高 飛，鄭 浩，趙學(xué)芹，顧曉瓊，邱先桃，王潔琳，陳小娟，郭彩嬌

膽道閉鎖是由于肝臟內(nèi)外膽管纖維化導(dǎo)致膽汁排出障礙所致，該病在亞洲發(fā)病率較高。雖然Kasai 手術(shù)能夠解決部分膽道閉鎖患兒膽管梗阻及膽汁引流問題，且可獲得較好的短期療效，但日后患兒肝臟、膽管炎癥和纖維化仍會(huì)持續(xù)進(jìn)行，大多數(shù)膽道閉鎖行Kasai 手術(shù)患兒最終因?yàn)閲?yán)重的肝硬化和門靜脈高壓威脅生命而需要進(jìn)行肝移植手術(shù)［1］。因此，探討膽道閉鎖的病因?qū)︻A(yù)防和治療該病顯得尤為重要。目前膽道閉鎖病因尚不清楚，但多傾向于大量細(xì)胞因子尤其是炎性因子。Hepcidin 是一種分子量較小的多肽，由肝臟生成并分泌，其與炎性反應(yīng)、體內(nèi)鐵代謝及貧血存在密切關(guān)系，近年來已引起人們廣泛關(guān)注［2］。白介素6 (IL－6)作為具有代表性的炎性細(xì)胞因子，在膽道閉鎖形成的兩個(gè)病理過程中(膽管炎性反應(yīng)和肝纖維化過程)均發(fā)揮了重要作用。本研究采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)檢測(cè)膽道閉鎖合并貧血患兒血清Hepcidin 和IL－6 水平，旨在探討Hepcidin 和IL－6 在膽道閉鎖合并貧血患兒中的臨床意義及其關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012 年5 月—2014 年2 月我院收治的50 例膽道閉鎖合并貧血患兒作為觀察組，以Hb ＜120 g/L 作為貧血的診斷標(biāo)準(zhǔn)，排除肝硬化〔天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)/血小板(PLT)比值指數(shù)(APRI) ＜0.945［3］〕、腫瘤及其他原因?qū)е碌呢氀?。選擇同期50 例體檢健康者作為對(duì)照組，均無貧血、肝膽疾病病史。兩組受檢者男女比例均為1∶1。

1.2 方法 兩組受檢者均于清晨空腹抽血，采用Sysmex－5000 血細(xì)胞分析儀檢測(cè)患者Hb、PLT，剩余全血3 000 r/min離心10 min，分離血清，采用HITACH 7600 生化分析儀檢測(cè)血清AST 水平，確保觀察組納入患者的APRI ＜0.945。剩余血清置－80 ℃冰箱保存，采用ELISA 檢測(cè)兩組受檢者血清Hepcidin 和IL－6 水平，Hepcidin 試劑盒購自美國(guó)DRG 公司，IL－6 試劑盒購自R＆D 公司，操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 13.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以(x ±s)表示，采用兩獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn);變量間相關(guān)性采用Spearman 相關(guān)性分析。以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清Hepcidin 及IL－6 水平 觀察組血清Hepcidin 及IL－6水平均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P ＜0.05，見表1)。

表1 兩組血清Hepcidin 和IL－6 水平比較Table 1 Comparison of the levels of serum Hepcidin and IL－6 between the two groups

2.2 相關(guān)性分析 將觀察組患兒Hb 分別與血清Hepcidin、IL－6進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示膽道閉鎖合并貧血患兒的Hb與Hepcidin、IL－6 均無直線相關(guān)關(guān)系(P ＞0.05);觀察組患兒血清Hepcidin 與IL－6 進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示膽道閉鎖合并貧血患兒血清Hepcidin 與IL－6 呈正相關(guān)(r =0.385，P＜0.05)。

3 討論

膽道閉鎖病因不同，但臨床表現(xiàn)相同。貧血作為該病的伴隨癥狀，可能參與膽道閉鎖的整個(gè)發(fā)病過程。多數(shù)研究者認(rèn)為，炎癥狀態(tài)下體內(nèi)巨噬細(xì)胞等產(chǎn)生的IL－6、IL－1 等細(xì)胞因子刺激肝細(xì)胞合成Hepcidin，促使Hepcidin 表達(dá)升高。過度表達(dá)的Hepcidin 可與小腸上皮基底面和肝細(xì)胞、巨噬細(xì)胞表面的特定蛋白結(jié)合，使之內(nèi)化降解，導(dǎo)致腸道吸收鐵減少，巨噬細(xì)胞與干細(xì)胞釋放鐵受阻導(dǎo)致鐵利用障礙，臨床上出現(xiàn)貧血及肝臟內(nèi)鐵過度負(fù)荷［4］。過度負(fù)荷的鐵作為一種強(qiáng)力催化劑，可以啟動(dòng)或催化Haber－Weiss 反應(yīng)［5］，促進(jìn)氧自由基的產(chǎn)生，導(dǎo)致肝細(xì)胞亞細(xì)胞膜磷脂過氧化反應(yīng)，特別是對(duì)線粒體和微粒體膜的過氧化損傷，而其反應(yīng)產(chǎn)物可加重炎性反應(yīng)及刺激肝星形細(xì)胞，促進(jìn)膠原的合成，形成肝纖維化，進(jìn)而可發(fā)展為肝硬化。與此同時(shí)，Hepcidin 是由肝臟合成并分泌的，肝細(xì)胞的病變可能會(huì)影響Hepcidin 的合成，該結(jié)論得到多數(shù)研究的支持，Detivaud 等［6］首先發(fā)現(xiàn)隨著肝硬化程度加重，肝臟Hepcidin 的mRNA 和尿Hepcidin 水平均明顯下降。因此，本研究中入選的研究對(duì)象以APRI ＜0.945 作為肝纖維化的排除標(biāo)準(zhǔn)。另外，IL－6作為炎性因子，除了導(dǎo)致肝細(xì)胞大量壞死外，還可促進(jìn)成纖維細(xì)胞增生和I、Ⅲ型膠原mRNA 表達(dá)，引起細(xì)胞外基質(zhì)增多［7］;參與轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)、腫瘤壞死因子(TNF)相互作用并形成正反饋循環(huán)，加劇肝纖維化的進(jìn)程［8］。

國(guó)內(nèi)外大量文獻(xiàn)顯示，貧血與Hepcidin 及IL－6 存在相關(guān)性，如Detivaud 等［6］的研究結(jié)果顯示，Hepcidin mRNA 合成水平 與 血Hb 水 平 呈 正 相 關(guān);Sharma 等［9］研 究 結(jié) 果 顯 示，Hepcidin與Hb 呈負(fù)相關(guān);而本研究結(jié)果顯示，Hb 與Hepcidin、IL－6均無直線相關(guān)關(guān)系。這可能與研究對(duì)象不同有關(guān)，本研究入選的研究對(duì)象包含鐵儲(chǔ)備顯著減少的典型缺鐵性貧血患兒，另外與樣本量小也有關(guān)。綜上所述，膽道閉鎖合并貧血患兒Hepcidin 的異常增多引起鐵代謝、炎性因子的異常變化，無論是通過內(nèi)分泌機(jī)制還是體循環(huán)均對(duì)肝臟纖維化的進(jìn)程起到了重要作用，為膽道閉鎖的病因?qū)W研究提供了一條新的思路。

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4 Martinelli AL，Ramalho LN，Zucoloto AS. Hepatic stellate cells in hepatitis C patients:Relationship with liver iron deposits and severity of liver disease ［J］. J Gastroenteml Hepatol，2004，19 (1):91－98.

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