在于病人唾液中而且乳腺癌病人唾液中可溶性的HER2水平遠遠超過了正常人及乳腺早期病變病人唾液中HER2的水平。這個研究結(jié)果在2013年得到進一步的證實，并進一步發(fā)現(xiàn)唾液中HER2水平與血清中HER2的水平有著同等的臨床意義[34]。

我國每年新發(fā)的腫瘤病人超過200萬人，其中胃癌、肺癌及乳腺癌占全部腫瘤的近30%，其中有近60萬腫瘤病人適于血清HER2的檢測。然而，F(xiàn)DA批準的臨床檢測血清HER2的試劑盒非常昂貴，且無法排除血清成分對檢測結(jié)果的干擾；而國內(nèi)尚無同類試劑盒，因此，研制出成本低且靈敏度高的血清HER2檢測試劑盒既有重大臨床意義，也是一項具有挑戰(zhàn)性的工作。

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(收稿日期:2015-03-18)

通信作者：胡世蓮，主任醫(yī)師，教授，博士生導(dǎo)師，Email:hushilian@126.com

作者簡介：王璐，碩士在讀，Email：wanglu9065@163.com

基金項目：安徽省科技計劃項目(1303063017,1301042094,1402052075)

中圖分類號：R446

文獻標識碼：A

DOI:10.3969/J.issn.1672-6790.2015.03.039