王淞，章驊，崔穎，陳文碩

（天津出入境檢驗(yàn)檢疫局，天津300456）

嘔吐毒素（vomitoxin），又名脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（deoxynivalenol，DON），它是一種主要由鐮刀菌屬（Fusarium）產(chǎn)生的毒性代謝產(chǎn)物，屬于單端孢霉烯族化合物（trichothecenes），其化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，受熱不分解[1]。嘔吐毒素具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒性，在動(dòng)物組織中DON主要作用于增長迅速、處于分裂狀態(tài)的細(xì)胞，如胃腸道細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、胸腺細(xì)胞、骨髓造血細(xì)胞等，所引起的損害與輻射引起的細(xì)胞損害相似[2]；DON對動(dòng)物（大鼠、豬和雞等）還可造成免疫毒性，誘導(dǎo)免疫細(xì)胞的凋亡[3]。

嘔吐毒素作為一種常見的真菌毒素，在自然界中廣泛存在于小麥等糧谷類農(nóng)作物中，在世界范圍內(nèi)存在著較高的污染率，小麥一旦被嘔吐毒素產(chǎn)毒菌株污染，在適宜生長環(huán)境（水分活度Aw＞0.87）中，產(chǎn)毒菌株會(huì)迅速生長，產(chǎn)生嘔吐毒素，而小麥中的嘔吐毒素又會(huì)隨小麥粉的生產(chǎn)過程帶入到小麥粉中，嚴(yán)重威脅人體健康。我國2013年國家風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測計(jì)劃已將小麥粉中嘔吐毒素含量的監(jiān)測列為重點(diǎn)，因此特對我國山東、河北、吉林等10個(gè)地區(qū)的小麥粉進(jìn)行了取樣，以對小麥粉中嘔吐毒素的污染情況進(jìn)行調(diào)查。

1 嘔吐毒素的相關(guān)法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定

從小麥粉及其制品中的DON限量上看，在原料方面，中國、美國、歐盟等國家或地區(qū)均規(guī)定了小麥及其制品的DON限量值；而在成品方面，只有歐盟針對相關(guān)食品的DON進(jìn)行了限量規(guī)定，具體如表1所示。

表1 嘔吐毒素的相關(guān)法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定Table 1 Some regulations and standards about DON

同時(shí)，聯(lián)合國糧農(nóng)組織和世界衛(wèi)生組織下的食品添加劑聯(lián)合專家委員會(huì)（JECFA）通過對DON毒素研究認(rèn)為，DON及其乙?；苌铮?-A-DON及15-ADON）的PMTDI（暫定每日最大耐受攝入量）為0.001 mg/kg·bw[6]；JECFA還推導(dǎo)出DON及其乙酰化衍生物（3-A-DON及15-A-DON）的ARfD（急性參考劑量）為0.008 mg/kg·bw。

2 材料和方法

2.1 樣品

從我國山東、河北、廣東、山西、浙江、江蘇、河南、四川、吉林、陜西10個(gè)地區(qū)購得小麥粉50份，以對小麥粉中嘔吐毒素污染情況進(jìn)行調(diào)查。

2.2 檢驗(yàn)方法[8-9]

2.2.1 試劑和材料

超純水；甲醇：色譜純；乙腈：色譜純；嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)品（FERMENTEK Ltd，99.9%）；DONtest HPLC 免疫親和柱（VICAM）；聚乙二醇（VICAM）；玻璃纖維濾紙：直徑 11 cm，孔徑 1.5 μm；玻璃注射器：10 mL。

PBS清洗緩沖液：稱取8.0 g氯化鈉、1.2 g磷酸氫二鈉、0.2 g磷酸二氫鉀、0.2 g氯化鈉，用990 mL水溶解，用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH至7.0，用水稀釋至1 L。

嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（100 μg/mL)：稱取嘔吐毒素10.0 mg，用甲醇溶解并定容至100 mL。（-20℃冷凍可貯存3個(gè)月）

嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)系列：準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用流動(dòng)相稀釋，配制成 0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、3.0 μg/mL 標(biāo)準(zhǔn)系列。

2.2.2 儀器和設(shè)備

2695高效液相色譜儀Waters（配紫外檢測器Waters 2998）；色譜工作站Empower 3；固相萃取裝置VICAM；高速組織均質(zhì)器Prima PB100： 20000 r/min；漩渦均勻器Labnet VX-200。

2.2.3 色譜條件

色譜柱：CLOVERSIL ODS-U，150 mm×4.6 mm（內(nèi)徑），5 μm；流動(dòng)相：甲醇+水（20+80）；流速：0.8 mL/min；檢測波長：218 nm；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：20 μL。

2.2.4 提取和凈化

提取：稱取25.0 g（精確到0.01 g）試樣于100 mL容量瓶中，加入5 g聚乙二醇，用水定容至刻度，混勻，轉(zhuǎn)移至均質(zhì)杯中，高速攪拌2 min。定量濾紙過濾后以玻璃纖維濾紙過濾至濾液澄清，收集濾液。

凈化：將免疫親和柱連接于玻璃注射器下，準(zhǔn)確移取濾液2 mL，注入玻璃注射器中。調(diào)節(jié)空氣壓力泵壓力，使溶液以1滴/s流速通過免疫親和柱，直至空氣進(jìn)入親和柱中。分別用PBS緩沖液、5 mL水先后淋洗免疫親和柱，流速約為1滴/s～2滴/s，棄去全部濾液，準(zhǔn)確加入1.0 mL甲醇洗脫，流速約為1滴/s，收集全部洗脫液于玻璃試管中，氮?dú)獯蹈?，殘留物?00 μL流動(dòng)相溶解，HPLC測定。

3 調(diào)查結(jié)果

3.1 方法驗(yàn)證

本方法線性關(guān)系良好（R2=0. 9998），檢出限為0.04 mg/kg。對小麥粉進(jìn)行添加回收試驗(yàn)，在0.04、0.5、1 mg/kg 3個(gè)水平上進(jìn)行，每個(gè)添加水平設(shè)6個(gè)平行；回收率平均值分別為89.1%、88.5%、93.3%，根據(jù)每個(gè)添加水平平行試驗(yàn)，計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），分別為6.1%、4.9%、4.6%。該方法具有較好的回收率和精密度，滿足檢測要求，標(biāo)準(zhǔn)譜圖見圖1。

圖1 嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖（2.0 μg/mL）Fig.1 The chromatogram about DON standard solution（2.0 μg/mL）

3.2 調(diào)查數(shù)據(jù)

此次共采集了10個(gè)地區(qū)的小麥粉樣品50個(gè)，利用免疫親和柱凈化-液相色譜檢測方法，對其中嘔吐毒素進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果詳見表2。

表2 不同地區(qū)小麥粉中嘔吐毒素污染情況Table 2 The contents of DON in wheat powder samples

4 總結(jié)

本次調(diào)查，所采集的50份小麥粉樣品中，15份檢出嘔吐毒素，檢出率為30%，最高含量為0.862 mg/kg，未超過我國及美國國家標(biāo)準(zhǔn)對小麥粉中嘔吐毒素的限量規(guī)定（JS027號(hào)樣品略超出歐盟對谷粉中嘔吐毒素的限量規(guī)定），大致呈現(xiàn)高污染率、低污染程度狀況。

另外，據(jù)統(tǒng)計(jì)，目前我國每日（標(biāo)準(zhǔn)）人均消費(fèi)小麥粉及其制品136.79 g[9]，以檢測嘔吐毒素含量最高的樣品計(jì)算，暫設(shè)標(biāo)準(zhǔn)人體重為60 kg，根據(jù)“膳食暴露量=食品中危害物的含量×食品的消費(fèi)量/人體體重”，即嘔吐毒素的每日膳食暴露量約為0.002 mg/kg·bw，大于JECFA暫定的DON及其乙酰化衍生物（3-A-DON及15-A-DON）的每日最大耐受攝入量0.001 mg/kg·bw（遠(yuǎn)小于一日急性參考計(jì)量0.008 mg/kg·bw），存在一定的膳食暴露風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)引起我們的關(guān)注。

當(dāng)然，此次調(diào)查，只是大致了解我國不同地區(qū)小麥粉中嘔吐毒素污染狀況、分析平均狀態(tài)下嘔吐毒素的膳食暴露量，提示了安全隱患，為嘔吐毒素風(fēng)險(xiǎn)評估、標(biāo)準(zhǔn)制（修）定等提供基礎(chǔ)監(jiān)測數(shù)據(jù)。要更全面了解小麥粉中嘔吐毒素污染狀況及污染趨勢，針對不同人群（小麥粉消費(fèi)量、體重等）分析嘔吐毒素膳食暴露量，需要做進(jìn)一步更廣泛的調(diào)查研究。

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[2] 武慧慧,于愛蓮.脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的細(xì)胞毒性作用[J].泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2012,33(4)：313-316

[3] 靳露,董國忠.嘔吐毒素對動(dòng)物免疫及繁殖性能的影響[J].飼料研究,2012(3)：18-21

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[6] 樊平聲,沙國棟,張勇,等.南京市售小麥?zhǔn)称分蠨ON毒素含量調(diào)查與風(fēng)險(xiǎn)評估[J].山地農(nóng)業(yè)生物學(xué)報(bào),2009(28)：421-424

[7]中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局,中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).GB/T 23503-2009,食品中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的測定[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2009

[8]中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.SN/T 1571-2005,進(jìn)出口糧谷中嘔吐毒素檢驗(yàn)方法[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2005[9] 王曉云,于雅琴,俞瓊.2005年中國居民膳食DON污染調(diào)查及暴露評估[J].長治醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2007,21(2)：101-103