王 爽 陳 偉 阮 棟 王 麗 鄭春田 王勝林 林映才

(廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物科學(xué)研究所，畜禽育種國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，農(nóng)業(yè)部華南動(dòng)物營養(yǎng)與飼料重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東省動(dòng)物育種與營養(yǎng)公共實(shí)驗(yàn)室，廣東省畜禽育種與營養(yǎng)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州 510640)

核黃素(riboflavin)又稱維生素B2，在動(dòng)物機(jī)體內(nèi)轉(zhuǎn)化為黃素單核苷酸(FMN)和黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD)，通過參與構(gòu)成各種黃素酶的輔基，在生物氧化過程中作為遞氫體，與糖、脂肪和蛋白質(zhì)的代謝密切相關(guān)，具有提高蛋白質(zhì)沉積，提高飼料利用率，促進(jìn)動(dòng)物正常發(fā)育等功能［1］。王鑫等［2］對(duì)五龍鵝的研究表明，飼糧添加5.0 mg/kg維生素B2對(duì)5～16周齡五龍鵝的屠宰率、胸肌率、腿肌率、腹脂率、亮度(L*)值、紅度(a*)值、剪切力及血清甘油三酯和膽固醇含量均有顯著影響。飼糧中添加維生素B2能改善1～21日齡黃羽肉雞的產(chǎn)蛋性能和免疫器官指數(shù)，提高機(jī)體的抗氧化能力［3］。唐靜等［4］研究表明，核黃素的缺乏會(huì)顯著降低北京鴨的產(chǎn)蛋性能及血漿抗氧化功能。Levin等［5］的研究也表明核黃素的缺乏會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞膜流動(dòng)性和功能的改變，從而降低細(xì)胞應(yīng)對(duì)氧化損傷的能力。目前對(duì)于水禽核黃素的試驗(yàn)研究較少，使得當(dāng)前實(shí)際產(chǎn)蛋中蛋鴨核黃素的使用缺乏足夠的試驗(yàn)依據(jù)，多數(shù)添加水平過高，造成飼料成本的增加和浪費(fèi)。本試驗(yàn)擬依據(jù)龍巖山麻鴨產(chǎn)蛋特點(diǎn)，通過向飼糧中添加不同水平核黃素，綜合比較其對(duì)蛋鴨產(chǎn)蛋性能、蛋品質(zhì)、血液生化及抗氧化指標(biāo)影響，探索核黃素在蛋鴨上的應(yīng)用效果，為核黃素在產(chǎn)蛋上的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)采用單因子完全隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，將504只健康的22周齡福建龍巖山麻鴨按體重一致的原則，隨機(jī)分為7個(gè)組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)12只。各組核黃素添加水平分別為0(Ⅰ組)、3(Ⅱ組)、6(Ⅲ組)、9(Ⅳ組)、12(Ⅴ組)、15(Ⅵ組)、18 mg/kg(Ⅶ組)。試驗(yàn)期12周，單籠飼養(yǎng)。育雛期和育成期按常規(guī)飼養(yǎng)和免疫程序免疫接種。試驗(yàn)期間每天記錄07:00、14:00和20:00的溫度、濕度及天氣情況。

1.2 試驗(yàn)飼糧

采用玉米－豆粕型基礎(chǔ)飼糧，參照本課題組研究結(jié)果，代謝能、粗蛋白質(zhì)、氨基酸及鈣水平保持一致?；A(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。飼糧核黃素含量依照GB/T 14701—2002檢測。

1.3 測定指標(biāo)

1.3.1 產(chǎn)蛋性能

試驗(yàn)期間，根據(jù)采食狀況調(diào)整飼料飼喂量，保證試驗(yàn)鴨采食量一致。準(zhǔn)確記錄試驗(yàn)鴨每日蛋重、產(chǎn)蛋數(shù)量、畸形蛋［蛋過小，形狀不規(guī)則，蛋殼異常(軟殼蛋、螺紋、麻殼、砂殼等)］數(shù)量和重量，計(jì)算產(chǎn)蛋率、平均蛋重、日采食量、料蛋比及日產(chǎn)蛋重。

1.3.2 蛋品質(zhì)指標(biāo)

試驗(yàn)進(jìn)行8周后，每周采集蛋樣。每個(gè)重復(fù)采集4枚蛋，用于測定蛋形指數(shù)、蛋殼強(qiáng)度、哈氏單位、蛋白高度、蛋黃色澤及蛋黃重。蛋形指數(shù)用數(shù)顯游標(biāo)卡尺量出其縱徑和橫徑測算蛋形指數(shù)(蛋形指數(shù)=縱徑/橫徑);蛋殼強(qiáng)度、哈氏單位、蛋白高度和蛋黃色澤由ORKA全自動(dòng)蛋品分析儀(EA-01，ORKA Food Technology)和強(qiáng)度儀(EFR-01)測定，測定在48 h內(nèi)完成。分離蛋黃并稱重，計(jì)算蛋黃比例。

1.3.3 血液生化指標(biāo)

試驗(yàn)進(jìn)行12周后，每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)抽取2只試驗(yàn)鴨，翅靜脈采血15 mL于抗凝采血管中，其中5 mL立即測定血液T淋巴細(xì)胞增殖率及紅細(xì)胞谷胱甘肽還原酶活性系數(shù)(EGRAC)，剩余10 mL在4℃下3 000 r/min離心制備血漿。測定血漿中核黃素、卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)、皮質(zhì)醇、還原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量及總超氧化物岐化酶(T-SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性。采用噻唑蘭(MTT)法測定血液T淋巴細(xì)胞增殖率。EGRAC參考Nichoalds［6］的方法進(jìn)行測定。血漿中核黃素含量檢測參考韋京豫等［7］的檢測方法。血漿中 GSH、GSSG含量及T-SOD活性采用紫外可見光分光光度儀(Biomate 5)檢測，試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet(air-dry basis) %

1.3.4 肝臟指標(biāo)

試驗(yàn)鴨采血后放血致死。打開腹腔，取出肝臟－80℃凍存，乙醚抽提法測定肝臟脂肪含量。利用紫外可見光分光光度儀檢測肝臟中GSH-Px、黃嘌呤氧化酶(XOD)和T-SOD活性，試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。

1.4 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)采用SAS 9.12統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，對(duì)F檢驗(yàn)顯著的效應(yīng)采用Duncan氏法進(jìn)行均數(shù)多重比較，差異顯著水平為P＜0.05。

2 結(jié)果

2.1 飼糧核黃素水平對(duì)籠養(yǎng)蛋鴨產(chǎn)蛋性能的影響

如表2所示，飼糧核黃素水平對(duì)蛋鴨產(chǎn)蛋率、平均蛋重、日采食量、料蛋比及日產(chǎn)蛋重均無顯著影響(P＞0.05)，但隨飼糧核黃素水平的增加，蛋鴨產(chǎn)蛋率有先升高后下降的趨勢。當(dāng)飼糧核黃素水平為6 mg/kg(Ⅲ組)時(shí)，產(chǎn)蛋率、平均蛋重、日產(chǎn)蛋重均達(dá)到最大值，料蛋比最低，但各組間差異不顯著(P＞0.05)。

表2 飼糧核黃素水平對(duì)籠養(yǎng)蛋鴨產(chǎn)蛋性能的影響Table 2 Effects of dietary riboflavin level on laying performance of laying ducks in cage

2.2 飼糧核黃素水平對(duì)籠養(yǎng)蛋鴨蛋品質(zhì)的影響

如表3所示，飼糧核黃素水平對(duì)蛋鴨蛋形指數(shù)、蛋殼強(qiáng)度、蛋黃重、蛋黃比例均無顯著影響(P＞0.05)。隨飼糧核黃素水平的升高，哈氏單位和蛋白高度先升高后下降，Ⅲ組哈氏單位顯著高于Ⅰ、Ⅴ和Ⅵ組(P＜0.05)，Ⅲ組蛋白高度顯著高于Ⅰ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ和Ⅶ組(P＜0.05)。隨飼糧核黃素水平的升高蛋黃色澤呈先升高后下降的趨勢(P=0.08)，以飼糧核黃素水平(X)和蛋黃色澤(Y)進(jìn)行回歸分析，回歸方程為 Y= －0.001 55X2+0.001 04X+4.661(P=0.036 7)。

表3 飼糧核黃素水平對(duì)籠養(yǎng)蛋鴨蛋品質(zhì)的影響Table 3 Effects of dietary riboflavin level on egg quality of laying ducks in cage

2.3 飼糧核黃素水平對(duì)籠養(yǎng)蛋鴨血液生化指標(biāo)的影響

如表4所示，飼糧核黃素水平對(duì)血液T淋巴細(xì)胞增殖率有顯著影響(P＜0.05)，隨飼糧核黃素水平的升高，血液皮質(zhì)醇、E2和FSH含量先升高后降低，分別在Ⅳ、Ⅲ、Ⅲ組達(dá)到最大值，但飼糧核黃素水平對(duì)血液皮質(zhì)醇和E2含量影響不顯著(P＞0.05)，對(duì)血液 FSH 含量影響顯著(P＜0.05)。飼糧核黃素水平對(duì)血液核黃素含量和EGRAC影響顯著(P＜0.05)，EGRAC 先下降后升高，且Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組顯著低于Ⅰ組(P＜0.05)。

表4 飼糧核黃素水平對(duì)籠養(yǎng)蛋鴨血液生化指標(biāo)的影響Table 4 Effects of dietary riboflavin level on blood biochemical parameters of laying ducks in cage

2.4 飼糧核黃素水平對(duì)籠養(yǎng)蛋鴨抗氧化指標(biāo)的影響

如表5所示，飼糧核黃素水平顯著影響血漿及肝臟大多數(shù)抗氧化指標(biāo)(P＜0.05)。Ⅱ、Ⅲ組血漿T-SOD活性顯著低于Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ組(P＜0.05);血漿GSH-Px活性呈先升高后下降的趨勢，但各組差異不顯著(P＞0.05);Ⅵ組血漿GSH含量顯著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組(P＜0.05);各組血漿 GSSG 含量差異不顯著(P＞0.05)。Ⅰ、Ⅱ組肝臟T-SOD活性顯著低于Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ組(P＜0.05);各組肝臟 GSHPx活性差異不顯著(P＞0.05);Ⅱ、Ⅲ組肝臟 XOD活性顯著高于Ⅰ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ組(P＜0.05)，Ⅰ組最低。

表5 飼糧核黃素水平對(duì)籠養(yǎng)蛋鴨抗氧化指標(biāo)的影響Table 5 Effects of dietary riboflavin level on antioxidant parameters of laying ducks in cage

3 討 論

3.1 飼糧核黃素水平對(duì)籠養(yǎng)蛋鴨產(chǎn)蛋性能的影響

本試驗(yàn)中飼糧核黃素水平對(duì)蛋鴨產(chǎn)蛋性能影響不顯著，但當(dāng)飼糧核黃素水平為6 mg/kg時(shí)，平均蛋重、日產(chǎn)蛋重均達(dá)到最大值。以往研究與本試驗(yàn)結(jié)果不盡相同?；羲歼h(yuǎn)等［8］研究結(jié)果表明，飼糧中添加10 mg/kg核黃素能顯著提高籠養(yǎng)生長期蛋鴨的產(chǎn)蛋性能，調(diào)節(jié)激素代謝及促進(jìn)免疫器官的生長發(fā)育。而在蛋種雞方面，陳雷等［9］在飼糧中添加 10.8、14.4 mg/kg 的維生素 B2對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋性能影響不顯著。任轉(zhuǎn)龍等［10］對(duì)蛋雞的研究中，隨飼糧中核黃素添加水平增加(2.2、7.7、13.2 mg/kg)，平均蛋重顯著提高，但對(duì)產(chǎn)蛋率、料蛋比和平均日采食量無顯著影響。而陳艷珍［11］研究中，每只蛋雞在飼糧中添加核黃素1.5 mg/d能顯著提高產(chǎn)蛋率、采食量和平均蛋重。趙凱等［12］在京黃肉種雞和京白蛋種雞飼糧中每只蛋雞添加核黃素2.5 mg/d，產(chǎn)蛋率和種蛋受精率較對(duì)照組有所提高，料蛋比有所下降，但差異不顯著。核黃素參與了生物氧化中氫的傳遞，是眾多氧化酶系統(tǒng)中的輔酶，促進(jìn)了機(jī)體蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物、核酸的代謝，在一定程度上有利于機(jī)體的生長發(fā)育和產(chǎn)蛋性能的提高，但可能由于物種及添加水平的不同，本試驗(yàn)中核黃素的添加并未對(duì)蛋鴨的產(chǎn)蛋性能表現(xiàn)出顯著的改善作用。

3.2 飼糧核黃素水平對(duì)籠養(yǎng)蛋鴨蛋品質(zhì)的影響

哈氏單位是用來評(píng)定蛋白品質(zhì)，表示濃厚蛋白稀薄化程度的單位［13］，是評(píng)價(jià)蛋品新鮮度的重要指標(biāo)。本試驗(yàn)在基礎(chǔ)飼糧中添加6 mg/kg的核黃素可以顯著提高哈氏單位，而陳艷珍［11］的研究中發(fā)現(xiàn)添加核黃素可使哈氏單位提高1.8%，但差異不顯著。蛋黃的色澤深淺主要取決于飼糧中葉黃素、胡蘿卜素等成分的多少［14］，不同品種家禽蛋黃中類胡蘿卜素的沉積情況也不同。王景成等［15］的報(bào)道中指出，抗氧化劑對(duì)類胡蘿卜素能起到保護(hù)作用。而鄭誠等［16］報(bào)道中也證明肉雞飼糧中使用抗氧化劑不但減少了飼料葉黃素的損失，同時(shí)可顯著提高肉雞皮膚的著色效果。核黃素可能通過其抗氧化功能對(duì)蛋黃的著色成分起到保護(hù)作用，此外，蛋黃中淺黃的顏色有一部分也來自核黃素。陳雷等［9］也在蛋雞飼糧中添加高水平核黃素，結(jié)果表明雞蛋中核黃素含量顯著增加。因此，飼糧核黃素水平也可能通過對(duì)蛋黃中核黃素含量的調(diào)控來影響蛋黃顏色，但調(diào)控原理仍需進(jìn)一步研究。

3.3 飼糧核黃素水平對(duì)籠養(yǎng)蛋鴨血液生化指標(biāo)的影響

本試驗(yàn)結(jié)果表明，未添加核黃素組(Ⅰ組)血漿核黃素含量顯著低于其他組，而EGRAC顯著高于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組。Frank 等［17－18］研究表明，EGRAC能夠反映機(jī)體核黃素狀況和全血中谷胱甘肽還原酶被FAD飽和的程度，并被研究者作為評(píng)定組織中核黃素營養(yǎng)狀況的重要生化指標(biāo)。在一定范圍內(nèi)，EGRAC越高，表明組織核黃素的營養(yǎng)狀況越差，反之亦然。蔣守群等［19］研究結(jié)果與本試驗(yàn)結(jié)果一致，核黃素未添加組EGRAC顯著高于其他各組。梁惠芳等［20］研究結(jié)果也表明核黃素缺乏引起大鼠EGRAC升高。因此，本試驗(yàn)中未添加核黃素組核黃素營養(yǎng)狀況最差，而其他各組間差異不顯著，核黃素添加水平不低于3 mg/kg即可維持蛋鴨核黃素營養(yǎng)需要。張建海等［21］研究表明，添加核黃素可提高機(jī)體的抗感染能力和免疫力，并可提高肉仔雞產(chǎn)蛋性能。這與本試驗(yàn)中T淋巴細(xì)胞增殖率隨核黃素添加水平的升高而增加的結(jié)果相一致。核黃素在細(xì)胞內(nèi)參與維持GSH含量，當(dāng)核黃素缺乏時(shí)，肝細(xì)胞線粒體內(nèi)谷胱甘肽還原酶活性下降，使得生物膜中不飽和脂肪酸發(fā)生氧化，破壞生物膜完整性，進(jìn)而影響細(xì)胞免疫功能。本試驗(yàn)中飼糧核黃素水平可能對(duì)機(jī)體免疫功能有一定影響，但仍需進(jìn)一步研究。

3.4 飼糧核黃素水平對(duì)籠養(yǎng)蛋鴨抗氧化指標(biāo)的影響

本試驗(yàn)中核黃素的添加顯著提高了血液及肝臟中抗氧化指標(biāo)，表明核黃素的添加顯著提高了蛋鴨機(jī)體的抗氧化能力。以往眾多研究也得出了相同的試驗(yàn)結(jié)果。任延銘等［22］對(duì)育成期蛋鴨研究表明，飼糧核黃素水平的增加顯著降低了過氧化氫酶(CAT)活性，但對(duì)總抗氧化能力(T-AOC)無顯著影響。王艷輝等［23］研究報(bào)道，飼糧中添加10～20 mg/kg核黃素顯著提高蛋雛鴨血漿中TAOC、T-SOD、GSH-Px活性和肝臟 CAT、GSH-Px活性，顯著降低丙二醛(MDA)含量。蔣守群等［19］研究表明，飼糧添加核黃素顯著提高血漿中谷胱甘肽含量，改善試驗(yàn)雞的產(chǎn)蛋性能和免疫器官指數(shù)，提高機(jī)體的抗氧化能力。核黃素可以保護(hù)組織以免受到氧化損傷［24］，是GSH-Px的輔基成分，參與細(xì)胞內(nèi)GSH和GSSG之間的轉(zhuǎn)化［5］，維持細(xì)胞中GSH含量的相對(duì)穩(wěn)定，維持細(xì)胞正?？寡趸δ?。因此，核黃素缺乏可能導(dǎo)致機(jī)體抗氧化功能受到抑制，本試驗(yàn)中飼糧中核黃素添加水平不低于12 mg/kg時(shí)，可以獲得較好的抗氧化功能。

4 結(jié) 論

①飼糧核黃素水平為6 mg/kg時(shí)，蛋鴨可以獲得較好的產(chǎn)蛋率、日產(chǎn)蛋重、料蛋比及蛋品質(zhì)。

②提高飼糧核黃素水平可顯著提高蛋鴨機(jī)體抗氧化能力，且添加水平不低于12 mg/kg時(shí)，抗氧化能力較好。

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