龍向淑，宋 方，黃 晶，吳 強

(貴州省人民醫(yī)院 心血管內(nèi)科， 貴州 貴陽 550002)

干擾素-α抑制大鼠血管平滑肌細胞增殖

龍向淑，宋 方，黃 晶，吳 強*

(貴州省人民醫(yī)院 心血管內(nèi)科， 貴州 貴陽 550002)

血管平滑肌細胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)過度增殖是血管成形術(shù)后再狹窄、動脈粥樣硬化及高血壓等血管增殖性疾病的共同病理基礎(chǔ)，有效抑制VSMCs增殖對上述疾病的防治具有重要的臨床意義。干擾素(Interferon, IFN)具有抗病毒、免疫調(diào)節(jié)及抑制腫瘤細胞增長等作用，但其對VSMCs增殖的影響及其機制尚未完全明確。本研究探討IFN-α對大鼠VSMCs增殖的影響及其部分機制，為其臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物和試劑(盒)：清潔級SD大鼠(雌性1只，雄性2只)，體質(zhì)量120～140 g[第三軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心，合格證號：SCXK(渝)2012-0003]。IFN-α(北京三元基因工程有限公司)；胎牛血清(fetal bovine serum，F(xiàn)BS)(Hyclone公司)；細胞周期檢測試劑盒(C1052)(碧云天公司)；100 bp DNA Ladder(北京天根公司)；RT-PCR試劑盒(TaKaRa公司)；PCR擴增引物由寶生物工程(大連)有限公司合成(表1)；P204抗體(Santa Cruz公司)；Western 中分子質(zhì)量蛋白Marker(北京康為世紀生物科技有限公司)。

1.2 細胞培養(yǎng)及實驗分組：按文獻[1]的方法進行VSMCs培養(yǎng)。取4～6代細胞用于實驗。實驗分3組，即對照組(control)、IFN-α干預(yù)組(IFN)和20% FBS+IFN-α組(F+I)；IFN組用終濃度為2×106U/L IFN-α干預(yù)6 h，F(xiàn)+I組予20% FBS刺激12 h后與IFN組同步加IFN-α，繼續(xù)培養(yǎng)48 h收集細胞。

1.3 MTT實驗：按文獻[2]的方法操作。

1.4 流式細胞術(shù)檢測細胞周期：按試劑盒(C1052)說明書操作。

1.5 RT-PCR檢測mRNA表達：常規(guī)提取總RNA和反轉(zhuǎn)錄，定量PCR擴增目的基因。

1.6 Western blot 檢測蛋白表達：按文獻[2]的方法操作。

表1 引物序列Table 1 The sequences of primers

2 結(jié)果

2.1 IFN-α對VSMCs增殖及細胞周期的影響：與對照組比較，IFN組、F+I組的MTT吸光度A值降低(P<0.05)；IFN和F+I組的G0/G1期細胞增多，S期細胞減少(P<0.05)(表2)。

2.2 IFN-α對P204 mRNA及蛋白表達的影響：IFN組、F+I組的P204 mRNA及蛋白表達較對照組升高(P<0.05)(圖1，表2)。

3 討論

VSMCs增殖是血管增殖性疾病重要的病理改變。VSMCs增殖是多階段及多因子參與的調(diào)節(jié)過程，抑制VSMCs增殖、遷移以及表型轉(zhuǎn)化等是血管增殖性疾病領(lǐng)域研究的熱點和難點。

IFN是一組具有抗病毒、抗增殖、影響細胞生長和分化、調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答等功能的活性細胞因子家族。IFN與相應(yīng)受體結(jié)合，誘導(dǎo)一系列IFN誘導(dǎo)蛋白的表達而發(fā)揮其抗病毒及影響細胞增殖等生物學(xué)效應(yīng)。IFN的抗病毒及免疫調(diào)節(jié)功效已明確，而其調(diào)節(jié)細胞生長的功能，如抗增殖、促凋亡或存活、促進衰老和分化及抑制血管生成的作用及機制尚存在爭議。P204(interferon-inducible protein 204, P204)是IFN誘導(dǎo)蛋白P200家族的鼠類蛋白成員。近期研究[2]表明，IFN-α可促進P204表達而抑制大鼠主動脈外膜成纖維細胞增殖。本結(jié)果顯示， IFN-α干預(yù)可降低VSMCs細胞活力，阻滯或延緩VSMCs細胞周期由G0/G1期進入S期，在此過程中，伴P204 mRNA和蛋白表達上調(diào)；同時，IFN-α可抑制胎牛血清的促VSMCs增殖作用，同樣觀察到P204 mRNA和蛋白表達上調(diào)，更進一步證實，IFN-α可通過上調(diào)P204表達抑制VSMCs增殖。

表2 IFN-α對VSMCs 增殖和P204表達的影響Table 2 Effect of IFN-α on proliferation of VSMCs and expression of P204(±s,n=3)

*P<0.05 compared with control.

IFN.IFN-α induction group; F+I.20% FBS+ IFN-α group; control.control group圖1 干擾素-α對P204 mRNA及蛋白表達的影響Fig 1 Effect of IFN-α on expression of P204 mRNA and protein in VSMCs

綜上所述， IFN-α可通過上調(diào)P204表達抑制鼠VSMCs增殖，為血管增殖性疾病的研究和防治展示了新的前景。

[1] 宋方,吳強,陸德琴,等.一套系統(tǒng)培養(yǎng)鼠主動脈血管壁細胞簡單可靠的方法[J].中國動脈硬化雜志,2011,19:361- 366.

[2] 宋方,吳強,潭洪文,等.IFNα通過p204抑制大鼠主動脈外膜成纖維細胞增殖[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床, 2012, 32:1431- 1436.

2013- 09- 26

2013- 11- 22

貴州省優(yōu)秀科技教育人才省長專項資金(No. 黔省專合字[2009]30號)

*通信作者(correspondingauthor)： gzgywq@126.com

1001-6325(2014)08-1106-02

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