李迎等

摘 要 建立了在線固相萃取高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（Online SPE HPLCMS/MS）測定大鼠血漿中S/R阿姆西汀手性異構(gòu)體的方法。血漿樣品經(jīng)過以下預(yù)處理步驟： 采用甲醇乙腈（50∶50， V/V）沉淀蛋白； 應(yīng)用Online SPE將血漿樣品中的其它雜質(zhì)去除； 將保留在SPE柱上的阿姆西汀和內(nèi)標(biāo)洗脫后用分析柱進(jìn)一步分離。分離后再用串聯(lián)質(zhì)譜法分別測定大鼠血漿中S/R阿姆西汀的含量。SPE柱為 Retain PEP Javelin（10 mm×2.1 mm）； 分析柱為ZORBAX SBC18（50 mm × 2.1 mm×3.5 μm）。質(zhì)譜采用電噴霧離子源（ESI），多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式，檢測離子為正離子，分別選擇m/z 292.1/154.0和260.4/116.2作為S/R阿姆西汀和內(nèi)標(biāo)（普萘洛爾）的檢測離子對。結(jié)果表明，S/R阿姆西汀的線性范圍為0.2～1000 μg/L，相關(guān)系數(shù)R分別為0.9903和0.9951， 批內(nèi)精密度RSD分別為1.2%～12.0%和0.4%～11.2%，回收率分別為94.2%～101.6%和94.3%～109.4%之間。本方法顯著提高了阿姆西汀的檢測靈敏度，可以滿足大鼠灌胃給予阿姆西汀兩種異構(gòu)體的藥代動力學(xué)研究要求。

3.5 藥代動力學(xué)參數(shù)分析

應(yīng)用DAS 2.0 計(jì)算藥代動力學(xué)參數(shù)，結(jié)果表明，大鼠灌胃給予阿姆西汀異構(gòu)體后， R阿姆西汀的最大濃度顯著低于S阿姆西汀，兩者的最大濃度分別為（37.2±17.6） μg/L和（121.8±32.2） μg/L。因此，靈敏的檢測方法是研究該藥手性差異的前提和必要條件。

4 結(jié) 論

與離線SPE相比較，在線SPE具有快速、省力和便于自動化分析的優(yōu)點(diǎn)。本研究將蛋白質(zhì)沉淀法和在線SPE相結(jié)合，有利于除去血漿中雜質(zhì)并提高分析柱壽命[12]。據(jù)此建立了大鼠血漿樣品中S/R阿姆西汀的在線SPE HPLCMS/MS定量分析方法，并進(jìn)行了嚴(yán)格的方法學(xué)驗(yàn)證，確證后的方法用于SD大鼠體內(nèi)阿姆西汀異構(gòu)體的藥代動力學(xué)研究。研究表明，大鼠灌胃給予阿姆西汀異構(gòu)體后兩者之間有顯著的差異，其中R阿姆西汀的最大濃度比S阿姆西汀低3.3倍， 文獻(xiàn)[10＼]報(bào)道的方法不能滿足其測定要求。而本方法在滿足該測定要求的基礎(chǔ)上，操作簡便快速，重現(xiàn)性好，可以滿足臨床研究的需要。

References

1 Morilak D A， Frazer A. Int. J. Neuropsychopharmacol， 2004， 7（2）： 193-218

2 Dell′Osso B， Buoli M， Baldwin D S， Altamura A C. Hum Psychopharmacol， 2010， 25（1）： 17-29

3 Papakostas G I， Thase M E， Fava M， Nelson J C， Shelton R C. Biol. Psychiatry.， 2007， 62（11）： 1217-1227

4 Westanmo A D， Gayken J， Haight R. Am. J. HealthSyst Pharm.， 2005， 62： 2481-2490

5 Palmer E C， Binns L N， Carey H. Ann. Pharmacother.， 2014， 48（8）： 1030-1039

6 Xue R， Jin Z L， Chen H X， Yuan L， He X H， Zhang Y P， Meng Y G， Xu J P， Zheng J Q， Zhong B H， Li Y F， Zhang Y Z. Eur. Neuropsychopharmacol， 2013， 23（7）： 728-741

7 Grillo M P， Wait J C， Tadano L M， Khera S， Benet L Z. Drug Metab Dispos.， 2010， 38（1）： 133-142

8 Hardikar M S. J. Indian. Med. Assoc.， 2008， 106（9）： 615-618， 622， 624

9 Alves G， Figueiredo I， Falco A， CastelBranco M， Caramona M， SoaresDaSilva P. Chirality， 2008， 20（6）： 796-804

10 ZHU XiuQing， LI JingLai， DENG Ming， XIONG Shan， ZHANG ZhenQing. Military Medical Sciences， 2013， 37（11）： 818-821

朱秀清， 李敬來， 鄧 鳴， 熊 山， 張振清. 軍事醫(yī)學(xué)， 2013， 37（11）： 818-821

11 CHEN Jing， LIU ZhaoJin， AN BaoChao， XU Qun， ZHANG XiangMin. Chinese J. Anal.Chem.， 2013， 41（9）： 1418-1422

陳 靜， 劉召金， 安寶超， 許 群， 張祥民. 分析化學(xué)， 2013， 41（9）： 1418-1422

12 AI LianFeng， MA YuSong， CHEN RuiChun， GUO ChunHai， KANG ZhanSheng. Chinese J. Anal. Chem.， 2013， 41（8）： 1194-1198

艾連峰， 馬育松， 陳瑞春， 郭春海， 康占省. 分析化學(xué)， 2013， 41（8）： 1194-1198

摘 要 建立了在線固相萃取高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（Online SPE HPLCMS/MS）測定大鼠血漿中S/R阿姆西汀手性異構(gòu)體的方法。血漿樣品經(jīng)過以下預(yù)處理步驟： 采用甲醇乙腈（50∶50， V/V）沉淀蛋白； 應(yīng)用Online SPE將血漿樣品中的其它雜質(zhì)去除； 將保留在SPE柱上的阿姆西汀和內(nèi)標(biāo)洗脫后用分析柱進(jìn)一步分離。分離后再用串聯(lián)質(zhì)譜法分別測定大鼠血漿中S/R阿姆西汀的含量。SPE柱為 Retain PEP Javelin（10 mm×2.1 mm）； 分析柱為ZORBAX SBC18（50 mm × 2.1 mm×3.5 μm）。質(zhì)譜采用電噴霧離子源（ESI），多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式，檢測離子為正離子，分別選擇m/z 292.1/154.0和260.4/116.2作為S/R阿姆西汀和內(nèi)標(biāo)（普萘洛爾）的檢測離子對。結(jié)果表明，S/R阿姆西汀的線性范圍為0.2～1000 μg/L，相關(guān)系數(shù)R分別為0.9903和0.9951， 批內(nèi)精密度RSD分別為1.2%～12.0%和0.4%～11.2%，回收率分別為94.2%～101.6%和94.3%～109.4%之間。本方法顯著提高了阿姆西汀的檢測靈敏度，可以滿足大鼠灌胃給予阿姆西汀兩種異構(gòu)體的藥代動力學(xué)研究要求。

3.5 藥代動力學(xué)參數(shù)分析

應(yīng)用DAS 2.0 計(jì)算藥代動力學(xué)參數(shù)，結(jié)果表明，大鼠灌胃給予阿姆西汀異構(gòu)體后， R阿姆西汀的最大濃度顯著低于S阿姆西汀，兩者的最大濃度分別為（37.2±17.6） μg/L和（121.8±32.2） μg/L。因此，靈敏的檢測方法是研究該藥手性差異的前提和必要條件。

4 結(jié) 論

與離線SPE相比較，在線SPE具有快速、省力和便于自動化分析的優(yōu)點(diǎn)。本研究將蛋白質(zhì)沉淀法和在線SPE相結(jié)合，有利于除去血漿中雜質(zhì)并提高分析柱壽命[12]。據(jù)此建立了大鼠血漿樣品中S/R阿姆西汀的在線SPE HPLCMS/MS定量分析方法，并進(jìn)行了嚴(yán)格的方法學(xué)驗(yàn)證，確證后的方法用于SD大鼠體內(nèi)阿姆西汀異構(gòu)體的藥代動力學(xué)研究。研究表明，大鼠灌胃給予阿姆西汀異構(gòu)體后兩者之間有顯著的差異，其中R阿姆西汀的最大濃度比S阿姆西汀低3.3倍， 文獻(xiàn)[10＼]報(bào)道的方法不能滿足其測定要求。而本方法在滿足該測定要求的基礎(chǔ)上，操作簡便快速，重現(xiàn)性好，可以滿足臨床研究的需要。

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9 Alves G， Figueiredo I， Falco A， CastelBranco M， Caramona M， SoaresDaSilva P. Chirality， 2008， 20（6）： 796-804

10 ZHU XiuQing， LI JingLai， DENG Ming， XIONG Shan， ZHANG ZhenQing. Military Medical Sciences， 2013， 37（11）： 818-821

朱秀清， 李敬來， 鄧 鳴， 熊 山， 張振清. 軍事醫(yī)學(xué)， 2013， 37（11）： 818-821

11 CHEN Jing， LIU ZhaoJin， AN BaoChao， XU Qun， ZHANG XiangMin. Chinese J. Anal.Chem.， 2013， 41（9）： 1418-1422

陳 靜， 劉召金， 安寶超， 許 群， 張祥民. 分析化學(xué)， 2013， 41（9）： 1418-1422

12 AI LianFeng， MA YuSong， CHEN RuiChun， GUO ChunHai， KANG ZhanSheng. Chinese J. Anal. Chem.， 2013， 41（8）： 1194-1198

艾連峰， 馬育松， 陳瑞春， 郭春海， 康占省. 分析化學(xué)， 2013， 41（8）： 1194-1198

摘 要 建立了在線固相萃取高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（Online SPE HPLCMS/MS）測定大鼠血漿中S/R阿姆西汀手性異構(gòu)體的方法。血漿樣品經(jīng)過以下預(yù)處理步驟： 采用甲醇乙腈（50∶50， V/V）沉淀蛋白； 應(yīng)用Online SPE將血漿樣品中的其它雜質(zhì)去除； 將保留在SPE柱上的阿姆西汀和內(nèi)標(biāo)洗脫后用分析柱進(jìn)一步分離。分離后再用串聯(lián)質(zhì)譜法分別測定大鼠血漿中S/R阿姆西汀的含量。SPE柱為 Retain PEP Javelin（10 mm×2.1 mm）； 分析柱為ZORBAX SBC18（50 mm × 2.1 mm×3.5 μm）。質(zhì)譜采用電噴霧離子源（ESI），多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式，檢測離子為正離子，分別選擇m/z 292.1/154.0和260.4/116.2作為S/R阿姆西汀和內(nèi)標(biāo)（普萘洛爾）的檢測離子對。結(jié)果表明，S/R阿姆西汀的線性范圍為0.2～1000 μg/L，相關(guān)系數(shù)R分別為0.9903和0.9951， 批內(nèi)精密度RSD分別為1.2%～12.0%和0.4%～11.2%，回收率分別為94.2%～101.6%和94.3%～109.4%之間。本方法顯著提高了阿姆西汀的檢測靈敏度，可以滿足大鼠灌胃給予阿姆西汀兩種異構(gòu)體的藥代動力學(xué)研究要求。

3.5 藥代動力學(xué)參數(shù)分析

應(yīng)用DAS 2.0 計(jì)算藥代動力學(xué)參數(shù)，結(jié)果表明，大鼠灌胃給予阿姆西汀異構(gòu)體后， R阿姆西汀的最大濃度顯著低于S阿姆西汀，兩者的最大濃度分別為（37.2±17.6） μg/L和（121.8±32.2） μg/L。因此，靈敏的檢測方法是研究該藥手性差異的前提和必要條件。

4 結(jié) 論

與離線SPE相比較，在線SPE具有快速、省力和便于自動化分析的優(yōu)點(diǎn)。本研究將蛋白質(zhì)沉淀法和在線SPE相結(jié)合，有利于除去血漿中雜質(zhì)并提高分析柱壽命[12]。據(jù)此建立了大鼠血漿樣品中S/R阿姆西汀的在線SPE HPLCMS/MS定量分析方法，并進(jìn)行了嚴(yán)格的方法學(xué)驗(yàn)證，確證后的方法用于SD大鼠體內(nèi)阿姆西汀異構(gòu)體的藥代動力學(xué)研究。研究表明，大鼠灌胃給予阿姆西汀異構(gòu)體后兩者之間有顯著的差異，其中R阿姆西汀的最大濃度比S阿姆西汀低3.3倍， 文獻(xiàn)[10＼]報(bào)道的方法不能滿足其測定要求。而本方法在滿足該測定要求的基礎(chǔ)上，操作簡便快速，重現(xiàn)性好，可以滿足臨床研究的需要。

References

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2 Dell′Osso B， Buoli M， Baldwin D S， Altamura A C. Hum Psychopharmacol， 2010， 25（1）： 17-29

3 Papakostas G I， Thase M E， Fava M， Nelson J C， Shelton R C. Biol. Psychiatry.， 2007， 62（11）： 1217-1227

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8 Hardikar M S. J. Indian. Med. Assoc.， 2008， 106（9）： 615-618， 622， 624

9 Alves G， Figueiredo I， Falco A， CastelBranco M， Caramona M， SoaresDaSilva P. Chirality， 2008， 20（6）： 796-804

10 ZHU XiuQing， LI JingLai， DENG Ming， XIONG Shan， ZHANG ZhenQing. Military Medical Sciences， 2013， 37（11）： 818-821

朱秀清， 李敬來， 鄧 鳴， 熊 山， 張振清. 軍事醫(yī)學(xué)， 2013， 37（11）： 818-821

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陳 靜， 劉召金， 安寶超， 許 群， 張祥民. 分析化學(xué)， 2013， 41（9）： 1418-1422

12 AI LianFeng， MA YuSong， CHEN RuiChun， GUO ChunHai， KANG ZhanSheng. Chinese J. Anal. Chem.， 2013， 41（8）： 1194-1198

艾連峰， 馬育松， 陳瑞春， 郭春海， 康占省. 分析化學(xué)， 2013， 41（8）： 1194-1198