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        高效液相色譜法同時測定葡萄酒中5種酸性紅色素

        2015-01-07 03:11:14王艷麗姜濤宿書芳于文江薛霞
        山東農(nóng)業(yè)科學 2014年9期
        關鍵詞:高效液相色譜葡萄酒

        王艷麗+姜濤+宿書芳+于文江+薛霞

        摘要:通過對提取溶劑、流動相條件、最大吸收波長及色譜條件的優(yōu)化,建立了一種同時測定葡萄酒中堅牢紅、偶氮玉紅、孟加拉紅、奇通紅S、熒光桃紅5種酸性紅色素的高效液相色譜分析方法。樣品經(jīng)甲醇提取后,采用Symmetry C18柱進行分離 ,以甲醇-20 mmol/L醋酸銨為流動相梯度洗脫,二極管陣列檢測器檢測,外標法定量。結果表明,各組分在0.5~50.0 mg/L范圍內(nèi)線性關系良好,相關系數(shù)均大于0.999,檢出限為0.1~1.0 mg/kg;在1、10、50 mg/kg三個加標水平下的平均回收率為85%~106%,相對標準偏差(RSD) 為1.5%~5.8%。

        關鍵詞:葡萄酒;酸性紅色素;高效液相色譜

        中圖分類號:O657.7+2文獻標識號:A文章編號:1001-4942(2014)09-0117-04

        葡萄酒是用新鮮的葡萄或葡萄汁經(jīng)發(fā)酵釀制而成的一類酒精飲品。通常分紅葡萄酒和白葡萄酒兩種。因蘊含多種氨基酸、礦物質(zhì)、維生素等對人體有益成分,其營養(yǎng)價值得到了廣泛認可。近年來,有關葡萄酒制假售假現(xiàn)象屢有報道,為了增強紅葡萄酒的色澤同時降低生產(chǎn)成本,有不法企業(yè)向葡萄酒中添加人工合成色素,從而達到以假亂真的目的。長期飲用此類假酒,會對人的肝臟、腎臟等產(chǎn)生危害。因此對葡萄酒中可能添加的外來色素進行檢測具有重要意義。

        堅牢紅(又名酸性紅13)、偶氮玉紅(又名酸性紅)、孟加拉紅(又名酸性紅94)、奇通紅S(又名酸性紅52)和熒光桃紅(又名酸性紅92)均屬于偶氮染料。GB2760-2011《食品添加劑使用標準》中明確規(guī)定偶氮玉紅不得在葡萄酒中添加[1],其它四種色素在我國和歐盟等國家也均不允許在食品中使用。

        目前食品中合成色素的檢測方法主要有高效液相色譜法[2~8]、液質(zhì)聯(lián)用法[9]、電動毛細管色譜法[10]和極譜法[11]。但同時測定葡萄酒中堅牢紅、偶氮玉紅、孟加拉紅、奇通紅S、和熒光桃紅等5種酸性紅色素的方法尚不多見。為有效監(jiān)控酸性工業(yè)染料在食品中的濫用,本實驗建立了高效液相色譜法同時快速測定葡萄酒中5種酸性紅色素的檢測方法。

        1材料與方法

        1.1儀器與試劑

        Waters 2695型高效液相色譜儀,配二極管陣列檢測器;AL204 電子天平,梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司;MS3基本型旋渦混合儀,德國IKA;KQ5200超聲波清洗器,昆山市超聲儀器有限公司。

        甲醇,色譜純;醋酸銨,分析純;堅牢紅、偶氮玉紅、孟加拉紅、奇通紅S、熒光桃紅,Dr. Ehrenstorfer公司。

        1.2標準溶液的制備

        將5種色素配制成質(zhì)量濃度為50 mg/L的混合標準儲備液,置于4℃冰箱中保存。將混合標準儲備液用水依次稀釋成0.5、1.0、5.0、10.0、50.0 mg/L的標準系列溶液。

        1.3高效液相色譜條件

        色譜柱:Symmetry C18柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm);流速:1.0 mL/min;柱溫:35℃;采集波長:200~630 nm;進樣量:10 μL。

        流動相:A為甲醇,B為20 mmol/L醋酸銨溶液。梯度洗脫程序見表1。

        1.4樣品處理

        稱取葡萄酒樣品5.00 g于25 mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,經(jīng)0.45 μm有機濾膜過濾,濾液供HPLC測定。

        2結果與分析

        2.1提取劑的選擇

        分別用純水、乙醇-氨水[12]和甲醇對葡萄酒中的色素進行提取,結果發(fā)現(xiàn),以純水為提取劑,奇通紅S和熒光桃紅在樣品中的加標回收率僅為26%~57%,可能是由于葡萄酒顯酸性,而熒光桃紅在酸性環(huán)境下易產(chǎn)生沉淀,導致回收率偏低;用乙醇-氨水溶液做提取劑,雖然回收率明顯提高,但需去除氨水,步驟繁瑣;用甲醇做提取劑時,樣品中的色素提取完全,5種色素均能夠得到理想的加標回收率(見表2)。

        2.2檢測波長的選擇

        各組分經(jīng)色譜分離后,由二極管陣列檢測器掃描檢測,取得各組分最大吸收光譜(見圖1),各組分的最大吸收波長分別為:堅牢紅,514 nm;偶氮玉紅,519 nm;孟加拉紅,562 nm;奇通紅S,557 nm;熒光桃紅,547 nm。由于醋酸銨在550 nm附近基本沒有吸收干擾,所以本實驗將檢測波長確定為550 nm。在優(yōu)化的色譜條件下,各組分得到了有效分離,且避免了實際樣品中雜質(zhì)組分的干擾(見圖2)。

        2.3方法的線性范圍與檢出限

        對配制的系列混合標準工作溶液進行測試,以峰面積Y對相應的質(zhì)量濃度X進行線性回歸。

        各色素的線性回歸方程、相關系數(shù)及方法檢出限見表3,表明5種色素在0.5~50.0 mg/L范圍內(nèi)線性良好,相關系數(shù)均大于0.999。以3倍噪音計算方法檢出限,結果為0.1~1.0 mg/kg。

        2.4回收率與精密度

        在不含該5種色素的葡萄酒中,分別添加各色素含量為1、10、50 mg/kg三個濃度水平的標樣,每個水平平行測定6次,其回收率和相對標準偏差(RSD)見表4。5種目標化合物的平均添加回收率為85%~106%,RSD均小于6.0%。

        3結論

        本研究在實驗基礎上確定了高效液相色譜法檢測葡萄酒中5種酸性紅色素的樣品提取劑及檢測波長。采用甲醇作為提取劑,提取后直接上機,在550 nm波長下進行檢測,可以得到清晰的譜圖,5種色素在0.5~50.0 mg/L范圍內(nèi)具有良好的線性關系,相關系數(shù)均高于0.999,檢測限0.1~1.0 mg/kg,加標回收率85%~106%,RSD均低于6.0%。本方法具有前處理簡單、快速、結果準確可靠等優(yōu)點,可用于葡萄酒中5種酸性紅色素的同時檢測。

        參考文獻:

        [1]中華人民共和國衛(wèi)生部,中國國家標準化管理委員會.GB 2760-2011食品添加劑使用衛(wèi)生標準[S].北京:中國標準出版社,2011.

        [2]李小平,趙永剛,陳曉紅,等.固相萃取-反相高效液相色譜法同時測定葡萄酒中7種合成色素[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2013,23(12):2566-2569.

        [3]寧尚勇,高潔,許志強,等. 反相液相色譜法同時檢測蝦仁中合成色素的研究[J].分析試驗室,2008,27(4):72-75.

        [4]霍艷敏,王駿,張卉,等. 高效液相色譜法同時測定冰淇淋中的10種合成色素[J].分析測試學報,2011,30(6):670-673.

        [5]李小燕,李梅,陳其鋒,等.固相萃取-高效液相色譜檢測葡萄酒中羅丹明B[J] .食品科學,2011,32(8):238-243.

        [6]陳文軍. 高效液相色譜法測定食品中的合成色素酸性紅26[J] .光譜實驗室,2012,29(5):2848-2851.

        [7]肖海龍,屠海云,王紅青,等. 反相高效液相色譜法快速測定食品中18種水溶性合成著色劑[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2011,21(2):264-266.

        [8]李瑋,芮昶,屠海云,等. 高效液相色譜法測定化妝品中的7種色素[J].分析試驗室,2011,30(12):85-89.

        [9]林珍珍,張水峰,曹慧,等. 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定肉制品中非法添加的14種酸性染料[J].中國食品學報,2013,3(5):167-172.

        [10]龍巍然,王興益,史振雨,等. 膠束電動毛細管色譜同時測定食品中13種人工合成色素[J] .分析測試學報,2012,31(9):1100-1104.

        [11]陳文,王正猛,吳曉蓉,等. 單掃描極譜法連續(xù)測定食品中非食用色素酸性金黃和酸性大紅[J] .食品科學,2005,26(6):210-212.

        [12]吳國華,邵兵,趙婕,等. 餅干中酸性紅測定方法研究[J] .中國衛(wèi)生檢驗雜志,2004,14(3):347.endprint

        摘要:通過對提取溶劑、流動相條件、最大吸收波長及色譜條件的優(yōu)化,建立了一種同時測定葡萄酒中堅牢紅、偶氮玉紅、孟加拉紅、奇通紅S、熒光桃紅5種酸性紅色素的高效液相色譜分析方法。樣品經(jīng)甲醇提取后,采用Symmetry C18柱進行分離 ,以甲醇-20 mmol/L醋酸銨為流動相梯度洗脫,二極管陣列檢測器檢測,外標法定量。結果表明,各組分在0.5~50.0 mg/L范圍內(nèi)線性關系良好,相關系數(shù)均大于0.999,檢出限為0.1~1.0 mg/kg;在1、10、50 mg/kg三個加標水平下的平均回收率為85%~106%,相對標準偏差(RSD) 為1.5%~5.8%。

        關鍵詞:葡萄酒;酸性紅色素;高效液相色譜

        中圖分類號:O657.7+2文獻標識號:A文章編號:1001-4942(2014)09-0117-04

        葡萄酒是用新鮮的葡萄或葡萄汁經(jīng)發(fā)酵釀制而成的一類酒精飲品。通常分紅葡萄酒和白葡萄酒兩種。因蘊含多種氨基酸、礦物質(zhì)、維生素等對人體有益成分,其營養(yǎng)價值得到了廣泛認可。近年來,有關葡萄酒制假售假現(xiàn)象屢有報道,為了增強紅葡萄酒的色澤同時降低生產(chǎn)成本,有不法企業(yè)向葡萄酒中添加人工合成色素,從而達到以假亂真的目的。長期飲用此類假酒,會對人的肝臟、腎臟等產(chǎn)生危害。因此對葡萄酒中可能添加的外來色素進行檢測具有重要意義。

        堅牢紅(又名酸性紅13)、偶氮玉紅(又名酸性紅)、孟加拉紅(又名酸性紅94)、奇通紅S(又名酸性紅52)和熒光桃紅(又名酸性紅92)均屬于偶氮染料。GB2760-2011《食品添加劑使用標準》中明確規(guī)定偶氮玉紅不得在葡萄酒中添加[1],其它四種色素在我國和歐盟等國家也均不允許在食品中使用。

        目前食品中合成色素的檢測方法主要有高效液相色譜法[2~8]、液質(zhì)聯(lián)用法[9]、電動毛細管色譜法[10]和極譜法[11]。但同時測定葡萄酒中堅牢紅、偶氮玉紅、孟加拉紅、奇通紅S、和熒光桃紅等5種酸性紅色素的方法尚不多見。為有效監(jiān)控酸性工業(yè)染料在食品中的濫用,本實驗建立了高效液相色譜法同時快速測定葡萄酒中5種酸性紅色素的檢測方法。

        1材料與方法

        1.1儀器與試劑

        Waters 2695型高效液相色譜儀,配二極管陣列檢測器;AL204 電子天平,梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司;MS3基本型旋渦混合儀,德國IKA;KQ5200超聲波清洗器,昆山市超聲儀器有限公司。

        甲醇,色譜純;醋酸銨,分析純;堅牢紅、偶氮玉紅、孟加拉紅、奇通紅S、熒光桃紅,Dr. Ehrenstorfer公司。

        1.2標準溶液的制備

        將5種色素配制成質(zhì)量濃度為50 mg/L的混合標準儲備液,置于4℃冰箱中保存。將混合標準儲備液用水依次稀釋成0.5、1.0、5.0、10.0、50.0 mg/L的標準系列溶液。

        1.3高效液相色譜條件

        色譜柱:Symmetry C18柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm);流速:1.0 mL/min;柱溫:35℃;采集波長:200~630 nm;進樣量:10 μL。

        流動相:A為甲醇,B為20 mmol/L醋酸銨溶液。梯度洗脫程序見表1。

        1.4樣品處理

        稱取葡萄酒樣品5.00 g于25 mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,經(jīng)0.45 μm有機濾膜過濾,濾液供HPLC測定。

        2結果與分析

        2.1提取劑的選擇

        分別用純水、乙醇-氨水[12]和甲醇對葡萄酒中的色素進行提取,結果發(fā)現(xiàn),以純水為提取劑,奇通紅S和熒光桃紅在樣品中的加標回收率僅為26%~57%,可能是由于葡萄酒顯酸性,而熒光桃紅在酸性環(huán)境下易產(chǎn)生沉淀,導致回收率偏低;用乙醇-氨水溶液做提取劑,雖然回收率明顯提高,但需去除氨水,步驟繁瑣;用甲醇做提取劑時,樣品中的色素提取完全,5種色素均能夠得到理想的加標回收率(見表2)。

        2.2檢測波長的選擇

        各組分經(jīng)色譜分離后,由二極管陣列檢測器掃描檢測,取得各組分最大吸收光譜(見圖1),各組分的最大吸收波長分別為:堅牢紅,514 nm;偶氮玉紅,519 nm;孟加拉紅,562 nm;奇通紅S,557 nm;熒光桃紅,547 nm。由于醋酸銨在550 nm附近基本沒有吸收干擾,所以本實驗將檢測波長確定為550 nm。在優(yōu)化的色譜條件下,各組分得到了有效分離,且避免了實際樣品中雜質(zhì)組分的干擾(見圖2)。

        2.3方法的線性范圍與檢出限

        對配制的系列混合標準工作溶液進行測試,以峰面積Y對相應的質(zhì)量濃度X進行線性回歸。

        各色素的線性回歸方程、相關系數(shù)及方法檢出限見表3,表明5種色素在0.5~50.0 mg/L范圍內(nèi)線性良好,相關系數(shù)均大于0.999。以3倍噪音計算方法檢出限,結果為0.1~1.0 mg/kg。

        2.4回收率與精密度

        在不含該5種色素的葡萄酒中,分別添加各色素含量為1、10、50 mg/kg三個濃度水平的標樣,每個水平平行測定6次,其回收率和相對標準偏差(RSD)見表4。5種目標化合物的平均添加回收率為85%~106%,RSD均小于6.0%。

        3結論

        本研究在實驗基礎上確定了高效液相色譜法檢測葡萄酒中5種酸性紅色素的樣品提取劑及檢測波長。采用甲醇作為提取劑,提取后直接上機,在550 nm波長下進行檢測,可以得到清晰的譜圖,5種色素在0.5~50.0 mg/L范圍內(nèi)具有良好的線性關系,相關系數(shù)均高于0.999,檢測限0.1~1.0 mg/kg,加標回收率85%~106%,RSD均低于6.0%。本方法具有前處理簡單、快速、結果準確可靠等優(yōu)點,可用于葡萄酒中5種酸性紅色素的同時檢測。

        參考文獻:

        [1]中華人民共和國衛(wèi)生部,中國國家標準化管理委員會.GB 2760-2011食品添加劑使用衛(wèi)生標準[S].北京:中國標準出版社,2011.

        [2]李小平,趙永剛,陳曉紅,等.固相萃取-反相高效液相色譜法同時測定葡萄酒中7種合成色素[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2013,23(12):2566-2569.

        [3]寧尚勇,高潔,許志強,等. 反相液相色譜法同時檢測蝦仁中合成色素的研究[J].分析試驗室,2008,27(4):72-75.

        [4]霍艷敏,王駿,張卉,等. 高效液相色譜法同時測定冰淇淋中的10種合成色素[J].分析測試學報,2011,30(6):670-673.

        [5]李小燕,李梅,陳其鋒,等.固相萃取-高效液相色譜檢測葡萄酒中羅丹明B[J] .食品科學,2011,32(8):238-243.

        [6]陳文軍. 高效液相色譜法測定食品中的合成色素酸性紅26[J] .光譜實驗室,2012,29(5):2848-2851.

        [7]肖海龍,屠海云,王紅青,等. 反相高效液相色譜法快速測定食品中18種水溶性合成著色劑[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2011,21(2):264-266.

        [8]李瑋,芮昶,屠海云,等. 高效液相色譜法測定化妝品中的7種色素[J].分析試驗室,2011,30(12):85-89.

        [9]林珍珍,張水峰,曹慧,等. 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定肉制品中非法添加的14種酸性染料[J].中國食品學報,2013,3(5):167-172.

        [10]龍巍然,王興益,史振雨,等. 膠束電動毛細管色譜同時測定食品中13種人工合成色素[J] .分析測試學報,2012,31(9):1100-1104.

        [11]陳文,王正猛,吳曉蓉,等. 單掃描極譜法連續(xù)測定食品中非食用色素酸性金黃和酸性大紅[J] .食品科學,2005,26(6):210-212.

        [12]吳國華,邵兵,趙婕,等. 餅干中酸性紅測定方法研究[J] .中國衛(wèi)生檢驗雜志,2004,14(3):347.endprint

        摘要:通過對提取溶劑、流動相條件、最大吸收波長及色譜條件的優(yōu)化,建立了一種同時測定葡萄酒中堅牢紅、偶氮玉紅、孟加拉紅、奇通紅S、熒光桃紅5種酸性紅色素的高效液相色譜分析方法。樣品經(jīng)甲醇提取后,采用Symmetry C18柱進行分離 ,以甲醇-20 mmol/L醋酸銨為流動相梯度洗脫,二極管陣列檢測器檢測,外標法定量。結果表明,各組分在0.5~50.0 mg/L范圍內(nèi)線性關系良好,相關系數(shù)均大于0.999,檢出限為0.1~1.0 mg/kg;在1、10、50 mg/kg三個加標水平下的平均回收率為85%~106%,相對標準偏差(RSD) 為1.5%~5.8%。

        關鍵詞:葡萄酒;酸性紅色素;高效液相色譜

        中圖分類號:O657.7+2文獻標識號:A文章編號:1001-4942(2014)09-0117-04

        葡萄酒是用新鮮的葡萄或葡萄汁經(jīng)發(fā)酵釀制而成的一類酒精飲品。通常分紅葡萄酒和白葡萄酒兩種。因蘊含多種氨基酸、礦物質(zhì)、維生素等對人體有益成分,其營養(yǎng)價值得到了廣泛認可。近年來,有關葡萄酒制假售假現(xiàn)象屢有報道,為了增強紅葡萄酒的色澤同時降低生產(chǎn)成本,有不法企業(yè)向葡萄酒中添加人工合成色素,從而達到以假亂真的目的。長期飲用此類假酒,會對人的肝臟、腎臟等產(chǎn)生危害。因此對葡萄酒中可能添加的外來色素進行檢測具有重要意義。

        堅牢紅(又名酸性紅13)、偶氮玉紅(又名酸性紅)、孟加拉紅(又名酸性紅94)、奇通紅S(又名酸性紅52)和熒光桃紅(又名酸性紅92)均屬于偶氮染料。GB2760-2011《食品添加劑使用標準》中明確規(guī)定偶氮玉紅不得在葡萄酒中添加[1],其它四種色素在我國和歐盟等國家也均不允許在食品中使用。

        目前食品中合成色素的檢測方法主要有高效液相色譜法[2~8]、液質(zhì)聯(lián)用法[9]、電動毛細管色譜法[10]和極譜法[11]。但同時測定葡萄酒中堅牢紅、偶氮玉紅、孟加拉紅、奇通紅S、和熒光桃紅等5種酸性紅色素的方法尚不多見。為有效監(jiān)控酸性工業(yè)染料在食品中的濫用,本實驗建立了高效液相色譜法同時快速測定葡萄酒中5種酸性紅色素的檢測方法。

        1材料與方法

        1.1儀器與試劑

        Waters 2695型高效液相色譜儀,配二極管陣列檢測器;AL204 電子天平,梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司;MS3基本型旋渦混合儀,德國IKA;KQ5200超聲波清洗器,昆山市超聲儀器有限公司。

        甲醇,色譜純;醋酸銨,分析純;堅牢紅、偶氮玉紅、孟加拉紅、奇通紅S、熒光桃紅,Dr. Ehrenstorfer公司。

        1.2標準溶液的制備

        將5種色素配制成質(zhì)量濃度為50 mg/L的混合標準儲備液,置于4℃冰箱中保存。將混合標準儲備液用水依次稀釋成0.5、1.0、5.0、10.0、50.0 mg/L的標準系列溶液。

        1.3高效液相色譜條件

        色譜柱:Symmetry C18柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm);流速:1.0 mL/min;柱溫:35℃;采集波長:200~630 nm;進樣量:10 μL。

        流動相:A為甲醇,B為20 mmol/L醋酸銨溶液。梯度洗脫程序見表1。

        1.4樣品處理

        稱取葡萄酒樣品5.00 g于25 mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,經(jīng)0.45 μm有機濾膜過濾,濾液供HPLC測定。

        2結果與分析

        2.1提取劑的選擇

        分別用純水、乙醇-氨水[12]和甲醇對葡萄酒中的色素進行提取,結果發(fā)現(xiàn),以純水為提取劑,奇通紅S和熒光桃紅在樣品中的加標回收率僅為26%~57%,可能是由于葡萄酒顯酸性,而熒光桃紅在酸性環(huán)境下易產(chǎn)生沉淀,導致回收率偏低;用乙醇-氨水溶液做提取劑,雖然回收率明顯提高,但需去除氨水,步驟繁瑣;用甲醇做提取劑時,樣品中的色素提取完全,5種色素均能夠得到理想的加標回收率(見表2)。

        2.2檢測波長的選擇

        各組分經(jīng)色譜分離后,由二極管陣列檢測器掃描檢測,取得各組分最大吸收光譜(見圖1),各組分的最大吸收波長分別為:堅牢紅,514 nm;偶氮玉紅,519 nm;孟加拉紅,562 nm;奇通紅S,557 nm;熒光桃紅,547 nm。由于醋酸銨在550 nm附近基本沒有吸收干擾,所以本實驗將檢測波長確定為550 nm。在優(yōu)化的色譜條件下,各組分得到了有效分離,且避免了實際樣品中雜質(zhì)組分的干擾(見圖2)。

        2.3方法的線性范圍與檢出限

        對配制的系列混合標準工作溶液進行測試,以峰面積Y對相應的質(zhì)量濃度X進行線性回歸。

        各色素的線性回歸方程、相關系數(shù)及方法檢出限見表3,表明5種色素在0.5~50.0 mg/L范圍內(nèi)線性良好,相關系數(shù)均大于0.999。以3倍噪音計算方法檢出限,結果為0.1~1.0 mg/kg。

        2.4回收率與精密度

        在不含該5種色素的葡萄酒中,分別添加各色素含量為1、10、50 mg/kg三個濃度水平的標樣,每個水平平行測定6次,其回收率和相對標準偏差(RSD)見表4。5種目標化合物的平均添加回收率為85%~106%,RSD均小于6.0%。

        3結論

        本研究在實驗基礎上確定了高效液相色譜法檢測葡萄酒中5種酸性紅色素的樣品提取劑及檢測波長。采用甲醇作為提取劑,提取后直接上機,在550 nm波長下進行檢測,可以得到清晰的譜圖,5種色素在0.5~50.0 mg/L范圍內(nèi)具有良好的線性關系,相關系數(shù)均高于0.999,檢測限0.1~1.0 mg/kg,加標回收率85%~106%,RSD均低于6.0%。本方法具有前處理簡單、快速、結果準確可靠等優(yōu)點,可用于葡萄酒中5種酸性紅色素的同時檢測。

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