陳 麗，張 熙，周忠志，何澤云△，唐 群，徐文峰

(1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)病理教研室，長沙 410208;2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，長沙 410007)

慢性腎功能衰竭(chronic renal failure，CRF)是目前不容忽視的重大疾病之一［1］。腎間質(zhì)纖維化(renal interstitial fibrosis，RIF)是多種慢性腎臟病向終末期腎病進展的重要過程，是CRF的主要病理 改 變［2］。 上 皮-間 充 質(zhì) 轉(zhuǎn) 分 化 (epithelialmesenchymal transition，EMT)是指上皮細胞分化為間充質(zhì)細胞［3］。目前研究證實，腎小管上皮細胞EMT是RIF形成的關(guān)鍵環(huán)節(jié)［4］，腎小管上皮細胞可通過 EMT轉(zhuǎn)分化為肌成纖維細胞(myofibroblast，MF)，MF可分泌大量的膠原，導(dǎo)致腎臟結(jié)構(gòu)重塑，同時MF也分泌TIMP，使ECM增加而降解減少，促進腎臟纖維化［5］。六味地黃湯是目前臨床運用治療慢性腎臟病的有效方劑［6］，六味地黃湯減輕RIF也有廣泛的實驗研究，我們前期對六味地黃湯和CRF致RIF做了大量的研究［7～10］，但以往未從 EMT角度對六味地黃湯減緩RIF機理進行深層次研究。

本研究以5/6腎切除CRF大鼠模型為平臺，用免疫組化、Western Blot、RT-PCR技術(shù)檢測腎小管上皮細胞標(biāo)志物E-cadherin、肌成纖維細胞標(biāo)志物α-SMA、FSP-1的表達水平，觀察大鼠5/6腎切除致CRF腎間質(zhì)纖維化中的EMT現(xiàn)象，探討腎RIF的發(fā)生機理和六味地黃湯的干預(yù)機理，為六味地黃湯的臨床療效提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 雄性SD大鼠60只，體質(zhì)量180±20 g，由湖南中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供。

1.1.2 藥物 六味地黃湯(熟地黃24 g(河南)、山茱萸12 g(湖南)、山藥12 g(河南)、牡丹皮9 g(安徽)、澤瀉9 g(湖南)、茯苓9 g(湖南))中的中藥材均一次性購自湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科。先將藥材用相當(dāng)于藥材5倍的自來水浸泡2 h煮沸后再微火煎熬30 min，過濾后收集煎液，原藥渣加少量水煎煮，取二煎液。將兩煎液混合，于水浴恒溫器上濃縮至含生藥1 g/ml，高壓滅菌、分裝，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.3 主要試劑 兔抗大鼠E-cadherin(120kDa)試劑盒、兔抗大鼠 α-SMA(42kDa)試劑盒、兔抗大鼠 FSP-1(64kDa)試劑盒:Bloassay Technology Laboratory;十二烷基硫酸鈉(SDS)、過硫酸胺(AP):北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司;瓊脂糖、甲雙丙烯酰胺 (Bic)、二硫蘇糖醇 (DTT)、TEMED(1568A14)、Phosphatase Inhibitor Cocktail 2:Sigma-Alorich;Trizol:美國MRC公司;RT試劑盒、Taq DNA聚合酶、dNTPs:美國Fermentas公司;逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和GoTaq Green Master Mix:Promega公司;100 bp DNA Ladder:北京鼎國生物技術(shù)發(fā)展中心。

RT-PCR引物列表

1.1.4 主要儀器 Motic BA410T生物顯微鏡、Moticam Pro 285A CCD IMAGING SUOLUTION、Motic Medical 6.0數(shù)碼顯微圖像分析系統(tǒng)軟件:德國;MultiphorII Nova Blot:pharmacia Biotech;PROTEAN II Xi Cell:BIO-RAD;721B型分光光度計:上海第三分析儀器廠;鼎國py-120水平脫色搖床，北京鼎國生物技術(shù)有限責(zé)任公司;UMAX掃描儀:臺灣;PCR儀(2400型):美國PERKIN ELMER公司;紫外分光核酸蛋白蛋白分析儀:美國Beckman公司;電泳凝膠圖像分析儀:上海Tanon公司;電泳轉(zhuǎn)膜儀(TE 52X-230V):美國Hoefer公司。

1.2 方法

1.2.1 造模與分組 (1)造模:按照文獻［11］報道方法造模。(2)分組:SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機分為正常組、假手術(shù)組、手術(shù)組，手術(shù)組術(shù)前禁食，均在無菌條件下進行5/6腎切除術(shù)，六味組給予以六味地黃湯灌胃(生藥含量按公式:人的劑量×0.018×5/kg體質(zhì)量計算)，每天1次，至處死為止;模型組、假手術(shù)組和正常組以等容積蒸餾水灌胃，各組每天灌胃1次，給藥8周后所有動物一次性處死。(3)免疫組化步驟:4 μm石蠟切片，切片后經(jīng)過如下程序處理:①常規(guī)處理石蠟切片;②滴加適量試劑A:內(nèi)源性過氧化酶封閉液(約50 ul)，37℃孵育20 min、PBS洗5 min×3次;③滴加適量試劑B:封閉用正常山羊血清工作液(約50 ul)，37℃孵育20 min、甩干;④滴加適量一抗工作液(約50 ul)稀釋度分別是 E-cadherin(1∶200)、α-SMA(1∶300)、FSP-1(1∶700)，切片置于免疫組化保濕盒37℃ 2 h、PBS洗5 min×3次;⑤滴加適量試劑C:生物素標(biāo)記二抗工作液(約50 ul)，37℃孵育15 min、PBS洗5 min×3次;⑥滴加適量試劑D:HRP標(biāo)記鏈霉親和素(約50 ul)，37℃孵育15 min、PBS洗5 min×3次;⑦DAB顯色(室溫，鏡下控制反應(yīng)時間);⑧終止顯色:用蒸餾水終止顯色反應(yīng);⑨蘇木素輕度復(fù)染、脫水透明、封片。(4)Western Blot步驟:實驗前先配好裂解液、G-250考馬斯亮藍溶液、12%分離膠和5%濃縮膠、上樣緩沖液、電泳液緩沖液、轉(zhuǎn)膜緩沖液、TBS緩沖液、TBST緩沖液、封閉液。①總蛋白的樣品制備;②蛋白含量的測定:制作標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢測樣品蛋白含量;③SDS-PAGE電泳:清洗玻璃板、灌膠與上樣、電泳;④轉(zhuǎn)膜;⑤免疫反應(yīng);⑥化學(xué)發(fā)光、顯影、定影;⑦凝膠圖像分析。(5)RTPCR步驟:①約100 mg重的腎臟置于研缽中，并加入少量液氮及0.1 mlTrizol，仔細研磨、混勻;迅速移入1.5 mlEP離心管(先已加入0.9 mlTrizol)，在漩渦混合器上劇烈震蕩30 s，完全混勻，冰上靜置5 min;②加入200 μl氯仿混勻，室溫使之分層。13000 rpm離心5 min;小心將上層水相轉(zhuǎn)移到無菌RNase-free的1.5 ml eppendorf管中;③加入一半體積的RNA沉淀試劑和異丙醇混勻，室溫放置5 min，13000 rpm離心5 min;④小心去除上清，加入1 ml 75%乙醇洗滌沉淀，13000 rpm離心5 min;⑤小心去除上清，離心數(shù)秒吸去殘余液體，60℃烤箱內(nèi)放置5 min去除乙醇;⑥適當(dāng)體積RNase-free H2O溶解，60℃烤箱內(nèi)放置5 min使其溶解充分;⑦電泳觀察抽提效果和估計含量;⑧約1 ug的總RNA進行逆轉(zhuǎn)錄;⑨PCR反應(yīng)，總體系15 ul，94℃變性5 min，循環(huán)采用94℃變性0.5 min，56℃退火 0.5 min，72 ℃ 延伸0.5 min，35 個循環(huán)后，72 ℃延伸10 min，4℃存放;⑩電泳分析:凝膠成像系統(tǒng)中觀察并拍照。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 免疫組化染色結(jié)果與分析

表1顯示，E-cadherin的表達:正常組腎小球腎間質(zhì)均無表達，腎近曲小管胞漿管腔面、腎遠曲小管漿、核內(nèi)均有大量棕黃色物質(zhì)沉積，著色深且著色面積大，表達量明顯(圖1)，假手術(shù)組與正常組比較，表達量無顯著差別(圖2)，面密度值及平均灰度值差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);模型組與假手術(shù)組比較，腎小球內(nèi)無表達、部分被膜纖維、腎近曲小管細胞胞漿、腎遠曲小管胞漿、核內(nèi)少量表達，腎間質(zhì)內(nèi)可見棕黃色物質(zhì)沉積，著色深且著色面積大，表達量顯著增多(圖3)，面密度值降低，平均灰度值增加，2組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);六味組與模型組比較，腎近曲小管、腎遠曲小管胞漿有棕黃色物質(zhì)增多，著色加深且著色面積增大，表達量顯著增多(圖4)，面密度值增大，平均灰度值減少，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。

表2顯示，α-SMA的表達:正常組腎小球、腎小管均無α-SMA蛋白表達(圖5);假手術(shù)組與正常組比較，α-SMA蛋白的表達量無顯著差別(圖6)，面密度值及平均灰度值差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);模型組與假手術(shù)組比較，被膜纖維、腎小球、腎小管上皮細胞胞漿、腎間質(zhì)內(nèi)均有大量棕黃色物質(zhì)沉積，著色深且著色面積大，α-SMA蛋白的表達量顯著增多(圖7)，面密度值增加，平均灰度值降低，2組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);六味組與模型組比較，被膜纖維、腎小球、腎小管上皮細胞胞漿、腎間質(zhì)內(nèi)棕黃色物質(zhì)減少，著色變淺且著色面積變小，α-SMA蛋白的表達量減少(圖8)，面密度值減少，平均灰度值增大，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。

注:以上圖片均為免疫組化染色，放大倍數(shù)為10 ×40。圖1、5、9 為正常組，圖2、6、10 為假手術(shù)組，圖3、7、11 為模型組，圖4、8、12 為六味組

表1 E-cadherin面密度值及平均灰度值定量分析(±s)

表1 E-cadherin面密度值及平均灰度值定量分析(±s)

注:與正常組比較:▲P＜0.01;與假手術(shù)組比較:●P＜0.01;與模型組比較:★P＜0.01

組 別 例數(shù) 面密度值(‰)平均灰度值正 常 組10 118.62±35.03 100.70±11.36假手術(shù)組 10 114.06±34.26 103.73±12.64模 型 組 14 16.74± 3.87▲● 157.70±11.65▲●六 味 組 17 69.28±23.89▲●★ 120.04±11.71▲●★

表2 α-SMA面密度值及平均灰度值定量分析(±s)

表2 α-SMA面密度值及平均灰度值定量分析(±s)

注:與正常組比較:▲P＜0.01;與假手術(shù)組比較:●P＜0.01;與模型組比較:★P＜0.01

組 別 例數(shù) 面密度值(‰)平均灰度值正 常 組10 0.65±0.03 152.20±25.41假手術(shù)組 10 1.54±0.05 151.60±28.34模 型 組 14 39.64±1.21▲● 80.60±20.57▲●六 味 組 17 6.05±0.19▲●★ 129.80±21.13▲●★

表3顯示，F(xiàn)SP-1的表達:正常組腎小球、腎小管均無FSP-1蛋白表達(圖9);假手術(shù)組與正常組比較，F(xiàn)SP-1蛋白的表達量無顯著差別(圖10)，面密度值及平均灰度值差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);模型組與假手術(shù)組比較，被膜纖維、腎小球、腎小管上皮細胞胞漿、腎間質(zhì)內(nèi)均有大量棕黃色物質(zhì)沉積，著色深且著色面積大，F(xiàn)SP-1蛋白的表達量顯著增多(圖11)，面密度值增加，平均灰度值降低，2組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);六味組與模型組比較，腎小球、腎小管上皮細胞胞漿、腎間質(zhì)內(nèi)棕黃色物質(zhì)減少，著色變淺且著色面積變小，F(xiàn)SP-1蛋白的表達量減少(圖12)，面密度值減少，平均灰度值增大，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。

表3 FSP-1面密度值及平均灰度值的定量分析(±s)

表3 FSP-1面密度值及平均灰度值的定量分析(±s)

注:與正常組比較:▲P＜0.01;與假手術(shù)組比較:●P＜0.01;與模型組比較:★P＜0.01

組 別 例數(shù) 面密度值(‰)平均灰度值正 常 組10 2.69±0.33 171.30±21.91假手術(shù)組 10 3.58±0.48 168.56±22.21模 型 組 14 88.93±3.14▲● 91.90±10.77▲●六 味 組 17 26.69±1.57▲●★ 143.42±22.18▲●★

2.2 Western Blot免疫印跡結(jié)果與分析

2.2.1 E-cadherin免疫印跡結(jié)果與分析 本實驗結(jié)果顯示，正常組表達水平高，假手術(shù)組與正常組比較，E-cadherin蛋白的表達量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);模型組與假手術(shù)組比較，表達量明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);六味組與模型組比較表達量增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)(見圖 13)。以 β-actin蛋白作為內(nèi)參，計算 E-cadherin/β-actin比值并進行統(tǒng)計分析(表4)。

2.2.2 α-SMA免疫印跡結(jié)果與分析 圖14表4顯示，正常組表達水平低，假手術(shù)組與正常組比較，α-SMA蛋白的表達量無顯著差別，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);模型組與假手術(shù)組比較表達量明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);六味組與模型組比較表達量降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。以 β-actin蛋白作為內(nèi)參，計算 α-SMA/βactin比值并進行統(tǒng)計分析。

2.2.3 FSP-1免疫印跡結(jié)果與分析 圖15表4顯示，正常組表達水平低，假手術(shù)組與正常組比較，F(xiàn)SP-1蛋白表達量無顯著差別，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);模型組與假手術(shù)組比較，表達量明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);六味組與模型組比較表達量降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。以 β-actin蛋白作為內(nèi)參，計算 FSP-1/βactin比值并進行統(tǒng)計分析。

表4 E-cadherin、α-SMA、FSP-1 蛋白表達水平比較(±s)

表4 E-cadherin、α-SMA、FSP-1 蛋白表達水平比較(±s)

注:與假手術(shù)組比較:▲P＜0.01;與模型組比較:●P＜0.01

組別-actin正 常 組 10 5.8703±0.0014 0.1080±0.0021 2.0235±0.00例數(shù) E-cadherin/β-actin α-SMA/β-actin FSP-1/β 34假 手 術(shù) 組 10 5.8821±0.0115 0.1381±0.0044 2.0140±0.0028模 型 組 14 0.8274±0.0026▲ 11.8257±0.0052● 7.1556±0.0043▲六 味 組 17 4.2986±0.0033▲● 4.9631±0.0037●★ 4.5765±0.0052▲●

2.3 RT-PCR結(jié)果與分析

2.3.1 E-cadherin結(jié)果與分析 圖16、表5顯示，正常組表達水平高，假手術(shù)組與正常組比較，E-cadhenrin的mRNA表達量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);模型組與假手術(shù)組比較，表達量明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);六味組與模型組比較表達量增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。以β-actin蛋白作為內(nèi)參，計算E-cadherin/β-actin比值并進行統(tǒng)計分析。

表5 E-cadherin、α-SMA、FSP-1 mRNA 表達水平比較(±s)

表5 E-cadherin、α-SMA、FSP-1 mRNA 表達水平比較(±s)

注:與假手術(shù)組比較:▲P＜0.01;與模型組比較:●P＜0.01

組別-actin正 常 組 10 1.5024±0.0052 0.3191±0.0018 0.5402±0.00例數(shù) E-cadherin/β-actin a-SMA/β-actin FSP-1/β 33假 手 術(shù) 組 10 1.4967±0.0029 0.3187±0.0044 0.5396±0.0019模 型 組 14 0.5346±0.0037▲ 0.8710±0.0026▲ 1.4261±0.0053▲六 味 組 17 0.6787±0.0046▲● 0.7142±0.0035▲● 1.1504±0.0061▲●

注:1.正常組;2.假手術(shù)組;3.模型組;4.六味組(圖14～18同)

2.3.2 α-SMA結(jié)果與分析 圖17表5顯示，正常組表達水平低，假手術(shù)組與正常組比較，α-SMA的mRNA表達量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);模型組與假手術(shù)組比較表達量明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);六味組與模型組比較表達量降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。以β-actin蛋白作為內(nèi)參，計算a-SMA/β-actin比值并進行統(tǒng)計分析。

2.3.3 FSP-1結(jié)果與分析 圖18、表5顯示，正常組表達水平低，假手術(shù)組與正常組比較，F(xiàn)SP-1的mRNA表達量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);模型組與假手術(shù)組比較表達量明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);六味組與模型組比較表達量降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。以β-actin蛋白作為內(nèi)參，計算 FSP-1/β-actin比值并進行統(tǒng)計分析。

3 討論

目前認為腎間質(zhì)纖維化的發(fā)展過程主要分為4個階段，第一階段是細胞的活化和損傷，第二階段是纖維化相關(guān)因子的釋放，第三階段是纖維化的形成，第四階段是腎臟結(jié)構(gòu)和功能的損傷。

腎小管EMT是腎間質(zhì)纖維化發(fā)展過程的第一階段，是腎臟纖維化形成的關(guān)鍵環(huán)節(jié)［3，4］。EMT 的可能機制如下:①某些間充質(zhì)細胞決定基因的激活:在病理條件下，某些間充質(zhì)細胞決定基因如FSP-1基因的激活，而上皮細胞基因如E-鈣黏素(E-cadherin)基因、細胞角化蛋白(Cytokerin)基因關(guān)閉，不表達上皮細胞標(biāo)志物，轉(zhuǎn)而表達間充質(zhì)細胞標(biāo)志物，發(fā)生上皮細胞轉(zhuǎn)分化;②某些細胞因子及代謝產(chǎn)物參與上皮細胞轉(zhuǎn)分化的發(fā)生，并可能是上皮細胞轉(zhuǎn)分化發(fā)生的重要機制;③基質(zhì)膠原成分影響上皮細胞轉(zhuǎn)分化的發(fā)生［12］。Yang等將 EMT高度概括為4個主要步驟:一是失去上皮細胞黏附特性;二是a-SMA重新表達和肌動蛋白重組;三是基底膜破壞;四是細胞遷移和侵襲。1995年STRUTZ等發(fā)現(xiàn)，腎小管上皮細胞可表達成纖維細胞特異蛋白1(fibroblast-specific protein-1，F(xiàn)SP-1)，而這種蛋白通常只在成纖維細胞中表達，正常上皮細胞不表達，于是他們提出了EMT假說。隨后在體外實驗中后觀察到這種現(xiàn)象。Zhaoyu Lu等利用大鼠5/6腎切除后12周血清能使HK-2細胞轉(zhuǎn)分化成肌成纖維細胞［13］。在腎病患者腎活檢的標(biāo)本中亦觀察到EMT現(xiàn)象［14］。在病理狀態(tài)下，腎小管上皮細胞具有向間充質(zhì)細胞轉(zhuǎn)化的能力［15］，可通過EMT轉(zhuǎn)分化為肌成纖維細胞(myofibroblast，MF)，MF既保留了成纖維細胞分泌膠原的能力，又與平滑肌細胞一樣能表達 a-平滑肌肌動蛋白(a-smooth muscle actin，a-SMA)［16］。病理情況下，MF 分泌的膠原量是成纖維細胞的4、5倍，具有強大的收縮能力，導(dǎo)致腎臟結(jié)構(gòu)重塑，促進腎纖維化。

以上研究表明，EMT是RIF的起始環(huán)節(jié)，為證實在動物體內(nèi)RIF的第一階段存在EMT現(xiàn)象，我們以5/6腎切除慢性衰竭大鼠模型為平臺，分別用免疫組化、Western Blot、RT-PCR技術(shù)檢測腎小管上皮細胞標(biāo)志物 E-cadherin、肌成纖維細胞標(biāo)志物 α-SMA、FSP-1的表達水平，觀察大鼠5/6腎切除致慢性腎衰竭RIF中的EMT現(xiàn)象，本研究結(jié)果:與正常組、假手術(shù)組比，模型組在蛋白水平和mRNA水平，E-cadherin表達量明顯下調(diào)，α-SMA、FSP-1表達量均明顯上調(diào)，以上組間的差異均具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，3種方法檢測結(jié)果一致，表明在5/6腎切除慢性衰竭大鼠RIF纖維化過程出現(xiàn)EMT現(xiàn)象，我們的實驗結(jié)果與相關(guān)文獻一致［17］。

六味地黃湯主治腎陰虛證，本方功效為滋陰補腎。熟地黃滋陰補腎，填精益髓、壯水之主，為君藥;山萸肉溫補肝腎，并能澀精;山藥補脾陰，兼能固精縮尿，兩者共為臣藥。三藥相配伍，滋養(yǎng)肝脾腎，用以治本。其中，肝腎同源，養(yǎng)肝陰即能補腎陰;脾主運化，滋脾陰即能益腎陰，故山萸肉、山藥共助熟地黃滋補腎陰。但此三藥補而滯膩，并因陰虛常能致虛火上炎，故用澤瀉瀉腎火、利濕泄?jié)?，以防熟地黃之膩;丹皮瀉肝火，以除山萸肉溫斂肝陰之滯;茯苓能淡滲利濕，以除山藥滋脾之壅。六藥合用，三補三瀉，補而不滯，瀉而不傷，以補為主，以瀉為輔，形成甘淡平和、不溫不燥的平補之劑。六味地黃湯是目前臨床運用廣泛的治療慢性腎臟病的方劑?，F(xiàn)代常用本方治療慢性腎炎、高血壓、糖尿病等病具有肝腎陰虛證候者。如在慢性腎炎、慢性腎功能衰竭、糖尿病腎病、狼瘡性腎炎、高血壓患者腎功能保護等疾病治療方面都取得了一定的療效。

我們長期對慢性腎衰腎間質(zhì)纖維化機制及六味地黃湯的作用機理做了大量的研究。既往研究表明，六味地黃湯可減輕和抑制腎間質(zhì)纖維化［7～10］，但未從EMT角度對六味地黃湯治療機理進行研究。本實驗從EMT角度，深入闡明六味地黃湯對慢性腎衰竭腎間質(zhì)纖維化的作用機制，分別采用免疫組化、Western Blot、RT-PCR技術(shù)，檢測大鼠5/6腎切除經(jīng)六味地黃湯治療8周后，E-cadherin、α-SMA、FSP-1表達水平的變化。結(jié)果顯示，與模型組比較，在蛋白水平和mRNA水平，六味組中E-cadherin表達量均明顯上調(diào)，α-SMA和FSP-1表達量均明顯下調(diào)，3種方法檢測具有一致性，以上組間的差異均具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，此結(jié)果表明5/6腎切除，經(jīng)六味地黃湯治療8周后，大鼠留存腎中EMT現(xiàn)象減輕，六味地黃湯可抑制EMT現(xiàn)象。

以上研究證實大鼠5/6腎切除致CRF模型留存腎中存在EMT現(xiàn)象，六味地黃湯可抑制EMT。

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