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        粗針督脈平刺治療缺血性面癱大鼠的機(jī)制探討

        2015-01-04 03:12:42虞彬艷宣麗華呂善廣萬意佳韋英姿李紅玉
        上海針灸雜志 2015年3期
        關(guān)鍵詞:同組面癱神經(jīng)功能

        虞彬艷,宣麗華,呂善廣,萬意佳,韋英姿,李紅玉

        (1.浙江省中醫(yī)院,杭州 310006;2.浙江中醫(yī)藥大學(xué),杭州 310053)

        ·動(dòng)物實(shí)驗(yàn)·

        粗針督脈平刺治療缺血性面癱大鼠的機(jī)制探討

        虞彬艷1,宣麗華1,呂善廣2,萬意佳2,韋英姿2,李紅玉2

        (1.浙江省中醫(yī)院,杭州 310006;2.浙江中醫(yī)藥大學(xué),杭州 310053)

        目的觀察粗針督脈平刺對缺血性面癱大鼠的治療效果,初步探討產(chǎn)生療效的可能機(jī)制。方法將60只Wistar 大鼠隨機(jī)分為A組(粗針平刺組)、B組(基礎(chǔ)西藥組)、C組(空白對照組)和D組(假手術(shù)組),每組15只。所有大鼠均采用改良血管栓塞法建立缺血性面癱模型。在治療期間對各組大鼠進(jìn)行面神經(jīng)功能缺損評分,A組于造模后1 d選取神道穴平刺,留針4 h,每日1次,共治療14 d;B組于造模后1 d予強(qiáng)的松灌胃、維生素B12腹腔注射治療,每日1次,共治療14 d;C組與D組不進(jìn)行治療。分別在造模后第3、7、14天隨機(jī)選取4只,采用免疫組織化學(xué)法進(jìn)行面神經(jīng)伴行固有血管組織HIF-1α蛋白測定,酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測血清NO,放射免疫法檢測血清ET含量。結(jié)果治療7 d后,A組和B組神經(jīng)功能缺損評分逐漸升高,與同組造模后比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。A組和B組治療7 d后神經(jīng)功能缺損評分與C組和D組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。C組治療7 d后神經(jīng)功能缺損評分與D組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。A組和B組治療14 d后神經(jīng)功能缺損評分與C組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。B組和C組治療14 d后神經(jīng)功能缺損評分與D組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。A組治療14 d后神經(jīng)功能缺損評分與同組治療7 d后相比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。A組、B組和C組治療3、7、14 d后HIF-1α MOD值與D組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。A組和B組治療3、7 d后HIF-1α MOD值與C組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。A組和B組治療3、14 d后HIF-1α MOD值與同組治療7 d后比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。A組和B組治療3、7 d后血清NO含量與D組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。A組和B組治療7 d后血清NO含量與同組治療3 d后比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。A組、B組和C組治療3、7 d后血清ET含量與D組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。A組和B組治療7 d后血清ET含量與同組治療3 d后比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論粗針督脈平刺能夠有效促進(jìn)缺血性面癱大鼠的恢復(fù),其產(chǎn)生療效機(jī)制可能是通過調(diào)控組織HIF-1α的表達(dá)及血清NO、ET含量。

        針刺療法;面神經(jīng)麻痹,周圍性;缺氧誘導(dǎo)因子;一氧化氮;內(nèi)皮素;大鼠

        面癱是以顏面表情肌運(yùn)動(dòng)功能障礙為主要特征的一種臨床常見病和多發(fā)病,分為中樞性面癱和周圍性面癱。周圍性面癱臨床表現(xiàn)為一側(cè)面部板滯、麻木、松弛,不能皺額、閉目、聳鼻、鼓腮等動(dòng)作,口角向健側(cè)歪斜,病側(cè)露睛流淚,額紋消失,鼻唇溝平坦,少數(shù)患者初起有耳后、耳下及面部疼痛等。周圍性面癱中又以面神經(jīng)炎最為常見,現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為本病的發(fā)作,是由于局部營養(yǎng)神經(jīng)的血管因受寒、炎癥、免疫異常、病毒感染等[1]刺激引起痙攣, 面神經(jīng)因缺血而水腫, 同時(shí)又受到面神經(jīng)管的限制, 使血管受壓而導(dǎo)致缺血加重, 因而產(chǎn)生面癱[2]。近代醫(yī)學(xué)對缺血性疾病的研究發(fā)現(xiàn),在缺血疾病的產(chǎn)生的過程中與低氧誘導(dǎo)因子-1α (HIF-1α)以及血清一氧化氮(NO)和內(nèi)皮素(ET)等因子有密切的關(guān)聯(lián)[3-6]。本研究在建立符合因缺血而導(dǎo)致的面癱模型基礎(chǔ)上,通過粗針督脈平刺進(jìn)行干預(yù),觀察督脈平刺對面癱的治療效果,并初步探討其治療的作用機(jī)制。

        1 材料與方法

        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

        選用60只SPF級健康雄性Wistar大鼠,體重為(220±20)g,購于中國科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

        1.2 主要試劑和設(shè)備

        NO ELISA試劑盒(瑞士 Bachem公司),兔抗大鼠HIF-lα單克隆抗體、免疫組織化學(xué)SABC試劑盒(美國Bioworld Technology公司),組化試劑盒DAB顯色劑(DAKO),0.40 mm×30mm 針灸針(江蘇省吳江市佳辰針灸器械有限公司),全波長酶標(biāo)儀 Spectra Max M4(美國Molecular Devices公司),Image-Proplus圖像分析系統(tǒng)(美國Media Cybernetics公司)。

        1.3 動(dòng)物分組及模型建立

        將選用的60只大鼠隨機(jī)分為A組(粗針平刺組)、B組(基礎(chǔ)西藥組)、C組(空白對照組)和D組(假手術(shù)組),每組15只。除D組外,其余各組大鼠均用10%水合氯醛(0.35 mL/100 g)腹腔注射麻醉后,在王杰等[7]制作缺血性面癱大鼠模型的基礎(chǔ)上進(jìn)行簡化改良,于右頸側(cè)切口,切除部分舌骨,暴露頸外動(dòng)脈,用不可吸收手術(shù)縫合線結(jié)扎頸外動(dòng)脈,參照Simone 10[8]進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評分,介于 3~5分則判定為造模成功。D組大鼠僅在血管附近軟組織稍作鈍性破壞,壓迫止血后,予以創(chuàng)口縫合。

        各組大鼠均于造模后第1天開始治療。

        A組取大鼠督脈第5胸椎棘突下神道穴,沿督脈經(jīng)向下平刺直至針根部,留針4 h。每日1次,共治療14 d。

        B組采用藥物治療。強(qiáng)的松片予以灌胃,每100 g體重給藥劑量分別為,前5 d每日0.05 mg,6~8 d每日 0.03 mg,9~11 d每日 0.016 mg,12~14 d每日0.008 mg;維生素B12予以腹腔注射給藥,每100 g體重給藥劑量為每日0.83 μg。

        C組和D組均在正常情況下飼養(yǎng),不做任何處理。

        1.5 檢測方法

        1.5.1 行為學(xué)觀察

        每日觀察各組大鼠行為學(xué)變化,參照 Simone 10分法對其神經(jīng)功能進(jìn)行評分,每星期均予以記錄。

        采用學(xué)術(shù)報(bào)告形式的出科考核方式可以激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣,拓寬了知識面,通過自行查閱資料等方式、既可以加深對基礎(chǔ)知識的理解和記憶,又可以提高自身分析、解決臨床實(shí)際問題的能力,達(dá)到提升臨床思維的目的。通過報(bào)告匯報(bào),提高自信心,增強(qiáng)勇氣、鍛煉其語言表達(dá)能力和溝通能力。帶教教師通過指導(dǎo)、修改、分析學(xué)生學(xué)術(shù)報(bào)告,及時(shí)了解最新知識動(dòng)態(tài),從而達(dá)到教學(xué)相長的初衷。

        1.5.2 指標(biāo)檢測

        每組在治療后第3、7、14天隨機(jī)選取4只大鼠,截取面神經(jīng)伴行固有血管,運(yùn)用免疫組織化學(xué)法檢測HIF-1α陽性細(xì)胞的表達(dá);采靜脈血,置于 EP管中用臺式冷凍離心機(jī)離心,留取血清,保存于-80°冰箱備用,采用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA法)檢測血清NO含量,采用放射性免疫法(RIA法)檢測ET含量。

        1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

        采用 SPSS 13.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。多組間比較采用單因素方差分析(ANOVA);組間兩兩比較,方差齊性時(shí)采用LSD檢驗(yàn),方差不齊時(shí)采用 Dunnett’s T3檢驗(yàn)。以P<0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 各組治療前后面神經(jīng)功能缺損評分比較

        由表1可見,A組、B組和C組造模后神經(jīng)功能缺損評分均為3~5分,提示造模成功。治療7 d后,A組和 B組神經(jīng)功能缺損評分逐漸升高,與同組造模后比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。A組和B組治療7 d后神經(jīng)功能缺損評分與C組和D組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。C組治療7 d后神經(jīng)功能缺損評分與D組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。A組和B組治療14 d后神經(jīng)功能缺損評分與C組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。B組和C組治療14 d后神經(jīng)功能缺損評分與D組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。A組治療14 d后神經(jīng)功能缺損評分與同組治療7 d后比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

        表1 各組治療前后面神經(jīng)功能缺損評分比 (±s,分)

        表1 各組治療前后面神經(jīng)功能缺損評分比 (±s,分)

        注:與同組造模后比較1)P<0.01;與D組比較2)P<0.05;與A組比較3)P <0.05;與C組比較4)P<0.05;與同組治療7 d后比較5)P<0.05

        組別 n 造模后 治療7 d后 治療14 d后A組 15 4.08±0.40 7.91±0.541)2)4) 9.48±0.424)5)B組 15 4.21±0.57 8.67±0.621)2)3)4) 8.84±0.472)4)C組 15 4.04±0.54 5.35±0.502) 5.93±0.582)D組 15 10.00±0.00 10.00±0.00 10.00±0.00

        2.2 各組治療前后HIF-1α MOD值比較

        由表2可見,A組、B組和C組治療3、7、14 d 后HIF-1α MOD值與D組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。A組和B組治療3、7 d后HIF-1α MOD值與C組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。A組和B組治療3、14 d后HIF-1α MOD值與同組治療7 d后比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

        表2 各組治療前后HIF-1α MOD值比較 (±s,×10-3)

        表2 各組治療前后HIF-1α MOD值比較 (±s,×10-3)

        注:與D組比較1)P<0.01;與C組比較2)P<0.05;與同組治療7 d后比較3)P<0.05

        組別 n 治療3 d后 治療7 d后 治療14 d后A組 15 5.32±1.271)2)3) 9.75±2.261)2) 2.04±0.331)3)B組 15 6.25±2.671)2)3) 8.89±1.421)2) 1.44±0.451)3)C組 15 2.78±0.661) 3.13±0.841) 4.17±0.711)D組 15 0.36±0.37 0.89±0.23 0.38±0.21

        2.3 各組治療前后血清NO含量比較

        由表3可見,A組和B組治療3、7 d后血清NO含量與 D組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。A組和B組治療7 d后血清NO含量與同組治療3 d后比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05))。

        表3 各組治療前后血清NO含量比較 (±s,μmol /L)

        表3 各組治療前后血清NO含量比較 (±s,μmol /L)

        注:與D組比較1)P<0.01;與同組治療3 d后比較2)P<0.05

        組別 n 治療3 d后 治療7 d后 治療14 d后A組 15 205.63±47.651)168.44±47.581)2)112.57±39.51 B組 15 190.24±53.891)152.41±38.631)2) 94.78±46.34 C組 15 150.22±33.65 123.72±27.15 109.48±38.57 D組 15 112.08±38.09 99.25±41.53 108.67±56.39

        2.4 各組治療前后血清ET含量比較

        表4 各組治療前后血清ET含量比較 (±s,pg/mL)

        表4 各組治療前后血清ET含量比較 (±s,pg/mL)

        注:與D組比較1)P<0.01;與同組治療3 d后比較2)P<0.05

        組別 n 治療3 d后 治療7 d后 治療14 d后A組 15 99.28±11.171) 89.47±10.131)2)58.51±22.96 B組 15 108.48±16.141) 95.26±21.391)2)52.50±14.28 C組 15 135.39±13.711) 118.68±21.041) 67.84±10.98 D組 15 47.34±14.22 56.07±18.16 49.55±19.08

        由表4可見,A組、B組和C組治療3、7 d后血清ET含量與D組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。A組和B組治療7 d后血清ET含量與同組治療3 d后比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

        3 討論

        傳統(tǒng)中醫(yī)療法在漫長的醫(yī)療實(shí)踐中積累了豐富的臨床經(jīng)驗(yàn),其中針灸治療面癱療效毋庸置疑,粗針督脈平刺以中醫(yī)學(xué)理論為基礎(chǔ),延承傳統(tǒng)針灸療法的優(yōu)勢和特點(diǎn),有報(bào)道[9-12]顯示其能促進(jìn)面癱患者面肌功能的恢復(fù),明顯縮短病程及改善預(yù)后。因此,鑒于目前臨床應(yīng)用粗針督脈平刺療法所取得的療效和成果,對其相關(guān)作用機(jī)制的研究成為目前研究的關(guān)鍵。

        根據(jù)目前對面癱的病因病機(jī)的研究,大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為面癱的發(fā)病機(jī)制與微循環(huán)關(guān)系密切,其中以HIF-1α、NO和ET在缺血性疾病中研究甚多。

        HIF-1α是在缺氧條件下介導(dǎo)哺乳動(dòng)物細(xì)胞中低氧反應(yīng)的一種轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子,一些生理?xiàng)l件下,如缺氧、局部缺血、創(chuàng)傷、炎癥等均可誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生HIF-1α。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,應(yīng)用HIF-1α已成功誘導(dǎo)了多種具有促血管生成活性的因子的表達(dá),改善了缺血組織的血供[13-15],同時(shí)局部缺血缺氧也是通過上調(diào)HIF-1α誘導(dǎo)血管新生的主要因素[16]。

        NO和ET是公認(rèn)較為活躍的血管調(diào)節(jié)因子,ET是最強(qiáng)烈的縮血管因子,而 NO則為一種血管舒張因子,二者存在一定的動(dòng)態(tài)平衡,以維持血管舒縮功能和血液流動(dòng)性,一旦這種平衡被破壞,將對血管張力產(chǎn)生很大影響[17-22]。NO從內(nèi)皮釋放后在細(xì)胞外液中彌散,并與血管平滑肌上受體結(jié)合,引起舒血管效應(yīng)。而ET是迄今為止所知的最強(qiáng)的縮血管物質(zhì),缺血缺氧是 ET 大量釋放的最主要因素之一,使小動(dòng)脈、小靜脈收縮,從而改變組織的血液供應(yīng)狀況[23-26]。

        本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,大鼠在缺血性面癱造模后,面神經(jīng)缺損評分明顯降低,血管內(nèi)皮 HIF-1α的表達(dá)和血清NO含量均有不同程度的升高,血清ET含量減少,有可能說明這3類信息因子在面癱發(fā)病后均參與改善缺血狀態(tài)。本實(shí)驗(yàn)初步發(fā)現(xiàn),治療后粗針督脈平刺組大鼠神經(jīng)缺損評分升高,其血管內(nèi)皮HIF-1α表達(dá)和血清NO含量明顯增高,而血清ET含量明顯減少。因此初步認(rèn)為粗針督脈平刺對缺血性面癱大鼠面肌功能的恢復(fù)有良好的改善作用,并且能夠影響HIF-1α、NO和ET這3類信息因子的表達(dá),其作為一種有效治療面癱的方法,可能是通過促進(jìn)組織HIF-1α的表達(dá),調(diào)控血清NO、ET含量而產(chǎn)生療效。

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        ·書 訊·

        《尤益人針灸臨床經(jīng)驗(yàn)集》簡介

        針灸經(jīng)絡(luò)研究所李麗會(huì)主治醫(yī)師主編的《尤益人針灸臨床經(jīng)驗(yàn)集》最近由上??茖W(xué)技術(shù)出版社出版了。該書為名老中醫(yī)尤益人從醫(yī)近70年針灸臨床及學(xué)術(shù)經(jīng)驗(yàn)總結(jié)。全書分4個(gè)部分,第1部分簡要介紹了尤老的生平; 第2部分介紹了尤老的學(xué)術(shù)經(jīng)驗(yàn);第3部分為醫(yī)案醫(yī)話;第4部分為尤老與臨床各學(xué)科協(xié)作,在中西醫(yī)結(jié)合領(lǐng)域所做的貢獻(xiàn)。全書內(nèi)容注重于臨床實(shí)踐的總結(jié),特別是對尤老擅長診療的病癥,不但總結(jié)其理法,并對處方配穴規(guī)律、針灸操作注意事項(xiàng)等做了精當(dāng)?shù)年U述,此外還列舉大量臨床驗(yàn)案,對臨床有重要指導(dǎo)價(jià)值。該書可供中醫(yī)針灸臨床醫(yī)生,或中醫(yī)其他學(xué)科醫(yī)生參考閱覽。

        該書售價(jià)25元(包含郵寄掛號費(fèi)5元)。欲購者請匯款至《上海針灸雜志》編輯部,上海市宛平南路650號,郵編200030。

        Exploration of the Mechanism of Treatment of Rat Ischemic Facial Paralysis by Transverse Insertion of Thick Needles into the Du Meridian

        YU Bin-yan1,XUAN Li-hua1, LV Shan-guang2, WAN Yi-jia2, WEI Ying-zi2, LI Hong-yu2. 1.Zhejiang Hospital of Traditional Chinese Medicine,Hangzhou 310006,China; 2.Zhejiang University of Traditional Chinese Medicine,Hangzhou 310053, China

        ObjectiveTo investigate the efficacy of transverse insertion of thick needles into the Du meridian in treating rat ischemic facial paralysis and preliminarily explore the possible mechanism by which it produces a therapeutic effect.MethodsSixty Wistar rats were randomly allocated to groups A (transverse insertion of thick needles), B (basic Western drugs), C (blank control) and D (sham operation), 15 rats each. A rat model of ischemic facial paralysis was made using a modified vascular occlusion method in all the rats. Facial nerve deficits were scored in every group of rats during treatment. At 1 day after model making, group A was treated by transverse insertion into point Shendao and 4-hour retention of needle, once daily, for a total of 14 days; group B was treated by an oral gavage of prednisone and intraperitoneal injection of vitamine B12, once daily, for a total of 14 days. Groups C and D were not treated. In 4 rats randomly chosen at 3, 7 or 14 days after model making, facial nerve concomitant intrinsic vascular tissue HIF-1αprotein was measured by an immunohistochemical method; serum NO, by enzyme-linked immunosorbent assay; serum ET content, by radioimmunoassay.ResultsAfter 7 days of treatment, the neurological deficit score increased gradually in groups A and B and there was a statistically significant difference compared with after model making in the two groups (P<0.01). After 7 days of treatment, there was a statistically significant difference in the neurological deficit score in groups A and B compared with groups C and D (P<0.05) and between groups C and D (P<0.05). After 14 days of treatment, there was a statistically significant difference in the neurological deficit score between group A or B and group C (P<0.05) and between group B or C and group D (P<0.05). In group A, there was a statistically significant difference in the neurological deficit score after 14 days of treatment compared with after 7 days of treatment (P<0.05). After 3, 7 and 14 days of treatment, there was a statistically significant difference in HIF-1αMOD value in groups A , B and C compared with group D (P<0.01). After 3 and 7 days of treatment, there was a statistically significant difference in HIF-1αMOD value between group A or B and group C (P<0.05). In groups A and B, there was a statistically significant difference in HIF-1αMOD value after 3 and 14 days of treatment compared with after 7 days of treatment (P<0.05). After 3 and 7 days of treatment, there was a statistically significantdifference in serum NO content between group A or B and group D (P<0.01). In groups A and B, there was a statistically significant difference in serum NO content after 7 days of treatment compared with after 3 days of treatment (P<0.05). After 3 and 7 days of treatment, there was a statistically significant difference in serum ET content in groups A , B and C compared with group D (P<0.05). In groups A and B, there was a statistically significant difference in serum ET content after 7 days of treatment compared with after 3 days of treatment (P<0.05).Conclusions Transverse insertion of thick needles into the Du meridian can effectively promote rat’s recovery from ischemic facial paralysis. The mechanism by which it produces a therapeutic effect may be regulating the expression of tissue HIF-1α and the NO and ET contents of serum.

        Acupuncture therapy; Facial paralysis, peripheral; Hypoxia inducible factor; Nitric oxide; Endothelin; Rats

        R2-03

        A

        10.13460/j.issn.1005-0957.2015.03.0256

        1005-0957(2015)03-0256-04

        2014-10-12

        浙江省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(LY12H27007)

        虞彬艷(1985 - ),女,主治醫(yī)師

        宣麗華(1960 - ),女,教授,博士生導(dǎo)師,E-mail:xlh1083@ 163.com

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