江 滟，易 旭

(貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng)550004)

黃柏為蕓香科落葉喬木植物黃檗(關(guān)黃柏)和黃皮樹(shù)(川黃柏)的干燥樹(shù)皮。黃柏樹(shù)皮含小檗堿、藥根堿、木蘭花堿、黃柏堿、N－甲基大麥芽堿、巴馬汀、蝙蝠葛堿等多種生物堿，另含黃柏酮、黃柏內(nèi)脂、白鮮交酯、黃柏酮酸等成分。黃柏膠囊內(nèi)容物為黃色粉末，主要用于清熱燥濕、瀉火除蒸、解毒療瘡等［1］。現(xiàn)代藥理試驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)，黃柏對(duì)多種病原性細(xì)菌具有不同程度的抑制或殺滅作用［1－2］，但未見(jiàn)關(guān)于黃柏與抗生素聯(lián)合抗菌的相關(guān)報(bào)道。

1 材料與方法

1.1 黃柏膠囊 每粒0.5 g，相當(dāng)于原藥材1 g，由貴陽(yáng)新天藥業(yè)股份有限公司提供，批號(hào)111002。

1.2 菌種 金黃色葡萄球菌(ATCC26112－5)、大腸埃希菌(ATCC25922)、白假絲酵母菌(ATCC10231)，中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院微生物教研室保存;銅綠假單胞菌(臨床分離菌株)、肺炎克雷伯菌(臨床分離菌株)、新生隱球菌(臨床分離菌株)，由貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院微生物教研室鑒定、保存。

1.3 培養(yǎng)基 水解酪蛋白液體培養(yǎng)基(M－H液體培養(yǎng)基)，杭州天和微生物試劑有限公司，按2.5 g/100 mL配制，121℃20 min滅菌，貯于4℃?zhèn)溆?YPG培養(yǎng)基，按蛋白胨1%，酵母浸出物0.5%，葡萄糖2%配制，115℃ 10 min滅菌，貯于4℃?zhèn)溆谩?/p>

1.4 抗菌藥物 注射用頭孢曲松鈉，中諾藥業(yè)有限公司，批號(hào)110345015;硫酸阿米卡星注射液，蘇州第六制藥廠，批號(hào)090903;鹽酸林可霉素注射液，蘇州第六制藥廠，批號(hào)090103;氟康唑氯化鈉注射液，江西東亞制藥有限公司，批號(hào)2010110613。

1.5 方法

1.5.1 最低抑菌濃度(MIC)試驗(yàn)［3］用無(wú)菌雙蒸水將黃柏膠囊內(nèi)容物和各抗生素分別稀釋成系列濃度，用M－H液體基分別將金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌和肺炎克雷伯菌的24 h培養(yǎng)物稀釋成(0.5～1)×105個(gè)/mL，用YPG培養(yǎng)基分別將白假絲酵母菌和新生隱球菌的48 h培養(yǎng)物稀釋成(0.5～1)×105個(gè)/mL。在96孔板中，每孔分別加入90 μL菌液和10 μL不同稀釋度的黃柏膠囊內(nèi)容物溶液或抗生素溶液，同時(shí)設(shè)置不含藥物的各菌陰性對(duì)照和不含菌不含藥的空白對(duì)照。置孔板于恒溫孵育箱內(nèi)，37℃培養(yǎng)，24 h后觀察抗細(xì)菌作用結(jié)果，48 h后觀察抗真菌作用結(jié)果。觀察培養(yǎng)基中細(xì)菌或真菌的生長(zhǎng)情況，以完全無(wú)菌生長(zhǎng)的提取物最高稀釋度作為該藥的MIC。

1.5.2 分級(jí)抑菌濃度(FIC)指數(shù)測(cè)定［3－4］在96孔板中每孔加入80 μL菌液和10 μL不同稀釋度的黃柏膠囊內(nèi)容物溶液以及10μL一種不同稀釋度的抗生素溶液，用棋盤格法測(cè)得黃柏膠囊與4種抗菌藥聯(lián)合用藥的MIC，從而計(jì)算出FIC指數(shù)。黃柏膠囊與抗菌藥物配伍的作用效果通過(guò)FIC指數(shù)為判定依據(jù)。FIC指數(shù)=甲藥聯(lián)合時(shí)MIC/甲藥單用時(shí)MIC+乙藥聯(lián)合時(shí)MIC/乙藥單用時(shí)MIC。判斷標(biāo)準(zhǔn):FIC指數(shù)≤0.5為協(xié)同作用;FIC指數(shù)＞0.5～1為相加作用;FIC指數(shù)＞1～2為無(wú)關(guān)作用;FIC指數(shù)＞2為拮抗作用［5］。

2 結(jié) 果

2.1 黃柏膠囊的MIC實(shí)驗(yàn)結(jié)果 黃柏膠囊對(duì)金黃色葡萄球菌(MIC=2.5 g/L)、大腸埃希菌(MIC=12.5 g/L)以及單細(xì)胞真菌(白假絲酵母菌、新生隱球菌)(MIC=2.5 g/L)具有較好的抑制作用。而對(duì)于銅綠假單胞菌和肺炎克雷伯菌，100 g/L黃柏膠囊無(wú)抑菌作用(MIC均＞100 g/L)。

2.2 黃柏膠囊與抗菌藥物聯(lián)合抗菌作用 黃柏膠囊與林可霉素聯(lián)合用藥后對(duì)大腸埃希菌和銅綠假單胞菌及與頭孢曲松聯(lián)合用藥對(duì)肺炎克雷伯菌的抗菌作用，與阿米卡星聯(lián)合用藥的抗菌作用表現(xiàn)為拮抗作用外，黃柏膠囊分別與頭孢曲松、阿米卡星、林可霉素聯(lián)合用藥后對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯菌聯(lián)合用藥的抗菌作用均表現(xiàn)為協(xié)同作用(FIC=0.1～0.506)。黃柏膠囊與氟康唑聯(lián)合用藥后對(duì)白假絲酵母菌和新生隱球菌均表現(xiàn)為協(xié)同作用(FIC=0.314)，見(jiàn)表1。

3 討 論

隨著抗菌藥物的廣泛應(yīng)用，細(xì)菌的耐藥性也日益增加，造成了臨床治療細(xì)菌性感染的困難。中草藥在現(xiàn)代預(yù)防和控制細(xì)菌性感染疾病方面發(fā)揮了積極作用，由于中藥的特殊性，細(xì)菌較少對(duì)中藥產(chǎn)生耐藥性，因此研究和開(kāi)發(fā)抗菌中藥對(duì)解決耐藥菌株的產(chǎn)生和抗生素短缺問(wèn)題具有重要意義［6］。

同一中草藥對(duì)不同菌，其抑菌效果存在著較大的差別，可能是藥物成分對(duì)不同菌作用機(jī)制不同所致，中草藥殺菌劑的研究，尤其是抗菌機(jī)制方面還處于研究階段。本研究通過(guò)微量液體稀釋法檢測(cè)了黃柏膠囊對(duì)多種病原性細(xì)菌和單細(xì)胞真菌的抑菌活性，黃柏膠囊對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌以及白假絲酵母菌和新生隱球菌表現(xiàn)出較好的抑菌活性(MIC=2.5～12.5 g/L)，其抗菌機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

民族藥黃柏是我省地產(chǎn)大宗藥材，含小蘗堿、苦味素、甾醇衍生物、巴馬亭、木蘭堿、黃柏堿等有效成分，目前我省黃柏膠囊已經(jīng)投入生產(chǎn)，主要用于清熱燥濕、瀉火除蒸、解毒療瘡等［1－2］。本研究證實(shí)，黃柏膠囊不僅本身具有抑菌活性，當(dāng)其與抗生素聯(lián)合應(yīng)用時(shí)大多數(shù)情況下表現(xiàn)為協(xié)同作用，此結(jié)果為黃柏?cái)U(kuò)大臨床應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。中藥成分聯(lián)合抗生素使用，能減少抗生素用量、提高療效，從而降低不良反應(yīng)，甚至能夠逆轉(zhuǎn)細(xì)菌對(duì)某些抗生素的耐藥性，這對(duì)于新型抗菌劑尤其是抗耐藥菌藥物的開(kāi)發(fā)是一個(gè)有效的途徑［7］，可望成為抗細(xì)菌感染治療的一個(gè)新突破。

表1 黃柏膠囊與抗菌藥物聯(lián)合對(duì)常見(jiàn)病原菌的FIC指數(shù)

［1］李峰，賈彥竹.黃柏的臨床藥理作用［J］.中醫(yī)藥臨床雜志，2004，16(2):191

［2］呂燕寧，邱全瑛.黃柏抑菌效果的實(shí)驗(yàn)研究［J］.現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2005，21(20):2746 －2747

［3］李儀奎，金若敏，王欽茂，等.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.2版.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2006:755

［4］李明遠(yuǎn).微生物學(xué)與免疫學(xué)［M］.北京:高等教育出版社，2010:401

［5］Arikan S，Lozano-Chiu M，Paetznick V，et al.In vitro synergy of caspofungin and amphotericin B against Aspergillus and Fusarium spp［J］.Antimicrob Agents Chemother，2002，46(1):245 － 247

［6］曾春蘭，鐘振國(guó).中藥抗菌作用的研究進(jìn)展［J］.廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，5(1):51

［7］劉華鋼，申慶榮，劉麗敏.中藥抗菌研究進(jìn)展［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2010，21(2):463 －465