肖井雷,于洋洋,姜大成

(長春中醫(yī)藥大學藥學院,長春130117)

中國林蛙(Rana temporaria chensinensis David),是一種主要分布于我國東北地區(qū)的名貴野生藥用動物,亦是一種藥食同源的珍貴佳品。近年來,由于人們普遍認識到中國林蛙及其輸卵管(哈蟆油)、卵的營養(yǎng)價值,大力開展中國林蛙的人工養(yǎng)殖,地球生態(tài)環(huán)境的污染以及兩棲類動物特有的呼吸方式(用皮膚呼吸),可能會導致生態(tài)環(huán)境中的一些有害物質在中國林蛙體內富集。因此,本文對中國林蛙不同部位中的重金屬含量進行了測試分析,以詮釋重金屬在中國林蛙體內的吸收富集特征,揭示中國林蛙藥用、食用的安全性。

1 實驗儀器、試藥與材料

1.1 實驗儀器 AFS-930型順序注射原子熒光光度計(北京吉天儀器有限公司)、AA-6800原子吸收分光光度計(日本島津公司)。

1.2 實驗試藥 鹽酸、硝酸、高氯酸、氫氧化鉀均為優(yōu)級純,氫氟酸氯化鈉、氫氧化鈉、硫脲、抗壞血酸、硼氫化鉀為分析純。5種重金屬標準物質均購于國家標準物質中心,規(guī)格為1.0 mg/mL。

1.3 實驗材料

1.3.1 樣品采集 選定吉林省樺甸市蘇密溝鄉(xiāng)3個不同的養(yǎng)蛙場。在每個樣品采集點的越冬池中隨機捕捉3～6年的中國林蛙(雌、雄各50只)。

1.3.2 樣品處理 用自來水沖洗掉林蛙體表的雜物,用去離子水沖洗干凈,穿起在陰涼處風干。雄蛙陰干后裝入干凈的食品袋-4℃密封保存。雌蛙裝入食品袋中后,用適量熱去離子水噴灑,封好袋口,在30℃電熱恒溫箱內放置12～24 h后,用手術刀剖開腹部取出輸卵管和卵分別放入用去離子水沖洗干凈的干燥磨口玻璃瓶內-4℃密封保存待用。除去輸卵管和卵的其他部分單獨裝入干燥的食品袋中-4℃密封保存。

2 實驗方法與結果

2.1 樣品前處理 稱取10.0 g樣品放入用去離子水沖洗干凈的培養(yǎng)皿中,在55℃下烘干24 h后,用瑪瑙研缽研碎至全部能通過60目篩,盛入用去離子水沖洗干凈的磨口玻璃瓶中,放入干燥器中密封備用。

2.2 供試品的制備 參照《中國藥典》中相應項下制備。

2.3 供試品中重金屬的含量測定[1-9]

2.3.1 儀器工作條件

2.3.1.1 鉛測定工作條件 波長:283.3 nm;燈電流:440 mA;狹縫:0.7 nm;燃燒高度:1 nm;干燥溫度:110～130℃;灰化溫度:850℃;原子化溫度:160℃;凈化溫度:2 450℃;乙炔氣壓力:1 mPa。

2.3.1.2 鎘測定儀器條件 波長:228.8 nm;燈電流:230 mA;狹縫:0.7 nm;燃燒高度:1 mm;干燥溫度:110℃～130℃;灰化溫度:500℃;原子化溫度:1 600℃;凈化溫度:2 450℃。

2.3.1.3 銅測定儀器條件 檢測波長:324.75 nm;空氣-乙炔火焰;氘燈背景校正;火焰高度:5 mm;狹縫:0.2 nm;燈電流:3 mA。

2.3.1.4 砷測定儀器條件 光電倍增管負高壓:270 V;燈電流 :60 mA;載氣流量:400 mL/min;屏蔽氣流量:800 mL/min;原子化器高度:8 mm。

2.3.1.5 汞測定儀器條件 光電倍增管負高壓:270V;燈電流:30 mA;載氣流量:400 mL/min;屏蔽氣流量:800 mL/min;原子化器高度:8 mm。

2.3.2 方法學考察

2.3.2.1 線性關系 分別對鉛、鎘、銅、砷和汞進行線性關系的考察,結果顯示各種元素在相應線性范圍內線性關系良好,結果見表1。

表 1 Pb、Cd、Cu、As和 Hg 的標準曲線

2.3.2.2 精密度試驗 取適量對照品溶液,按照上述條件進行重金屬含量測定,平行進樣10次,計算每種元素的RSD值,結果見表2。5種元素RSD值分別在0.204%～1.761%之間,表明該儀器精密度良好。

表2 5種重金屬元素精密度檢查

2.3.2.3 穩(wěn)定性試驗 將定容后的樣品放置,分別于0、12、24、48、72 h 后進行測定,結果見表 3。各個元素的含量隨著放置時間沒有明顯改變,表明重金屬元素在0～72 h內穩(wěn)定性良好。

表3 樣品中重金屬元素穩(wěn)定性ng/mL

2.3.2.4 回收率試驗 取已知含量的樣品粉末,分別精密稱取樣品0.5 000 g,共12分,其中6份加入適量Pb、Cd、Cu標準品溶液,另外 6分加入適量As和Hg標準溶液,按照上述方法進行操作,求各元素的回收率,見表4。各元素回收率在96.9%～100.2%,表明實驗所用方法對各個元素回收率較高。

表4 中國林蛙及其藥用部位重金屬元素回收率 μ g/g

2.3.3 樣品測定 以5 mL消化液按樣品處理方法進行加熱消化為空白對照,每份樣品平行進樣3次,實驗結果見表5。

表5 中國林蛙不同部位中重金屬含量 mg/kg

3 結論

依據(jù)藥用植物及制劑外經(jīng)貿綠色行業(yè)標準WM/T2-2004中重金屬限量要求:各產(chǎn)地的中國林蛙輸卵管、卵及雌雄蛙全體中重金屬均不超標。

依據(jù)水產(chǎn)或魚類重金屬限量的標準要求:各產(chǎn)地的中國林蛙輸卵管、卵及雌雄全體中重金屬均不超標。

通過此實驗研究可知,重金屬在中國林蛙體內有一定的富集,但并未顯示靶向積聚趨勢。此研究表明中國林蛙在應用時不存在安全隱患。

由于《中華人民共和國藥典》中并未對藥材中鉛、砷、汞、鎘、銅的含量限度給以標準,只有總重金屬含量的限度標準,并且國家未出臺對動物藥中重金屬含量的標準。因此,本實驗借鑒了相關標準進行了檢測分析。

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