刁海濤，鄭秀娟，周 飛，姚維劍，韓 雨，賀紹君

（安徽科技學(xué)院，安徽 鳳陽 233100）

近年來隨著養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展，肉雞養(yǎng)殖多采用規(guī)?；?、集約化的養(yǎng)殖模式.此種養(yǎng)殖模式的肉雞生產(chǎn)容易由于飼養(yǎng)管理水平低下導(dǎo)致各種各樣的應(yīng)激發(fā)生，影響?zhàn)B殖者的收益.應(yīng)激已成為影響當(dāng)前和今后一段時間影響肉雞養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的重要因素.關(guān)于動物應(yīng)激反應(yīng)機制的研究表明，應(yīng)激時機體會釋放糖皮質(zhì)激素以適應(yīng)應(yīng)激環(huán)境，且表明應(yīng)激損傷腸道屏障，繼而腸道內(nèi)毒素侵入體內(nèi)是導(dǎo)致一系列應(yīng)激癥狀的核心[1].例如在熱應(yīng)激過程中，胃腸道是熱應(yīng)激損傷的敏感部位，最容易發(fā)生缺血缺氧性損害，其結(jié)構(gòu)和屏障功能也最易受到破壞，導(dǎo)致腸道通透性增加，進(jìn)而引起腸源性感染，嚴(yán)重者可引起全身炎癥反應(yīng)綜合征，甚至多臟器功能衰竭而死亡[2].研究表明，應(yīng)激時使肉雞的消化機能減退，生產(chǎn)性能降低，并且消化道內(nèi)各種消化酶活性降低，造成對飼料的消化率降低，損傷腸道系統(tǒng)[3-5].家禽胃腸道微生物區(qū)系的平衡對維持健康起著重要作用.本試驗以對應(yīng)激特別敏感的肉雞為研究對象用胸肌注射糖皮質(zhì)激素的方法模擬動物應(yīng)激反應(yīng)探討應(yīng)激條件下肉雞盲腸內(nèi)的主要細(xì)菌群落的變化以及通過在飲水中添加維生素C的方式，從腸道微生物菌群的角度研究應(yīng)激對肉雞的影響以及為應(yīng)激防治提供切實可行的措施.

1 材料與方法

1.1 試驗材料

AA肉雞、麥康凱培養(yǎng)基、MRS培養(yǎng)基、TPY培養(yǎng)基（上海盛思生化科技有限公司）、隔水式恒溫培養(yǎng)箱（上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）、無菌操作臺（蘇凈集團(tuán)安泰公司制造）、手提式壓力蒸汽滅菌器（上海申安醫(yī)療器械廠）等.

1.2 試驗設(shè)計

試驗選用1日齡的AA肉雞60隨機分為3組，分別為對照組、應(yīng)激組和VC+應(yīng)激組，每組20只肉雞，試驗從21d開始，對照組正常飼養(yǎng)生長，應(yīng)激組連續(xù)注射地塞米松（2mg/kg體重）7d，VC+應(yīng)激組注射地塞米松（2mg/kg體重）的同時，飲水按0.2%濃度劑量添加VC至42d，正式試驗3w.

1.3 飼養(yǎng)環(huán)境管理

進(jìn)雛前搞好消毒工作進(jìn)雛前7天沖洗地面墻壁及育雛設(shè)備.進(jìn)雛前5天甲醛熏蒸消毒按每立方米空間30ml甲醛15g高錳酸鉀對雞舍進(jìn)行熏蒸.試驗雞采用籠養(yǎng)方式按7d接種新城疫，滴鼻或點眼，14d飲水接種法氏囊疫苗進(jìn)行免疫.自由采食和飲水定期清理糞便預(yù)試2w，定時觀察溫度、濕度，控制好飼養(yǎng)環(huán)境，第3w進(jìn)入正式試驗期.

1.4 測定指標(biāo)與方法

1.4.1 測量指標(biāo)

分別于21、28、35、42日齡每組隨機選取5只雞頸靜脈放血法處死，打開腹腔結(jié)扎盲腸兩端并剪下，放入無菌樣品盒中待測.采用傾注平板法對盲腸中大腸桿菌、乳酸桿菌、雙歧桿菌計數(shù).

1.4.2 具體方法

（1）滅菌.試驗前一天把事先準(zhǔn)備好的試驗用品高壓蒸汽滅菌.

（2）稀釋.無菌操作臺內(nèi)把盲腸剪開，稱取盲腸內(nèi)容物0.5g，放入無菌的試管中，加入滅菌的生理鹽水4.5mL，振蕩,制成10-1稀釋液，用移液槍準(zhǔn)確吸取該稀釋液0.5mL到盛有4.5mL事先滅菌的試管中，振蕩，制成10-2稀釋液，依次進(jìn)行稀釋到10-7.

（3）接種和培養(yǎng).大腸桿菌利用麥康凱培養(yǎng)基計數(shù)，乳酸桿菌利用MRS培養(yǎng)基計數(shù)，雙歧桿菌利用TPY培養(yǎng)基計數(shù)，分別吸取10-5和10-6稀釋液于無菌培養(yǎng)皿中,每個稀釋度2個重復(fù).

（4）計數(shù).細(xì)菌進(jìn)行培養(yǎng)后按可數(shù)性原則計數(shù).大腸桿菌選取粉紅色或紅色表面光滑、凸起、邊緣整齊不透明、直徑2～2.5mm的圓形菌落進(jìn)行計數(shù).乳酸桿菌選取乳白色表面光滑、凸起、邊緣整齊不透明、直徑1～2mm的菌落進(jìn)行計數(shù).雙歧桿菌選取菌落光滑、凸圓、邊緣完整、乳脂至白色的雙歧桿菌進(jìn)行計數(shù).

1.5 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)統(tǒng)計利用SPSS18.0軟件的ANOVA進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，用LSD法進(jìn)行各組間多重比較.P<0.05和P<0.01分別為差異顯著和極顯著水平.

2 結(jié)果

2.1 應(yīng)激對肉雞盲腸內(nèi)乳酸桿菌的影響

表1 應(yīng)激對肉雞盲腸內(nèi)乳酸桿菌的影響

由表1可知，試驗開始時21d肉雞盲腸內(nèi)乳酸桿菌數(shù)量沒有明顯變化，差異不顯著(P>0.05).在28d、35d、42d時，與對照組相比，應(yīng)激組和VC+應(yīng)激組肉雞盲腸內(nèi)乳酸桿菌數(shù)量明顯降低，且差異極顯著(P<0.01).VC+應(yīng)激組與應(yīng)激組相比，肉雞盲腸內(nèi)乳酸桿菌數(shù)量均升高，且差異極顯著(P<0.01).

2.2 應(yīng)激對肉雞盲腸內(nèi)雙歧桿菌的影響

由表2可知，試驗開始時21d肉雞盲腸內(nèi)雙歧桿菌數(shù)量差異不顯著(P>0.05).在28d時，各實驗組肉雞盲腸內(nèi)雙歧桿菌數(shù)量差異不顯著(P>0.05).在35d和42d時，與對照組相比，應(yīng)激組和VC+應(yīng)激組肉雞盲腸內(nèi)雙歧桿菌數(shù)量均明顯下降，差異顯著或極顯著(P<0.05或P<0.01)；VC+應(yīng)激組與應(yīng)激組相比，肉雞盲腸內(nèi)雙歧桿菌數(shù)量有明顯升高，差異極顯著(P<0.01).

表2 應(yīng)激對肉雞盲腸內(nèi)雙歧桿菌的影響

2.3 應(yīng)激對肉雞盲腸內(nèi)大腸桿菌的影響

由表3可知，試驗開始時21d肉雞盲腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)量無明顯差異(P>0.05).在28d時，與對照組相比，應(yīng)激組和VC+應(yīng)激組肉雞盲腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)量均明顯升高，且差異極顯著 (P<0.01)；VC添加組與應(yīng)激組相比，(P>0.05).在35d時，與對照組相比，應(yīng)激組和VC+應(yīng)激組肉雞盲腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)量均升高極顯著 (P<0.01)；VC+應(yīng)激組與應(yīng)激組相比，肉雞盲腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)量有明顯下降(P<0.01).在42d與對照組相比，應(yīng)激組肉雞盲腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)量增高了9.03%，差異極顯著(P<0.01)；VC+應(yīng)激組與應(yīng)激組相比，肉雞盲腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)量明顯降低，且差異極顯著(P<0.01).

表3 應(yīng)激對肉雞盲腸內(nèi)大腸桿菌的影響

3 討論

3.1 應(yīng)激與乳酸桿菌的關(guān)系

乳酸桿菌目前是廣泛應(yīng)用的一種腸道益生菌，它是溫血動物腸道中的優(yōu)勢菌群[6].雖然乳酸桿菌不是雞腸道內(nèi)的優(yōu)勢菌群，但普遍認(rèn)為乳酸桿菌是雞腸道的正常菌群成員[7,8].應(yīng)激時會對肉雞腸道內(nèi)的微生物菌群產(chǎn)生一定影響，研究報道，受到熱應(yīng)激時雞空腸和盲腸中的乳酸桿菌群數(shù)量減少，微生態(tài)平衡被破壞[9].本實驗結(jié)果顯示，應(yīng)激時，28d、35d、42d肉雞盲腸內(nèi)的乳酸桿菌的數(shù)量降顯著（P<0.01），與上述結(jié)果是一致的.同時在飲水中添加VC可以緩解應(yīng)激對肉雞腸道的損傷作用，有助于恢復(fù)腸道內(nèi)乳酸桿菌的數(shù)量.由上述可知，腸道是應(yīng)激損傷的主要靶器官，盲腸內(nèi)的乳酸桿菌的穩(wěn)定對腸道健康的維護(hù)有重要的作用，應(yīng)激時乳酸桿菌的平衡被打破，就會引起乳酸桿菌的數(shù)量發(fā)生變化，造成對機體的影響.

3.2 應(yīng)激與雙歧桿菌的關(guān)系

雙歧桿菌和乳酸桿菌一樣都是腸道內(nèi)正常的菌群，在維護(hù)腸道健康和微生物平衡上具有重要作用.雙歧桿菌作為機體腸道內(nèi)的優(yōu)勢菌、指示菌之一，對人體有著重要的保健功能[10,11].研究報道，應(yīng)激時會使肉雞空腸和盲腸內(nèi)的雙歧桿菌的數(shù)量減少，微生態(tài)平衡被破壞，試驗結(jié)果顯示，應(yīng)激時35、42日齡肉雞盲腸內(nèi)雙歧桿菌數(shù)量顯著降低 (P<0.01或P<0.05).添加VC能夠使應(yīng)激肉雞盲腸內(nèi)雙歧桿菌有所升高，且差異顯著.由上述可知，應(yīng)激時雙歧桿菌的平衡被打破，引起雙歧桿菌的數(shù)量發(fā)生變化，會導(dǎo)致盲腸微生物菌群失調(diào)，容易誘發(fā)各種疾病，VC的添加在一定程度上緩解了應(yīng)激損傷.

3.3 應(yīng)激與大腸桿菌的關(guān)系

大腸桿菌是動物腸道的正常菌群，一般不致病，但在不良的條件下會使畜禽致病.熱應(yīng)激條件下，就會導(dǎo)致大腸桿菌數(shù)量增高，破壞腸道微生態(tài)的平衡影響疾病發(fā)生[12].白樹民等對發(fā)生慢性應(yīng)激大鼠腸道微生態(tài)進(jìn)行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)大鼠糞便中益生菌數(shù)量減少，而大腸桿菌的數(shù)量相對增多[13].本試驗研究結(jié)果顯示，試驗開始時即肉雞21日齡時盲腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)量無顯著差別(P>0.05).28、35、42日齡應(yīng)激組肉雞盲腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)量顯著增高 (P<0.01)，VC添加組在一定程度上減少了大腸桿菌的增高.由上述可知，盲腸內(nèi)含有一定數(shù)量的大腸桿菌，與其他微生物構(gòu)成盲腸內(nèi)的微生物系統(tǒng)，共同維持著腸道內(nèi)微生態(tài)的平衡，應(yīng)激時大腸桿菌的平衡被打破，就會引起大腸桿菌的數(shù)量發(fā)生變化，導(dǎo)致大腸桿菌病的發(fā)生，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失.

4 小結(jié)

本試驗結(jié)果表明應(yīng)激可導(dǎo)致肉雞盲腸乳酸桿菌和雙歧桿菌的數(shù)量顯著降低，大腸桿菌的數(shù)量顯著提高，導(dǎo)致盲腸菌群失調(diào)，在飲水中添加一定量的VC在一定程度上可緩解應(yīng)激損傷，恢復(fù)腸道菌群平衡.

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