黃泳立 田華琴 李宏良 楊耀林 梁貴文 陳學(xué)彰 黃小青 王 斌 王艷杰

(佛山市中醫(yī)院腫瘤科，廣東 佛山 528000)

細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷(CIK)細(xì)胞是一種新型免疫活性細(xì)胞，最早是 Schmidt-Wolf等〔1〕研究小組研制，通過(guò)干擾素(IFN)-γ，CD3單抗、白細(xì)胞介素(IL)-2誘導(dǎo)出CIK細(xì)胞進(jìn)行抗腫瘤活性研究，發(fā)現(xiàn)在帶有彌漫性組織淋巴瘤細(xì)胞(SUDHL)-4和彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞(OCI-Ly)8淋巴瘤細(xì)胞株的C．B-17重癥聯(lián)合免疫缺陷(SCID)小鼠上使用CIK細(xì)胞治療后，小鼠可以存活。本文對(duì)CIK細(xì)胞免疫療法的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1 CIK細(xì)胞療法的原理

惡性腫瘤細(xì)胞能在細(xì)胞毒素劑下生存的能力是治療惡性腫瘤的主要障礙。免疫效應(yīng)細(xì)胞，如淋巴因子激活的殺傷(LAK)細(xì)胞〔2，3〕，腫瘤浸潤(rùn)淋巴(TIL)細(xì)胞〔4〕或 CIK 細(xì)胞〔1，5〕，可能適合殺傷對(duì)化療抵抗的殘留細(xì)胞。

CIK細(xì)胞同時(shí)表達(dá)CD3+和CD56+兩種膜蛋白分子，故又被稱為自然殺傷(NK)細(xì)胞樣T淋巴細(xì)胞，兼具有T淋巴細(xì)胞強(qiáng)大的抗瘤活性和NK細(xì)胞的非主要組織相容性復(fù)合體(MHC)限制性殺瘤優(yōu)點(diǎn)。因此，應(yīng)用CIK細(xì)胞被認(rèn)為是新一代抗腫瘤過(guò)繼細(xì)胞免疫治療的首選方案?，F(xiàn)在這種潛在的抗腫瘤效應(yīng)已經(jīng)通過(guò)動(dòng)物模式實(shí)驗(yàn)及臨床試驗(yàn)得到很好的證實(shí)〔6〕。CIK細(xì)胞能夠通過(guò)三種途徑殺滅腫瘤細(xì)胞:①CIK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞具有直接殺傷能力:CIK細(xì)胞從形態(tài)學(xué)上與大的淋巴顆粒狀細(xì)胞相似。表現(xiàn)出具有豐富的細(xì)胞質(zhì)和包含大量粒酶和生孔素的顆?！?，8〕。Hock等〔9〕通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明當(dāng) T 細(xì)胞缺失后，CIK細(xì)胞將失去抗腫瘤活性，說(shuō)明CIK細(xì)胞的殺傷性是通過(guò)T細(xì)胞來(lái)實(shí)現(xiàn)的。已有研究證實(shí)這些刺激和擴(kuò)增的T細(xì)胞可能通過(guò)細(xì)胞與細(xì)胞相互為聯(lián)系而識(shí)別腫瘤標(biāo)志，因通過(guò)抗體阻滯CD54、CD11c和NKG2D后(細(xì)胞與細(xì)胞的聯(lián)系通道)后，將會(huì)顯著減弱細(xì)胞因子毒性〔10〕。但利用抗體遮蓋MHC或者T細(xì)胞反應(yīng)性(TCR)時(shí)并不影響細(xì)胞因子毒性，說(shuō)明這是一種非MHC限制性、非TCR依賴性機(jī)制〔11〕。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)這種抗腫瘤活性是通過(guò)NKG2D-NKG2D配位基相互作用來(lái)介導(dǎo)，釋放以穿孔素為基礎(chǔ)的細(xì)胞毒性顆粒，從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞裂解〔10，12〕，研究證實(shí)表達(dá)T細(xì)胞標(biāo)志和NK細(xì)胞受體NKG2D標(biāo)志的CIK細(xì)胞，它們能夠識(shí)別并殺滅那些表達(dá)MHC相關(guān)Ⅰ類多肽(MIC)A和MICB，而MICA和MICB是一種在腫瘤微環(huán)境和病毒感染后表達(dá)的與應(yīng)激相關(guān)的配體〔13〕。②CIK細(xì)胞的抗腫瘤效應(yīng)的其中一個(gè)途徑是通過(guò)輔助T細(xì)胞(Th1)細(xì)胞因子釋放IFN-γ、腫瘤壞死因子(TNF)-α和白細(xì)胞介素(IL)-2等。這些因子不僅對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)有直接抑制作用，還可通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體免疫系統(tǒng)反應(yīng)性間接殺傷腫瘤細(xì)胞〔14〕。TNF-α是一種能夠刺激免疫應(yīng)答的致炎細(xì)胞因子，同時(shí)也是急性期蛋白、黏附分子和廣泛的免疫介質(zhì)劑，與包括化學(xué)增活素和其他如INF-γ在內(nèi)的細(xì)胞因子一起具有協(xié)同作用。而IFN-γ是一種細(xì)胞因子，包含多重抗腫瘤效應(yīng)，如直接抑制腫瘤生長(zhǎng)，阻滯血管生成或刺激巨噬細(xì)胞。同時(shí)能夠誘導(dǎo)MHC-Ⅱ類復(fù)合體的表達(dá)，并促進(jìn)抗原提呈。而MHC-Ⅱ類分子能夠增加具有對(duì)抗免疫效應(yīng)細(xì)胞的腫瘤細(xì)胞的敏感性〔15〕。③誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡:Franceschetti等〔16〕研究發(fā)現(xiàn)CIK細(xì)胞表達(dá)Ⅱ型跨膜糖蛋白(FasL)。一方面增強(qiáng)了其對(duì)FasL(+)腫瘤細(xì)胞引發(fā)的Ⅰ型跨膜糖蛋白(Fas)-FasL凋亡的抵抗性，還可通過(guò)對(duì)Fas(+)腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡使其發(fā)揮慢性殺傷作用，保證抗腫瘤活性的長(zhǎng)期持久〔17〕。

2 CIK細(xì)胞的療效研究

Schmidt-Wolf等〔1〕研制的 CIK細(xì)胞在治療 SU-DHL-4和OCI-Ly8淋巴瘤細(xì)胞株的C．B-17 SCID小鼠上獲得成功。研究者通過(guò)種植SU-DHL-4和OCI-Ly8淋巴瘤細(xì)胞株在SCID小鼠上，成功模擬了人類淋巴瘤模型，并通過(guò)這個(gè)模型評(píng)價(jià)CIK細(xì)胞的療效，發(fā)現(xiàn)CIK細(xì)胞能夠殺滅淋巴瘤。而Lu等〔18〕發(fā)現(xiàn)LAK細(xì)胞在SCID老鼠-人類淋巴瘤模型上無(wú)效。因此，在與LAK細(xì)胞對(duì)比上，CIK細(xì)胞具有更強(qiáng)的細(xì)胞殺傷性及增殖率高的特點(diǎn)〔19〕，是新一代抗腫瘤過(guò)繼細(xì)胞免疫治療的首選方案。Hongeng等〔20〕通過(guò)對(duì)比兒童腫瘤患者自身培養(yǎng)的CIK細(xì)胞與外周血單核細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞毒性試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，CIK細(xì)胞的溶解活性更強(qiáng)(45．5% ～64．5%vs 8% ～12%)。

CIK細(xì)胞療法具有廣譜的抗瘤優(yōu)點(diǎn)，對(duì)常見(jiàn)的惡性腫瘤包括肝癌、肺癌、胃癌、腎癌、淋巴瘤及白血病等均有強(qiáng)大的抗癌作用。周啟明等〔21〕微創(chuàng)治療(血管介入及射頻消融)聯(lián)合CIK細(xì)胞療法治療肝癌患者，數(shù)據(jù)顯示微創(chuàng)治療聯(lián)合CIK細(xì)胞療法能夠明顯減低 1、1．5 年的復(fù)發(fā)率(8．89%vs 30%，15．56%vs 40%，P＜0．05)。而進(jìn)一步研究〔22〕表明CIK細(xì)胞輔助免疫療法可以有效提高原發(fā)性肝癌患者經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈化學(xué)栓塞術(shù)(TACE)術(shù)后的無(wú)進(jìn)展生存期(PFS)及總生存期(OS)(mPFS 11 vs 5 個(gè)月，mOS 31vs 10 個(gè)月，P ＜0．05)。Hui等〔23〕研究顯示，接受CIK細(xì)胞輔助免疫治療的術(shù)后肝癌患者的1、3及5年生存率明顯高于不接受治療的對(duì)照組，但接受6個(gè)周期CIK細(xì)胞療法比3個(gè)周期治療并未顯示出更好的療效。Wu等〔24〕一個(gè)前瞻性隨機(jī)對(duì)照研究表明，化療聯(lián)合CIK細(xì)胞療法治療晚期肺癌患者比單純化療，從疾病控制率(DCR)(89．7%vs．65．5%，P=0．030)、PFS 及 OS(mPFS 6．65 vs 4．67 個(gè)月 mOS 15 vs 11 個(gè)月 P＜0．05)上比較均有提高。Su等〔25〕收集了16例術(shù)后復(fù)發(fā)的腎癌患者，均接受CIK細(xì)胞治療。結(jié)果表明3例完全緩解(CR)，1例部分緩解(PR)，6例疾病穩(wěn)定(SD)。結(jié)果提示CIK細(xì)胞過(guò)繼免疫治療安全有效，能增強(qiáng)轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的腎癌患者免疫功能。

Shi等〔26〕收集了151例已行胃切除術(shù)的Ⅲ/Ⅳ胃癌患者，隨機(jī)分為免疫治療組和對(duì)照組(不使用免疫療法)。研究發(fā)現(xiàn)免疫治療組的5年無(wú)疾病生存率比對(duì)照組高(28．3%vs 10．4%，P=0．044)。對(duì)于伴有腸型腫瘤的患者，5年總生存率及5年無(wú)疾病生存率較對(duì)照組提高(PFS 42．4%vs 15．7%，OS 46．8%vs 31．4%，P ＜0．05)。對(duì)于免疫治療組，在第一次 CIK細(xì)胞治療后的 1 w，CD3(+)、CD4(+)、CD4(+)/CD8(+)比率的水平分別增加了50．8%，26．5%和0．9%。2個(gè)月內(nèi)逐漸降到基線水平，分別為62．6%，35．0%和1．4%。而在3個(gè)周期的免疫治療后，免疫功能在2個(gè)月內(nèi)能維持在高水平，分別達(dá)到(60．7 ±8．2)%，(34．2 ±7．1)%，(1．3 ±0．3)%。結(jié)論認(rèn)為使用CIK細(xì)胞療法作為輔助免疫治療可以延長(zhǎng)晚期胃癌患者的無(wú)疾病生存期(DFS)，并顯著地提高伴有腸內(nèi)腫瘤型患者的OS。也許腸內(nèi)腫瘤型是CIK細(xì)胞免疫療法的其中一個(gè)重要適應(yīng)證。

Hontscha等〔27〕回顧性分析了11個(gè)有關(guān)CIK細(xì)胞療法的臨床研究共426例患者，包含肝癌、胃癌、霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤等惡性腫瘤。其中10個(gè)研究使用了自體CIK細(xì)胞回輸治療方法，一共回輸?shù)募?xì)胞數(shù)量為21．9×109/L～5．2×1010/L，每次回輸7．2×109/L～2．1×1010/L。其中 389例患者的療效評(píng)價(jià)如下:24例CR、27例PR、40例輕度緩解(MR)、161例SD和129例疾病進(jìn)展(PD)，另有3例只描述了腫瘤體積縮小，相對(duì)危險(xiǎn)度(RR)率23．7%，DCR率65．6%，而不良反應(yīng)報(bào)道不多。Pievani等〔28〕在研究CIK細(xì)胞療法治療B細(xì)胞淋巴瘤時(shí)發(fā)現(xiàn)，利妥昔單抗及GA101(抗CD20單抗藥物)可以分別提高CIK細(xì)胞15%和35%的細(xì)胞毒性。提示分子靶向藥物聯(lián)合CIK細(xì)胞療法治療惡性腫瘤可能獲得更好的療效。Tettamanti等〔29〕研究中誘導(dǎo)一種CD123嵌合抗原抗體的CIK細(xì)胞能有效地殺傷CD123+細(xì)胞和急性髓系白血病(AML)細(xì)胞，提示抗CD123嵌合抗原抗體能夠有效地增強(qiáng)CIK細(xì)胞對(duì)AML細(xì)胞的殺傷性。這種治療手段融合了CIK細(xì)胞和嵌合抗原抗體，對(duì)AML的治療及CIK的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供了寶貴經(jīng)驗(yàn)。

3 CIK細(xì)胞療法應(yīng)用的展望

CIK細(xì)胞具有增殖快、殺瘤活性強(qiáng)、殺瘤譜廣的優(yōu)點(diǎn)，大量的循證醫(yī)學(xué)證據(jù)表明CIK細(xì)胞療法可以多次反復(fù)使用，對(duì)殘留、轉(zhuǎn)移、耐藥的腫瘤有很好的緩解和控制作用，對(duì)化療耐藥的腫瘤細(xì)胞株亦有殺傷作用，特別適用于術(shù)后或疾病緩解后殘留的腫瘤灶，疾病控制率達(dá)到65．6% ～89．7%，能延長(zhǎng) PFS及OS，可以提高患者的生活質(zhì)量及機(jī)體的免疫功能，同時(shí)不出現(xiàn)嚴(yán)重的不良反應(yīng)。

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