劉 恒，趙文閣，劉 鵬

(哈爾濱師范大學(xué))

0 引言

胎生蜥蜴(Lacerta vivipara)是蜥蜴科卵胎生動(dòng)物的典型代表，在我國分布于黑龍江、內(nèi)蒙古和新疆等地［1］．在國外分布較廣泛，從歐洲烏拉山遠(yuǎn)端的英格蘭和愛爾蘭，往東通過西伯利亞到遠(yuǎn)離東海岸的庫頁島等廣大地區(qū)［2］．作為一個(gè)廣泛分布的物種，胎生蜥蜴在染色體組型、性別決定機(jī)制上存在一定的地理變異［3］．通過對(duì)內(nèi)蒙古地區(qū)胎生蜥蜴種群染色體組型的研究，可以與大、小興安嶺地區(qū)胎生蜥蜴種群的染色體組型進(jìn)行比較［1，2］，為胎生蜥蜴的起源和物種演化提供參考．

1 材料與方法

2013年5月，在內(nèi)蒙古的呼倫貝爾地區(qū)采集胎生蜥蜴雌雄各5只，采用骨髓細(xì)胞蒸汽固定法制備染色體標(biāo)本［1，2］．具體操作方法為:將胎生蜥蜴斷指放血，2 h后腹腔處注射0．05%秋水仙素0．12 mL，12 h后處死，取出肱骨和股骨，剔除上面的肌肉，橫斷兩端骨骺．用0．46%KCl溶液將骨髓細(xì)胞沖到載玻片上，將載玻片放到玻璃皿中的玻璃棒上低滲處理30 min．吸出低滲液后加入固定液(無水乙醇:冰醋酸:雙蒸水 =1∶2∶3)固定2 h，換無水乙醇進(jìn)行二次固定30 min，再用無水乙醇:冰醋酸=1∶2沖洗．待自然干燥后，用吉姆薩染液進(jìn)行染色30 min，自來水沖洗干凈后，風(fēng)干裝片［4］．

使用Leica DC 500顯微鏡油鏡進(jìn)行觀察、統(tǒng)計(jì)染色體數(shù)目，選取其中20個(gè)較好的中期分裂相進(jìn)行照相．觀察雌雄各120個(gè)分散良好、邊緣清晰且較平整的中期細(xì)胞分裂相，確定二倍體染色體數(shù)目．用Leica QwinV3軟件對(duì)染色體進(jìn)行測量，計(jì)算出相對(duì)長度和臂比值．

2 結(jié)果

如圖1、如圖2所示，雄性胎生蜥蜴二倍體染色體個(gè)數(shù)是36，性染色體為ZZ型，2n=34+ZZ．雌性染色體中存在異型的性染色體，二倍體染色體個(gè)數(shù)為35，性染色體為W型，2n=34+W．除雌性W性染色體為亞端部著絲點(diǎn)(ST)外，全部染色體均為頂端著絲點(diǎn)(T)，所以很難根據(jù)著絲點(diǎn)位置區(qū)分染色體．

根據(jù)胎生蜥蜴染色體形態(tài)與大小，17對(duì)常染色體可分成2組，第1組包括第1～4對(duì)染色體(9% ＞相對(duì)長度＞7%)，其中第1對(duì)染色體相對(duì)長度明顯大于第2對(duì)染色體(F=18．80，P＜0．05)，容易區(qū)分，第2～4對(duì)染色體相對(duì)長度差也較大，大于0．4%，較易于辨別;第2組包括第5～17對(duì)染色體(相對(duì)長度＜7%)，第5～9對(duì)染色體相對(duì)長度在5% ～7%，第10～13對(duì)染色體的相對(duì)長度在4% ～5%之間，第14～17對(duì)染色體的相對(duì)長度在3% ～4%之間．Z染色體的相對(duì)長度為5．47±0．08%，在第8對(duì)與第9對(duì)常染色體相對(duì)長度之間，W染色體相對(duì)長度為5．40±0．26%，臂比值為5．47，為亞端部著絲，在第8對(duì)與第9對(duì)常染色體相對(duì)長度之間(見表1)．

圖1 雄性胎生蜥蜴染色體中期分裂相及組型

圖2 雌性胎生蜥蜴染色體中期分裂相及組型

3 討論

胎生蜥蜴分布比較廣泛，具有卵生與卵胎生兩種生殖模式，對(duì)其染色體組型的研究比較早［2］，且不同地理種群中具有一定的染色體變異［3］．內(nèi)蒙古地區(qū)胎生蜥蜴種群染色體數(shù)目為雄性2n=36，雌性2n=35，W染色體為亞端著絲染色體，與烏克蘭跨喀爾巴阡山脈種群［5］、匈牙利東部種群［6］、俄羅斯部分地區(qū)種群、愛沙尼亞種群、芬蘭東部種群、瑞典北部種群相似［7］，但W染色體類型不同，例如保加利亞種群的W染色體為亞中著絲點(diǎn)［8］、阿爾卑斯山種群W染色體為中部著絲點(diǎn)［5］，此外，染色體的數(shù)目也存在一定的變化，例如斯洛維尼亞的種群發(fā)現(xiàn)染色體個(gè)數(shù)為雄性2n=36，雌性2n=36，性別決定機(jī)制為ZZ/ZW［9］，這種同一物種不同種群的染色體數(shù)目的地理變異是物種進(jìn)化的結(jié)果，與新物種的形成有關(guān)．

表1 胎生蜥蜴染色體相對(duì)長度

研究結(jié)果表明，內(nèi)蒙古地區(qū)地處大興安嶺的西坡，胎生蜥蜴種群的W染色體類型為亞端部著絲點(diǎn)［1］，不同于大興安嶺東坡的呼瑪種群W性染色體的中部著絲［2］，而與小興安嶺地區(qū)的種群一致，這三個(gè)種群W染色體類型的變化對(duì)討論胎生蜥蜴的起源和進(jìn)化具有重要意義．

［1］ 朱丹，趙文閣，劉鵬，等．大興安嶺產(chǎn)胎生蜥蜴的染色體組型研究［J］．中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2011，27(22):75-77．

［2］ 趙文閣，夏玉國，劉琳琳，等．黑龍江省產(chǎn)胎生蜥蜴的染色體組型研究［J］．四川動(dòng)物，2006，25(2):234-237．

［3］ ЛА Куп риянова， ЕР Руди． Сравнигельно Карио логическийАна лиз попу ляций жив ордящей ящерицы(L．vivipara)［J］．Зоо логиче ский журнал，1990，69(6):93-101．

［4］ 吳政安．兩棲類骨髓細(xì)胞的染色體標(biāo)本制作法［J］．遺傳，1982，4(1):38-39．

［5］ Odierna G，Aprea G，Capriglione T，et al．Progressive differentiation of the W sex chromosome between oviparous and viviparous populations of Zootoca vivipara［J］．Italiana Journal of Zoology，1998，65:295-302．

［6］ Puky M，Adam H，Surget-Groba Y，et al．Fajvedelmi programok letjogosultsaga es feladatai Magyarorszagon:az elevenszulo gyik(Zootoca vivipara Mayer＆ Bischoff，1996)vizsgalatanakeredmenyei es tanulsagai［J］．Termeszetvedelmi Kozlemenyek，2004，11:411-418．

［7］ Kupriyanova L A，Kuksin A，Odierna G．Karyotype，chromosome structure，reproductive modalities of three Southern Eurasian populations of the common lacertid lizard，Zootoca vivipara［J］．Acta Herpetologica，2008，3(2):99-106．

［8］ Belcheva R，Biserkov V，Ivlieva H，et al．Karyological studies on Lacerta vivipara collected in Bulgaria［J］．Cytologia，1986，3:567-570．

［9］ Odierna G，Heulin B，Guillaume C P，et al．Evolutionary and biogeographical implications of the karyological variations in the oviparous and viviparous forms of Lacerta(Zootoca)vivipara［J］．Ecography，2001，24:332-340．