夏 林 （江蘇省揚中市人民醫(yī)院，江蘇 揚中 212200）

宮頸癌及上皮內瘤變組織中HPV感染基因型別標桿的建立對宮頸癌防控的意義

夏 林 （江蘇省揚中市人民醫(yī)院，江蘇 揚中 212200）

目的：研究宮頸癌及宮頸上皮內瘤變組織中人乳頭瘤病毒（HPV）感染的基因型分布情況及其對宮頸癌防控的意義．方法：選取我院病理科2010-01／2014-03診斷為宮頸癌及宮頸上皮內瘤變的患者164例，其中，宮頸癌患者56例，宮頸上皮內瘤變患者108例．所有患者采用基因擴增結合基因芯片技術對所有患者的組織標本進行 HPV基因分型檢測，共23種基因型，同時對患者進行相關臨床資料的收集與整理，進行HPV感染基因型別標桿的建立．結果：108例宮頸上皮內瘤變患者的HPV總陽性率為82．41%（89／108），一重感染陽性率為42．59%（46／108），多重感染陽性率為35．19%（38／108）；56例宮頸癌患者 HPV總陽性率為87．50%（49／56），一重感染陽性率為64．29% （36／56），多重感染陽性率為 21．43%（12／56）．結論：宮頸癌及上皮內瘤變組織中 HPV感染基因型別標桿的建立對宮頸癌防控的意義重大，值得臨床推廣．

宮頸癌；宮頸上皮內瘤變；人乳頭瘤病毒；基因型；防控

0 引言

近年來，宮頸癌的發(fā)病率逐年升高，尤其是在年輕婦女中的發(fā)生率更是明顯升高．研究顯示［1］，2008年全世界宮頸癌總數約53萬，死亡27．5萬，發(fā)病率僅次于乳腺癌（138萬）及結直腸癌（57萬），其中85%以上的宮頸癌發(fā)生于發(fā)展中國家．隨著宮頸細胞學檢查的廣泛開展與應用，宮頸癌及癌前病變的發(fā)病率明顯下降，在過去的60年間，發(fā)達國家宮頸癌死亡率減少70%～80%［2］，但在發(fā)展中國家，至今仍是婦科惡性腫瘤第一位．目前我國的宮頸癌篩查遵循“三階梯”［3］的診療原則，即細胞學檢查（必要時HPV檢查）——陰道鏡檢查——宮頸活檢．液基細胞學的應用明顯提高了宮頸癌前病變診斷的準確性，對檢查陽性的患者再行人乳頭瘤病毒（HPV）基因分型檢測，則可以進一步了解其類型，更好地篩查出高危型患者．本文就宮頸癌及宮頸上皮內瘤變組織中人乳頭瘤病毒（HPV）感染的基因型分布情況及其對宮頸癌防控的意義進行研究，旨在更好地降低宮頸癌及宮頸上皮內瘤變發(fā)生率，提高篩查率．

1 資料和方法

1．1 臨床資料 選取我院病理科 2010-01／2014-03診斷為宮頸癌及宮頸上皮內瘤變的患者164例，其中，宮頸癌患者 56例，宮頸上皮內瘤變患者 108例．入選標準為：年齡21～83（平均45．4±15．5）歲，排除妊娠及急性生殖道炎癥，24 h內無性生活，48 h內無陰道用藥史，至少半年內未進行任何宮頸病變診斷和治療方法處理．

1．2 方法

1．2．1 儀器設備 基因擴增儀：采用新加坡生產的Gene Amp PCR system 2004型；分子雜交儀：采用江蘇省興化市分析儀器廠生產的 FYY-3型；高速冷凍離心機：采用德國生產的 Eppendorf 5810 R型；生物安全柜：采用江蘇省蘇州市安泰空氣技術有限公司生產的 BHC-1300ⅡA2型；青島海爾有限公司生產的 －20°冰箱．

1．2．2 標本采集 標本來源為從 56例宮頸癌患者和108例宮預上皮內瘤變患者身體采集的石蠟組織，將每例患者的組織標本進行相應的處理：首先除去其病變組織周邊多余的石蠟；然后將其石蠟組織切片，切片厚度約4μm，一般切 3～5片石蠟組織；其次用專用的鑷子夾取標本放入小離心管中，這個過程需要小心謹慎操作．在切石蠟組織前，刀片及鑷子需要使用次氯酸鈉溶液分別擦拭 3次［4］．

1．2．3 檢測方法 將石蠟組織切片放入離心管中，離心管規(guī)格為 1．5 mL，然后加入 150 μL裂解液，充分振蕩、混勻，在100℃金屬浴中加熱 10 min，隨后立即13 000 r／min離心10 min，待離心后取中間層DNA溶液待用［5］．按說明書對 PCR擴增、雜交、孵育以及顯色進行規(guī)范操作［5］．

1．3 統(tǒng)計學處理 應用 SPSS17．0統(tǒng)計學軟件對數據進行統(tǒng)計學分析，計量資料的比較采用 t檢驗，計數資料采用χ2檢驗，以 P＜0．05表示差異有統(tǒng)計學意義．

2 結果

108例宮頸上皮內瘤變患者的HPV總陽性率為82．41%（89／108），一重感染陽性率為42．59%（46／108），多重感染陽性率為35．19%（38／108）；56例宮頸癌患者HPV總陽性率為 87．50%（49／56），一重感染陽性率為 64．29%（36／56），多重感染陽性率為21．43%（12／56）．

3 討論

宮頸癌是最常見的女性惡性腫瘤，據相關數據統(tǒng)計，現宮頸癌居婦科惡性腫瘤第2位．宮頸癌的發(fā)生發(fā)展有一個漸進的演變過程［6］：增生期——不典型增生期——原位癌——宮頸癌早期——浸潤性宮頸癌．此過程可能需要5年甚至10年或更長時間，因此早發(fā)現、早治療，及時阻斷宮頸癌進展顯得尤為重要．

HPV是一種人乳頭多瘤病毒，是一組球形 DNA病毒，屬于乳頭瘤空泡病毒科 A亞群［3］，其20面體立體對稱，無包膜，雙鏈閉環(huán) DNA基因組，呈嗜上皮性．自1977年 Laverty通過電鏡在宮頸癌組織中觀察到人乳頭瘤病毒顆粒以來，許多學者開始對宮頸癌進行大量研究，包括它的發(fā)生、發(fā)展以及與HPV感染之間的關聯性［4－7］，目前公認 HPV感染是宮頸癌的主要病因［3］．

本文通過對我院宮頸癌及宮頸上皮內瘤變患者采用基因擴增結合基因芯片技術進行組織標本HPV 23種基因分型檢測，同時對患者進行相關臨床資料的收集與整理，進行 HPV感染基因型別標桿的建立．結果發(fā)現，癌組織中 HPV感染的型別有所不同，既有單一型別，同時也有混合型別，但以一重感染為主，多重感染為輔，由此說明在宮頸癌及其上皮內瘤變中較豐富的是一重感染類型，而多重感染呈現出不斷增加的趨勢．

綜上所述，宮頸癌的預防和篩查意義重大，它是一個系統(tǒng)工程．由于HPV感染屬于性傳播疾病，所以，對 HPV陽性的女性和男性進行及時的管理和治療，并采取一些安全措施，如在性交時使用安全套等，這樣不但可以降低 HPV的感染率，而且可以在持續(xù)性高危型HPV感染階段采用一些行之有效的干預措施，同時在癌前期病變期進早診斷早治療，就會大大造福廣大女性患者．

［1］Arbyn M．Castellsague X，de Sanjose S，et al．Worldwide burden of cervical cancer in 2008［J］．Ann Oncol，2011，22（12）：2675－2686．

［2］Atilgan R，Celik A，Boztosun A，et al．Evaluation of cervical cytological abnormalities in Turkish population［J］．Indian J Pathol Microbiol，2012，55（1）：52－55．

［3］Saslow D，Castle PE，Cox JT，et al．American Cancer Society Guideline for Human Papillomavirus（HPV）vaccine use to prevent cervical Cancer and its precursors［J］．CA Cancer J Clin，2007，57（1）：7－28．

［4］Middleton K，Peh W，Southern S，et al．Organization of human papillomavirus productive cycle during neoplastic progression provides a basis for selection of diagnostic markers［J］．J ViroI，2003，77（19）：10186－10201．

［5］Peh WL，Middleton K，Christensen N，et a1．Life cycle heterogeneity in animal models of human papillomavirus-associated disease［J］．J Virol，2002，76（20）：10401－10416．

［6］Kulmala SM，Syrj?nen SM，Gyllensten UB，et al．Early integration of high-copy HPV16 detectable in women with normal and low-grade cervical cytology and histology［J］．J Clin Pathol，2006，59（5）：513－517．

［7］任曉慧，耿建祥，李 海，等．某市2109例女性宮頸細胞中HPV基因型別的研究［J］．國際檢驗醫(yī)學雜志，2012，33（13）：1542－1544．

R737．33

A

2095-6894（2015）02-022-02

2014-07-25；接受日期：2014-08-10

夏 林．E-mail：xialin2010＠163．com