白井林 劉薇薇 張同園

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300193；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，天津 300153）

·實(shí)驗(yàn)報(bào)告·

培土生金法對(duì)脾虛證反復(fù)呼吸道感染小鼠免疫功能的影響

白井林1劉薇薇2張同園2

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300193；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，天津 300153）

目的觀(guān)察對(duì)脾氣虛證反復(fù)呼吸道感染（RRTI）小鼠血清IgA、脾細(xì)胞白細(xì)胞介素-2（IL-2）、白細(xì)胞介素-4（IL-4）、γ干擾素（IFN-γ）分泌的影響，探討培土生金法干預(yù)脾氣虛證RRTI小鼠免疫系統(tǒng)的機(jī)制。方法用苦寒瀉下法建立脾氣虛證RRTI小鼠模型，治療組小鼠分別給予不同的藥物處理，用藥8 d后，眼球取血，脫頸椎處死小鼠，無(wú)菌取脾臟，加PBS液研磨后離心取上清液。結(jié)果培土生金法可提高脾虛證RRTI小鼠血清IgA、脾細(xì)胞IL-2、IL-4、IFN-γ分泌水平（P＜0.05）。結(jié)論培土生金法可以提高脾氣虛證RRTI小鼠血清IgA、脾細(xì)胞IL-2、IL-4、IFN-γ分泌水平，改善脾氣虛證RRTI小鼠免疫作用。

反復(fù)呼吸道感染 培土生金法 免疫球蛋白 白細(xì)胞介素

反復(fù)呼吸道感染（RRTI）是指l年以?xún)?nèi)發(fā)生上、下呼吸道感染的次數(shù)頻繁，超出正常發(fā)病頻次范圍，是兒科常見(jiàn)的一種臨床現(xiàn)象［1］。因小兒先天稟賦不足，病情反復(fù)發(fā)作，故患兒易出現(xiàn)面色少華，厭食，大便溏等脾虛證。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，培土生金法，借五行相生的理論，培補(bǔ)脾土，使脾的功能強(qiáng)健，以治療肺臟虧虛的方法。中醫(yī)學(xué)所論之“脾”包涵著豐富的免疫學(xué)內(nèi)容，脾虛證與機(jī)體免疫器官、非特異性免疫、體液免疫、細(xì)胞免疫等方面異常改變均有顯著相關(guān)性［2］。脾臟是體內(nèi)外周的主要免疫器官，在維持機(jī)體正常免疫功能方面發(fā)揮作用。本研究探討培土生金法對(duì)脾虛證RRTI小鼠免疫

功能的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠，體質(zhì)量18~22 g，雌雄各半，共40只，清潔級(jí)，21 d齡幼鼠，由天津中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心提供。所有動(dòng)物進(jìn)食、飲水、活動(dòng)正常，確認(rèn)為健康小白鼠，再將小鼠分籠分組（雌雄異籠），采用混合配方喂養(yǎng)，自由進(jìn)食水，每3日更換墊料，保持小鼠飼養(yǎng)籠內(nèi)清潔衛(wèi)生、室內(nèi)光照充足、環(huán)境通風(fēng)。室溫控制在20~24℃，相對(duì)濕度控制在50%~60%。

1.2 主要試驗(yàn)儀器 100%大黃制劑：大黃購(gòu)自天津中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院（產(chǎn)品批號(hào)：1304013），提取大黃蒽醌類(lèi)成分（天津中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心）。參苓白術(shù)顆粒（北京漢典制藥有限公司生產(chǎn)，3 g/袋）。匹多莫德顆粒 （浙江仙琚制藥股份有限公司生產(chǎn)，規(guī)格2 g：0.4 g/袋）、0.9%氯化鈉注射液、PBS液。測(cè)定試劑盒血清IgA、白細(xì)胞介素-2（IL-2）、白細(xì)胞介素-4（IL-4）、γ干擾素 （IFN-γ）（由天津科瑞杰生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司提供并負(fù)責(zé)測(cè)定）。LD4-2離心儀，電子天平。以上實(shí)驗(yàn)儀器均由天津中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)室（國(guó)家級(jí)實(shí)驗(yàn)室）提供。

1.3 模型及分組 根據(jù)隨機(jī)分組法，將40只實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為4組，分別為參苓白術(shù)散組10只、匹多莫德組10只、正常組10只、模型組10只。用苦寒瀉下的100%大黃（蒽醌類(lèi)成分提取）水煎劑0.5 mL/20 g/d，灌胃8 d。正常組小鼠毛發(fā)順滑，雙目有神，反應(yīng)靈敏，飲食飲水正常，體質(zhì)量日漸增加，模型組小鼠喂飼100%大黃水煎液第2日出現(xiàn)大便便質(zhì)變稀，于第4日逐漸出現(xiàn)攝食量、飲水量減少，活動(dòng)量較前減少，易受驚嚇，出現(xiàn)扎堆現(xiàn)象，隨著灌服大黃水煎劑的時(shí)間延長(zhǎng)，這種現(xiàn)象更為明顯，個(gè)別出現(xiàn)脫肛、活動(dòng)緩慢、反應(yīng)遲鈍。脾氣虛造模成功后，參苓白術(shù)散組和匹多莫德顆粒組開(kāi)始灌胃給藥，每日2次，每次0.5 mg/10 g體質(zhì)量。正常組及模型組每日均以等量生理鹽水灌胃，給藥1周后，禁食禁水1 d，眼球取血，脫頸椎處死后，于無(wú)菌臺(tái)上取小鼠脾臟，在0℃的操作臺(tái)上放入PBS液研磨脾臟。于分離器中分離脾細(xì)胞上清液。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)統(tǒng)計(jì)，計(jì)量資料以（±s）表示，多個(gè)樣本比較采用單因素方差分析，兩兩比較用LSD法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 脾氣虛模型建立 見(jiàn)表1。經(jīng)單因素方差分析，造模前各組間體質(zhì)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。灌服100%大黃水煎液的3組間體質(zhì)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）。

表1 不同組別脾虛模型建立前后小鼠體質(zhì)量變化（±s）

表1 不同組別脾虛模型建立前后小鼠體質(zhì)量變化（±s）

造模前各組比較，P＞0.05；造模后各組與正常組比較，P＜0.05。

體質(zhì)量（g）2 2 . 2 0 0 ± 2 . 4 4 0 2 7 . 5 0 0 ± 2 . 4 1 5 2 3 . 9 0 0 ± 1 . 9 1 1（n = 1 0） 造模后 2 6 . 0 0 0 ± 2 . 9 8 1匹多莫得顆粒組 造模前 2 2 . 9 0 0 ± 2 . 5 5 8（n = 1 0） 造模后 2 5 . 3 0 0 ± 2 . 2 1 3模型組 造模前 2 3 . 0 0 0 ± 1 . 6 3 2（n = 1 0） 造模后 2 4 . 2 0 0 ± 2 . 3 9 4組別正常組 造模前（n = 1 0） 造模后參苓白術(shù)散組 造模前

2.2 參苓白術(shù)散對(duì)脾虛證RRTI小鼠脾細(xì)胞IL-2、IL-4、IFN-γ的影響 見(jiàn)表2。實(shí)驗(yàn)研究顯示脾細(xì)胞IL-2參苓白術(shù)散組與正常組、模型組、匹多莫德顆粒組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；脾細(xì)胞IL-4參苓白術(shù)散組與正常組、模型組、匹多莫德顆粒組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；脾細(xì)胞IFN-γ參苓白術(shù)散組與正常組、模型組、匹多莫德顆粒組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜0.05。參苓白術(shù)散可以提高脾虛證RRTI小鼠脾細(xì)胞IL-2、IL-4、IFN-γ水平。

表2 不同組別小鼠脾細(xì)胞IL-2、IL-4、IFN-γ含量（±s）

表2 不同組別小鼠脾細(xì)胞IL-2、IL-4、IFN-γ含量（±s）

與參苓白術(shù)散組比較，△P＜0.05。

組別 n I F N -γ I L -2 I L -4正常組 1 0 0 . 8 2 2 ± 0 . 2 3 1△參苓白術(shù)散組 1 0 1 . 1 2 7 ± 0 . 2 4 4△匹多莫德顆粒組 1 0 0 . 9 0 5 ± 0 . 2 0 7△0 . 3 0 7 ± 0 . 0 5 9△0 . 3 8 1 ± 0 . 0 9 3△0 . 3 5 9 ± 0 . 0 5 8 0 . 4 5 1 ± 0 . 0 6 8 0 . 3 1 3 ± 0 . 0 5 6△0 . 3 2 2 ± 0 . 0 7 4△模型組 1 0 0 . 8 6 6 ± 0 . 1 8 5△0 . 2 8 4 ± 0 . 0 3 1△0 . 3 6 9 ± 0 . 0 4 9△

表3 不同組別小鼠血清IgA含量組間比較（ng，±s）

表3 不同組別小鼠血清IgA含量組間比較（ng，±s）

與正常組比較，△P＜0.05；與模型組比較，▲P＜0.05。

組別 n正常組 1 0參苓白術(shù)散組 1 0體質(zhì)量（g）1 . 2 1 6 ± 0 . 4 1 3 1 . 8 2 0 ± 0 . 3 0 6△▲匹多莫得顆粒組 1 0 1 . 2 1 6 ± 0 . 5 8 7△▲模型組 1 0 1 . 0 6 6 ± 0 . 2 2 3

2.3 參苓白術(shù)散對(duì)脾虛證RRTI小鼠血清IgA的影響見(jiàn)表3。實(shí)驗(yàn)研究顯示血清IgA參苓白術(shù)散組與正常組、模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與匹多莫德顆粒組相當(dāng)（P＞0.05）。參苓白術(shù)散可以提高脾氣虛小鼠血清IgA水平。

3 討 論

培土生金法是以中醫(yī)五行學(xué)說(shuō)、臟腑學(xué)說(shuō)及肺主氣理論為基礎(chǔ)形成的一種治療方法。即通過(guò)調(diào)補(bǔ)脾胃，強(qiáng)健后天之本，益其生化之源，使氣血得充，以治肺氣不足的一種治療措施。脾被稱(chēng)為后天之本，脾氣充實(shí)，運(yùn)化功能健全，則正氣充足，不易受到邪氣的侵襲；脾氣虛不能實(shí)表護(hù)衛(wèi)可致機(jī)體防御能力下降。研究表明中醫(yī)學(xué)的“脾”包涵著豐富的免疫學(xué)內(nèi)容，而脾虛證與免疫器官、非特異性免疫、體液免疫、細(xì)胞免疫以及免疫遺傳學(xué)等方面異常改變均有顯著相關(guān)性［2］。脾臟是體內(nèi)外周的主要免疫器官，在維持機(jī)體正常免疫功能方面發(fā)揮作用。脾臟內(nèi)含大量由骨髓干細(xì)胞發(fā)育而來(lái)的B細(xì)胞和大量T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞，是各種免疫細(xì)胞居住、增殖并進(jìn)行免疫應(yīng)答及產(chǎn)生免疫效應(yīng)物質(zhì)，合成巨噬細(xì)胞增強(qiáng)激素的主要場(chǎng)所［3］。

T、B淋巴細(xì)胞參與機(jī)體的特異性免疫，在抗原刺激下，T細(xì)胞轉(zhuǎn)化為致敏淋巴細(xì)胞，通過(guò)釋放淋巴因子，參與細(xì)胞免疫過(guò)程；B細(xì)胞轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞，合成免疫球蛋白，參與體液免疫過(guò)程。NK細(xì)胞活性代表機(jī)體的天然防御功能，其對(duì)靶細(xì)胞的作用范圍遠(yuǎn)大于殺傷性T細(xì)胞，能殺傷某些病毒感染細(xì)胞，而對(duì)正常未感染細(xì)胞無(wú)殺傷作用。IL-2是T細(xì)胞亞群的生長(zhǎng)因子，與IL-4可促進(jìn)活化B細(xì)胞的增殖，IFN-γ為廣譜抗病毒，可增強(qiáng)NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞的活力。

本研究根據(jù)中醫(yī)學(xué)發(fā)病學(xué)理論，采用苦寒瀉下法復(fù)制脾虛證RRTI小鼠模型。參苓白術(shù)散作為培土生金法的代表方劑，通過(guò)培補(bǔ)脾土以增強(qiáng)肺氣，提高免疫力。本研究表明參苓白術(shù)散可提高脾虛證RRTI小鼠血清IgA；在該方的治療后，脾虛證RRTI小鼠脾細(xì)胞IL-2、IL-4、IFN-γ顯著增高。結(jié)果提示，培土生金法可通過(guò)提高血清IgA、脾細(xì)胞IL-2、IL-4、IFN-γ，增強(qiáng)T、B、NK細(xì)胞反應(yīng)，從而提高機(jī)體免疫功能的作用。

［1］ 中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)呼吸學(xué)組，中華兒科雜志編輯委員會(huì).反復(fù)呼吸道感染的臨床概念和處理原則［J］.中華兒科雜志，2008，46（2）：108-109.

［2］ 修宗昌，余紹源，黃穗平.脾虛免疫學(xué)機(jī)制研究的回顧與思考［J］.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2003，10（4）：10-13.

［3］ 段永強(qiáng)，成映霞，程容，等.脾虛證進(jìn)程中小鼠特異性/非特異性免疫功能變化及中藥的干預(yù)作用［J］.中國(guó)老年學(xué)雜志，2011，31（15）：2874-2876.

R285.5

A

1004-745X（2015）02-0281-02

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.02.034

2014-09-18）