金薇

分析微柱凝膠技術(shù)配血的影響因素

金薇

目的研究分析微柱凝膠技術(shù)配血的影響因素。方法血辮中的樣本, 于患者未抗凝血樣進(jìn)行交叉配血, 探討離心速度對(duì)配血影響時(shí), 選用不同的離心機(jī)來進(jìn)行探討；探討新生兒抗體影響時(shí), 采取選擇和新生兒血型不同血液進(jìn)行交叉配血。結(jié)果采用血辮中的標(biāo)本, 由于其未能與抗凝劑充分混合, 假陽性率為86.67％(52/60)；患者血樣不抗凝, 配血假陽性結(jié)果為90.63％(87/96)；如果孵育時(shí)間由15 min縮短至5 min, 陽性標(biāo)本的漏檢率為66.67％(8/12)；使用不配套的離心機(jī)配血結(jié)果假陽性率為23.81％(5/21), 假陰性率為25.00％(3/12)；有21.33％(32/150)的新生兒血清中抗體形成不完全, 采用異型血交配, 可呈現(xiàn)出“假配合”結(jié)果。結(jié)論配血時(shí), 如果對(duì)孵育時(shí)間、離心力等進(jìn)行調(diào)整, 會(huì)造成假陽性、假陰性等結(jié)果。這是由于血清內(nèi)的纖維蛋白絲沒有完全的被消耗, 也可能是因?yàn)榧t細(xì)胞凝集導(dǎo)致的, 讓患者的血液和供血者血液發(fā)生了不抗凝情況, 導(dǎo)致結(jié)果假陰或假陽, 給臨床配血帶來了影響。約有21.33％的新生兒血型抗體不完全, 因此臨床為新生兒進(jìn)行輸血需要對(duì)其血型進(jìn)行鑒定, 確保其安全性, 單純的從配血結(jié)果來進(jìn)行判斷是不足夠的。

微柱凝膠技術(shù)；交叉配血；影響因素

本科采取鹽水配血法來進(jìn)行交叉配血, 但是只能對(duì)血清的完全抗體進(jìn)行檢測(cè)；后來有試驗(yàn)了酶法以及抗人球法等方法, 從2010年開始選擇抗人球蛋白微柱凝膠技術(shù)進(jìn)行配血。該方法臨床中的特點(diǎn)是特異性高、靈敏度好, 使用便捷, 有較長(zhǎng)的保存期[1］, 其他的一些方法也能夠?qū)⒀宓牟煌耆贵w檢測(cè)出來, 但是仍然沒有微柱凝膠技術(shù)優(yōu)秀。在本院長(zhǎng)期的試驗(yàn)下獲得了一些該方法的使用經(jīng)驗(yàn), 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 試劑來源：(西班牙)戴安娜微柱凝膠8孔抗人球蛋白卡和血型卡、(美)強(qiáng)生Ortho6孔柱凝集卡。樣本來源：本院血站的血樣共60份, 產(chǎn)科取新生兒臍血血樣150份, 本科室對(duì)不規(guī)則抗體陽性標(biāo)本和常規(guī)配血標(biāo)本分別采集了12份和96份。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 ①實(shí)驗(yàn)原理：將獻(xiàn)血者的紅細(xì)胞與患者的血清按比例和微柱凝膠混合, 陰性結(jié)果下, 不凝集的紅細(xì)胞會(huì)沉入底部。若是患者的血清內(nèi)存在完全抗體, 對(duì)其進(jìn)行37℃孵育能夠讓紅細(xì)胞表面的抗原和完全抗體凝結(jié), 進(jìn)行離心處理, 無法讓其通過微柱凝膠篩, 所以結(jié)果就表現(xiàn)為陽性,陽性的強(qiáng)度是和微柱凝膠內(nèi)的顆粒分布情況有關(guān)系。不完全抗體經(jīng)過孵育會(huì)產(chǎn)生凝集顆粒, 嚴(yán)重的還會(huì)出現(xiàn)凝塊。②操作：按照試劑說明書嚴(yán)格操作, 首先配制3％(V/V)紅細(xì)胞懸液。做血型檢查只需加10 μL3％(V/V)紅細(xì)胞懸液直接離心。如果配血需要先加10 μL紅細(xì)胞懸液, 再加40 μL血清,孵育15 min后離心, 最后觀察結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 供血血樣對(duì)結(jié)果的影響 取60份供血血袋上的配血“辮子”配制成3％(V/V)的紅細(xì)胞懸液配血, 發(fā)現(xiàn)有些微柱中散落著細(xì)沙樣的紅色顆粒可致使結(jié)果出現(xiàn)假陽性, 程度在(+～++), 這樣的占86.67％(52/60)。

2.2 患者血樣不抗凝對(duì)配血結(jié)果的影響：此次研究中共有87例患者的血樣結(jié)果存在以下情況, 經(jīng)離心后, 柱上有紅顆?；蚣t線, 造成了結(jié)果的不準(zhǔn)確影響, 占90.63％(87/96)。

2.3 孵育時(shí)間影響配血結(jié)果 將不規(guī)則抗體陽性標(biāo)本12例進(jìn)行孵育, 有4例在5 min的時(shí)候有陽性結(jié)果, 其余在15 min的時(shí)候也出現(xiàn)了陽性結(jié)果, 表明有8例漏檢, 漏檢率達(dá)到了66.67％(8/12)。

2.4 離心機(jī)的影響 將不規(guī)則抗體12份以及陰性配血樣本21份進(jìn)行了試驗(yàn), 使用Ortho的卡和戴安娜離心機(jī), 有3例不規(guī)則抗體陽性標(biāo)本出現(xiàn)了假陰反應(yīng), 而使用戴安娜配血卡和Ortho離心機(jī), 則21例陰性樣本中有5例出現(xiàn)了假陽結(jié)果,兩種方式的影響率都比較大, 假陽性率為23.81％(5/21)。

2.5 新生兒血型對(duì)配血結(jié)果的影響 新生兒臍血血樣150例,有21.33％(32/150)正反定型不相符。其中20例進(jìn)行相反血型交叉配血(即A型配B型, B型配A型), 結(jié)果18例為陰性,其余2例弱陽性。

3 討論

微柱凝膠技術(shù)是目前使用較多, 比較先進(jìn)的一種配血技術(shù), 該技術(shù)因?yàn)槌霈F(xiàn)比較晚, 所以還沒有完全的普及, 但是將來必然會(huì)是傳統(tǒng)試管法的替代方法, 為了在實(shí)際使用的時(shí)候, 不出現(xiàn)假陰和假陽反應(yīng), 需要對(duì)該技術(shù)的使用進(jìn)行研究分析, 探討其影響因素, 保障輸血的安全性。處理不當(dāng)會(huì)讓患者的血細(xì)胞出現(xiàn)假陽或假陰反應(yīng), 血液沒有獲得較好的抗凝, 出現(xiàn)了凝集現(xiàn)象, 這樣就導(dǎo)致了顆粒無法通過微柱而發(fā)生假陽性。

實(shí)驗(yàn)使用戴安娜和Ortho兩種卡, 博唯優(yōu)離心機(jī), 前1 min將速度設(shè)定為1000 r/min, 后面4分組均為1500 r/min, 每次的離心時(shí)間定為5 min, 戴安娜離心機(jī)不變速, 離心10 min[2］。不同卡使用的離心條件也不相同, 臨床中不能夠?qū)⒉煌瑥S家的微柱凝膠卡進(jìn)行混用, 這樣會(huì)給配血結(jié)果帶來較大的影響,在進(jìn)行卡式配血的時(shí)候, 應(yīng)該要和配套的離心機(jī)一同使用。在平時(shí)的使用中, 為了節(jié)約時(shí)間, 將孵育時(shí)間進(jìn)行縮減, 這樣會(huì)給假陰帶來很大的發(fā)生幾率, 所以臨床中不能單純的求快, 即便是急診實(shí)驗(yàn)也應(yīng)該根據(jù)流程步驟。

臨床中對(duì)新生兒血型進(jìn)行鑒定的問題需要特別的關(guān)注,正定型時(shí), 紅細(xì)胞的抗原性弱會(huì)在檢驗(yàn)的時(shí)候漏檢, 反定型因抗體而滯后也會(huì)增加錯(cuò)誤幾率, 因此進(jìn)行新生兒血型鑒定的時(shí)候必須細(xì)致、嚴(yán)謹(jǐn), 相關(guān)人員的責(zé)任心要強(qiáng)。本科室曾經(jīng)就有過血型錯(cuò)誤的情況, 醫(yī)生誤操作將A型寫成B型, 進(jìn)行復(fù)查時(shí)就發(fā)現(xiàn)了問題, 使用B型血交叉配血結(jié)果為陰性,為了進(jìn)行驗(yàn)證, 選取了5個(gè)其他的B型血樣本進(jìn)行交叉配血,結(jié)果均為陰, 最后進(jìn)行了24例相反血型交叉配血試驗(yàn), 結(jié)果4例陰性。此后對(duì)該現(xiàn)象進(jìn)行了研究分析, 根據(jù)150例新生兒的反定型試驗(yàn)發(fā)現(xiàn), 正反定型的不符合率為21％, 與其他關(guān)于該情況的研究報(bào)道相一致[3］。因此, 臨床中對(duì)于新生兒在進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)的時(shí)候應(yīng)該要慎重, 避免造成輸血的風(fēng)險(xiǎn)。

目前臨床中進(jìn)行配血的時(shí)候, 大多數(shù)都是用卡式配血,該方式簡(jiǎn)單易行, 但是卻也有很多的因素會(huì)對(duì)結(jié)果帶來大的影響, 所以在享受其帶來了方便和快捷之時(shí)也不能忘了這些影響因素, 在進(jìn)行配血的時(shí)候?qū)ζ渥⒁? 積極的排除, 讓配血結(jié)果準(zhǔn)確, 給臨床輸血提供參考和安全。

[1]舒象武.應(yīng)用微柱凝膠抗球蛋白技術(shù)進(jìn)行交叉配血.中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2003,13(13):116-118.

[2]Dittma K, Procter JL, Cipolone K, et al. Comparison of dats using traditional tube agglutination to gel coulumn and affinity coulumn procedures. Transfusion,2001(41):1258-1262.

[3]李勇, 楊貴貞.人類紅細(xì)胞血型學(xué)實(shí)用理論與實(shí)驗(yàn)技術(shù).北京:中國(guó)科學(xué)技術(shù)出版社,1999:251-276.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.02.153

2014-10-14］

150036 黑龍江省醫(yī)院