肖 洋 陳劍鋒 胡惠敏

SHH在乳腺癌組織中的表達(dá)及臨床意義

肖 洋1陳劍鋒2胡惠敏3

目的探討SHH蛋白在乳腺及乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中的表達(dá)及與乳腺癌組織浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的關(guān)系。方法65例浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中，臨床TNM分期Ⅰ、Ⅱ期58例，Ⅲ、Ⅳ期7例。另外取腫瘤遠(yuǎn)處正常乳腺組織或非癌組織（乳腺纖維腺瘤或腺病等）30例。用免疫組化方法檢測(cè)石蠟包埋的乳腺非癌組織及乳腺癌組織中的SHH和ER、PR、HER2的蛋白表達(dá)。所有患者均經(jīng)外科手術(shù)治療，病理診斷明確，術(shù)前未經(jīng)放、化療。結(jié)果SHH在乳腺癌組織中高表達(dá)（P＜0.05）；SHH同時(shí)還與臨床TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（P＜0.05）。SHH和HER2蛋白表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.370，P=0.003）。結(jié)論SHH可能是預(yù)測(cè)乳腺癌組織浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移有用的指標(biāo)；聯(lián)合檢測(cè)SHH和HER2有可能作為判斷乳腺癌預(yù)后、篩選高危轉(zhuǎn)移患者的有效指標(biāo)并有可能用于指導(dǎo)乳腺癌的個(gè)體化治療。

乳腺癌；SHH；HER2

Hh（Hedgehog）信號(hào)通路已知在許多惡性腫瘤中起著至關(guān)重要的作用，但其主要成員Sonic Hedgehog（SHH）在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中的表達(dá)及其與其臨床病理參數(shù)及ER、PE、HER2蛋白表達(dá)之間的關(guān)系研究較少，本組實(shí)驗(yàn)試圖探討。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

收集蘇州市立醫(yī)院手術(shù)切除乳腺癌標(biāo)本65例，取自病理科2001年1月～2012年12月的存檔蠟塊，病理診斷明確，均為浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌住院患者，有詳細(xì)的臨床資料，年齡27～84歲，中位年齡56.54歲；取同期患者乳腺癌旁正常組織或乳腺纖維腺瘤或腺病30例為對(duì)照組織。全部患者術(shù)前均未接受放療或化療。

1.2 方法

采用免疫組化MaxEnvision染色方法，SHH抗體購(gòu)自Abcam公司，采用1：200比例稀釋，用檸檬酸鹽緩沖液修復(fù)，HER2為兔抗人多克隆抗體與ER、PR及二抗等一起購(gòu)自福州邁新公司。常規(guī)石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片。實(shí)驗(yàn)中以PBS液代替一抗作為陰性對(duì)照；以試劑公司提供的陽(yáng)性對(duì)照片作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定

采用光學(xué)顯微鏡觀察。SHH陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞漿，HER2陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞膜；ER、PR陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞核，呈現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性信號(hào)，結(jié)果判定方法按照Hong KD［1］方法。HER2陽(yáng)性表達(dá)于乳腺癌腫瘤細(xì)胞膜，呈黃褐色細(xì)顆粒狀，其評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)按照《乳腺癌HER2檢測(cè)指南》的標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分。

1.4 數(shù)據(jù)分析

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，定性資料的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用χ2檢驗(yàn)；采用Spearman等級(jí)相關(guān)性分析SHH和HER2蛋白表達(dá)的相互關(guān)系，以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SHH在乳腺非癌、乳腺癌組織及ER、PR、HER2在乳腺癌組織中的表達(dá)

30例非癌乳腺組織中SHH蛋白的表達(dá)率為6.7%（2/30）且均為弱陽(yáng)性、SHH在乳腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為47.7%（31/65）；HER2在65例乳腺癌中的陽(yáng)性表達(dá)率為30.8%（20/65）；ER的表達(dá)率為50.8%（33/65）；PR的表達(dá)率為41.5%（27/65）。SHH蛋白的表達(dá)在乳腺癌組織和非癌乳腺組織中的陽(yáng)性表達(dá)情況間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），在乳腺癌中高表達(dá)。

2.2 SHH、HER2蛋白的表達(dá)與乳腺癌組織臨床病理特征的關(guān)系

在65例乳腺癌組織中，SHH蛋白的表達(dá)與患者年齡、組織學(xué)分級(jí)、ER、PR狀態(tài)無(wú)關(guān)（P＞0.05），但與腫瘤臨床TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（χ2=7.153、18.131，P＜0.05）；HER2的表達(dá)僅與乳腺癌組織淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（χ2=4.815，P＜0.05）。

2.3 乳腺癌組織中SHH和HER2蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析

Spearman等級(jí)相關(guān)分析結(jié)果顯示SHH和HER2蛋白表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.370，P=0.003）.

3 討論

Sonic Hedgehog（SHh）在脊椎動(dòng)物器官形成以及某些癌癥的發(fā)展中的扮演著重要的角色，其激活被認(rèn)為與多種癌的許多侵襲性臨床行為相關(guān)聯(lián)［2］。Hedgehog信號(hào)傳導(dǎo)通路下游的細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子GLI1的過度表達(dá)，調(diào)控惡性腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移過程［3］。這是Hedgehog信號(hào)通路活化目前比較公認(rèn)的標(biāo)志［4］，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為Hedgehog信號(hào)通路激活的機(jī)制之一是由細(xì)胞外配體蛋白如SHH與受體PTCH結(jié)合，誘導(dǎo)原癌基因SMO的激活從而引起Hedgehog信號(hào)通路的激活［5］，這已在小細(xì)胞肺癌、消化道腫瘤、胰腺癌、肝癌和腦惡性腫瘤中得到證實(shí)［6］。本組實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：SHH蛋白的表達(dá)在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中的表達(dá)高于乳腺非癌（包括癌旁正常乳腺組織及乳腺纖維腺瘤或乳腺?。cWei Cui［7］的研究結(jié)果相一致，提示SHH在乳腺癌的早期發(fā)生發(fā)展中起著重要作用，可能是乳腺癌發(fā)生的早期事件。進(jìn)一步分析SHH蛋白表達(dá)與乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系：SHH蛋白的表達(dá)與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤TNM分期密切相關(guān)并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但其陽(yáng)性表達(dá)恰恰是淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移組多于轉(zhuǎn)移組；TNM分期的Ⅰ、Ⅱ期多于Ⅲ、Ⅳ期，亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，我們推測(cè)：SHH在早期乳腺癌細(xì)胞形成階段起重要作用，而在腫瘤的進(jìn)一步發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移的調(diào)控中受到抑制。然而，這一發(fā)現(xiàn)的意義仍有待澄清，需要進(jìn)行進(jìn)一步的研究來解決這個(gè)問題。本實(shí)驗(yàn)另一結(jié)果：SHH蛋白表達(dá)的免疫組化結(jié)果在與乳腺癌常規(guī)檢測(cè)的ER、PE、HER2蛋白表達(dá)的Spearman等級(jí)相關(guān)分析時(shí)發(fā)現(xiàn)：SHH和HER2蛋白表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.370，P=0.003），而與雌、孕激素受體無(wú)關(guān)。HER2/erbB2屬Her/erbB家族，受體二聚體化是Her/erbB家族活化的重要方式，胞外信號(hào)誘導(dǎo)二聚體形成，活化胞內(nèi)段酪氨酸激酶，使自身酪氨酸位點(diǎn)磷酸化，并通過募集各種接頭蛋白，依次激活下游信號(hào)通路并參與了腫瘤細(xì)胞的增殖、分化、遷移、黏附、抗凋亡和細(xì)胞轉(zhuǎn)化［8］。SHH與HER2的相關(guān)性提示我們：檢測(cè)SHH是否有可能輔助HER2更進(jìn)一步作為判斷乳腺癌預(yù)后、篩選高危轉(zhuǎn)移患者的有效指標(biāo)并有可能利用Hedgehog信號(hào)通路的激活而用于指導(dǎo)乳腺癌的個(gè)體化治療。

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如何撰寫論文的“序言”

簡(jiǎn)要介紹有關(guān)本課題研究的一般情況，包括動(dòng)機(jī)、過去研究的情況、方法、目的和所獲得的主要成果或特點(diǎn)。這段文字不宜超過100～200字。

Expression and Clinical Significance of SHH in Breast Cancer

XIAO Yang1CHEN Jianfeng2HU Huimin31 Health College of Suzhou，Suzhou 215009，China，2 Municipal Hospital of Suzhou，Suzhou 215008，China，3 Hospital of Xiangcheng District，Suzhou 215000，China

ObjectiveTo investigate the SHH protein expression in normal breast and breast cancer tissues and study the correlation between SHH protein expression in breast cancer tissues and tumor invasion and metastasis.MethodsImmunohistochemistry was used to detect the SHH，ER，PR and HER2 protein expression in paraffin-embedded normal breast tissues（only SHH）and breast cancer tissue samples，sixty-five paraffin-embedded cancer tissue samples were selected from primary breast cancer，thirty-nine patients had lymph node metastasis，fifty-eight patients were of TNM stageⅠtoⅡstage，and 7 were of Ⅲ toⅣ. Another 30 paraffin-embedded tissue blocks of normal breast were selected as the control group. All patients with breast cancer were treated surgically and diagnosed histologically，without preoperative chemotherapy or radiotherapy.ResultsSHH protein expression in breast cancer was significantly higher than in normal breast，and there was a close relationship between SHH，HER2 protein expression with the degree oflymph node metastasis（P＜0.05），SHH protein expression was alsoclose relationship between TNM stage and lymph node metastasis（P＜0.05）. The expression of SHH was positively correlated to that of HER2 in breast cancer（r=0.0.370，P=0.003）.ConclusionSHH activation is correlated with a more aggressive clinical behavior in breast carcinomas. The expression of SHH and HER2 protein combined detection can provide a reference value in breast cancer metastasis，patient’s condition development and prognosis.

Breast cancer，SHH，HER2

R361

A

1674-9316（2015）31-0167-02

10.3969/j.issn.1674-9316.2015.31.124

1 215009 蘇州衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院

2 215008 蘇州市立醫(yī)院

3 215000 蘇州相城區(qū)醫(yī)院

陳劍鋒，Email：chen-l-075@163.com

蘇州市科技局項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：sysd2012070）